一种气相色谱‑质谱酸枣仁油特征图谱的构建方法及应用，属于检测技术领域，可解决现有对酸枣仁油的评价方法处理工艺复杂的问题，包括如下步骤：（1）酸枣仁药材粉末经石油醚索氏提取得酸枣仁油，经衍生化后过滤膜得测试样品；（2）经气相色谱‑质谱联用技术测定酸枣仁油化学特征图谱；（3）经图谱分析确定酸枣仁油特征图谱中包含9个特征峰。本发明专利技术样本前处理简洁、方便、重现性好，且能准确反映酸枣仁油的某些重要的特征信息，可用于酸枣仁油的质量。
A Method for Constructing Characteristic Map of Jujube Seed Oil by Gas Chromatography-Mass Spectrometry and Its Application
【技术实现步骤摘要】
一种气相色谱-质谱酸枣仁油特征图谱的构建方法及应用
本专利技术属于检测
，具体涉及一种气相色谱-质谱酸枣仁油特征图谱的构建方法及应用，酸枣仁油特征图谱分析和相似度评价，为酸枣仁油的质量控制提供新的检测方法。
技术介绍
酸枣仁始载于东汉末年《神农本草经》，1977年收录《中国药典》，自古以来都被列为宁心安神的良药，是国家卫计生委最早颁布的“既是食品又是中药材物质”的中药材之一。研究表明，酸枣仁的主要化学成分有皂苷、黄酮、生物碱等次级代谢物以及脂肪酸、氨基酸、核酸、糖类等初级代谢物。其中酸枣仁油占30％以上，大部分为脂肪酸类物质。现代药理研究表明，酸枣仁油具有镇静、催眠、改善学习记忆的作用。故酸枣仁油产品作为改善睡眠的保健品活跃在医疗保健市场。理枣仁为酸枣仁同科同属植物滇刺枣ZiziphusmauritianaLam.的成熟种子，其外形与酸枣仁及其相似，药材市场以理枣仁充当酸枣仁的现象普遍存在。但二者价格悬殊，酸枣仁为理枣仁价位的5到6倍。为防止不良商家谋取暴力，损害消费者利益，因此急需建立一种有效的方法对酸枣仁油进行质量控制。目前，国内学者张志斐建立了河北道地药材酸枣仁脂肪油GC-MS特征图谱。但其样品前处理复杂，仅采用相似度值对酸枣仁和理枣仁进行了区别。吴和珍等学者进行超临界二氧化碳萃取酸枣仁油的特征图谱研究，评价酸枣仁药材的一致性。该方法较为繁琐，不能实现酸枣仁油快速的鉴别。
技术实现思路
本专利技术针对现有对酸枣仁油的评价方法处理工艺复杂的问题，提供一种气相色谱-质谱酸枣仁油特征图谱的构建方法及应用。本专利技术采用如下技术方案：一种气相色谱-质谱酸枣仁油特征图谱的构建方法，包括如下步骤：第一步，酸枣仁油的提取：分别取各批次样品2g，置索氏提取中，加石油醚90mL，60～90℃下加热回流4h，回收石油醚，得到酸枣仁油；第二步，酸枣仁油的衍生化及供试样品溶液的制备：吸取各批次样品的酸枣仁油50μL，加入三甲基氯硅烷衍生化试剂150μL，放入恒温振荡金属浴中衍生1.5h后，经过0.22μm的滤膜，得到供试样品溶液；第三步，气相色谱-质谱联用测定酸枣仁油特征图谱：气相色谱测试条件为：GC-MS联用仪，30m×0.25mm×0.25μm的HP-5MS毛细管柱，载气为高纯氮气，流速为1.0mL/min，分流比为20:1，进样量为0.5μL，起始温度150℃，保持1min，然后以5℃/min升至215℃，保持18min，之后以5℃/min升至240℃，保持6min，然后以10℃/min升至270保持13min；质谱条件：EI电离70eV，离子源温度200℃，接口温度250℃，扫描范围50-500m/z；第四步，化学成分的定性鉴定：根据酸枣仁油的气相色谱-质谱谱图，使用Masshunter数据分析软件结合NIST14标准质谱图和相对保留指数，对化合物进行匹配，匹配度大于90％的化合物可作为鉴定结果。第二步中所述恒温振荡金属浴的温度为90℃，转速为300r/min。一种气相色谱-质谱酸枣仁油特征图谱的构建方法用于酸枣仁油的质量检测。本专利技术的有益效果如下：本专利技术采用气相色谱-质谱技术结合中药色谱特征图谱相似度评价系统建立一种方便、有效并能整体地对酸枣仁油进行质量控制的方法。本研究前处理采用直接衍生化的方法处理样品，简便省时，共鉴定出27成分，且该方法可以体现出饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸在酸枣仁油和理枣仁油成分中的特点。本研究对保证酸枣仁油在中药及保健食品原料、制剂中间产品的质量，及酸枣仁系列中药新药的开发具重要的意义。与现有技术相比具有如下优点和效果：1.样本前处理简单；2.使用Masshunter数据分析软件结合NIST14标准质谱图和相对保留指数对化合物进行匹配，共鉴定27个成分；3.本研究所建立的酸枣仁油特征图谱的9个特征峰均得到结构指认，相对峰面积占总峰面积的90％以上，可以更准确的评价酸枣仁油的质量。附图说明图1为酸枣仁油的总离子流色谱图；图2为理枣仁油的总离子流色谱图；图3为酸枣仁油特征图谱及对照特征图谱；图4为酸枣仁油特征成分的相对含量图；图5为酸枣仁油和理枣仁油PCA分析图；图6为酸枣仁油和理枣仁油的相对含量分析图。具体实施方式实施例1建立酸枣仁油特征图谱，包括如下步骤：步骤(1)样品的收集。具体如下：实验所用酸枣仁采购于河北安国药材市场和山西振东道地药材有限公司。经鉴定酸枣仁为鼠李科植物酸枣ZiziphusjujubeMill.Var.spinose(Bunge)HuexH.F.Chou的干燥成熟种子；理枣仁为鼠李科植物滇酸枣ZiziphusmauritianaLam.的干燥成熟种子。共收集了13批酸枣仁样品，保存于山西大学中医药现代研究中心。步骤(2)酸枣仁油提取。具体如下：取各批次样品分别精密称取2g，置索氏提取中，加石油醚(60～90℃)90mL，加热回流4小时，回收石油醚，得酸枣仁油和理枣仁油。步骤(3)衍生化及供试品溶液的制备。具体如下：吸取各批次样品的油50μL，加入TMCS(三甲基氯硅烷)衍生化试剂150μL，放入恒温振荡金属浴(型号：MixingBlockMB-102)中以温度为90℃，转速300r，衍生1.5h，过0.22μm滤膜，即得供试品溶液。步骤(4)气相色谱-质谱分析。具体如下：仪器及试剂：GC-MS联用仪(Agilent5977B气质联用仪，G4513A自动进样器，四级杆质量分析器)；HP-5MS毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)，TMCS(三甲基氯硅烷)衍生化试剂150μL，恒温振荡金属浴(型号：MixingBlockMB-102)。气相色谱条件：HP-5MS毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)，载气为高纯氮气，流速为1.0mL/min，分流比为20:1，进样量为0.5μL，进口温度为，传输线温度，程序升温：起始温度150℃，保持1min，然后以5℃/min升至215℃，保持18min，之后以5℃/min升至240℃，保持6min，然后以10℃/min升至270℃保持13min。质谱条件：EI电离70eV，离子源温度200℃，接口温度250℃，扫描范围m/z50-500。步骤(5)化学成分定性鉴别。具体如下：按照步骤(2-4)的方法，获得酸枣仁油的气相色谱-质谱谱图(见图1)。使用Masshunter数据分析软件结合NIST14标准质谱图和相对保留指数对化合物进行匹配，匹配度大于95％的化合物可作为鉴定结果。对总离子流图中的各峰经质谱计算机数据系统检索及核对NIST14LIBRARY标准质谱图库，匹配度大于95％的化合物可作为鉴定结果。共鉴定出27个成分，见表1。表1酸枣仁和理枣仁油中鉴定的化学成分步骤(6)特征图谱方法学验证。具体如下：a.精密度试验称取S1样品2g，按照步骤(2)和步骤(3)样品前处理方法制备供试品溶液，按照步骤(4)色谱质谱条件连续进样6次，采集图谱。采用中药色谱特征图谱相似性评价软件进行处理，相似度均大于0.99，表明仪器精密度良好。b.重复性试验称取S1样品2g，共6份，分别按照步骤(2)和步骤(3)样品前处理方法制备供试品溶液，按照步骤(4)色谱质谱条件进样，采集图谱。采用中药色谱特征图谱相似性评价软件进行处理，相似度本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种气相色谱‑质谱酸枣仁油特征图谱的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：第一步，酸枣仁油的提取：分别取各批次样品2g，置索氏提取中，加石油醚90mL，60~90℃下加热回流4h，回收石油醚，得到酸枣仁油；第二步，酸枣仁油的衍生化及供试样品溶液的制备：吸取各批次样品的酸枣仁油50μL，加入三甲基氯硅烷衍生化试剂150μL，放入恒温振荡金属浴中衍生1.5h后，经过0.22μm的滤膜，得到供试样品溶液；第三步，气相色谱‑质谱联用测定酸枣仁油特征图谱：气相色谱测试条件为：GC‑MS联用仪，30 m×0.25 mm×0.25 μm 的HP‑5MS毛细管柱，载气为高纯氮气，流速为1.0 mL/min，分流比为20:1，进样量为0.5 μL，起始温度150℃，保持1 min，然后以5℃/min升至215 ℃，保持18 min，之后以5 ℃/min升至240 ℃，保持6 min，然后以10℃/min升至270保持13 min；质谱条件：EI电离70 eV，离子源温度200 ℃，接口温度250 ℃，扫描范围50‑500m/z；第四步，化学成分的定性鉴定：根据酸枣仁油的气相色谱‑质谱谱图，使用Masshunter数据分析软件结合NIST14标准质谱图和相对保留指数，对化合物进行匹配，匹配度大于90%的化合物可作为鉴定结果。...
【技术特征摘要】
1.一种气相色谱-质谱酸枣仁油特征图谱的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：第一步，酸枣仁油的提取：分别取各批次样品2g，置索氏提取中，加石油醚90mL，60~90℃下加热回流4h，回收石油醚，得到酸枣仁油；第二步，酸枣仁油的衍生化及供试样品溶液的制备：吸取各批次样品的酸枣仁油50μL，加入三甲基氯硅烷衍生化试剂150μL，放入恒温振荡金属浴中衍生1.5h后，经过0.22μm的滤膜，得到供试样品溶液；第三步，气相色谱-质谱联用测定酸枣仁油特征图谱：气相色谱测试条件为：GC-MS联用仪，30m×0.25mm×0.25μm的HP-5MS毛细管柱，载气为高纯氮气，流速为1.0mL/min，分流比为20:1，进样量为0.5μL，起始温度150℃，保持1min，然后以...
【专利技术属性】
技术研发人员：闫艳，申晨曦，杜晨晖，裴香萍，张福生，张丽增，
申请(专利权)人：山西大学，山西中医药大学，
类型：发明
国别省市：山西,14
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