The invention discloses an indirect ELISA detection kit for pseudorabies virus. It includes preparation of recombinant antigen protein, establishment of indirect ELISA method, criteria for determination and clinical serological application. The preparation method of the antigen recombinant protein is as follows: the sequence shown in SEQ ID NO:2 is synthesized artificially, the plasmid expression vector is constructed, expressed in E. coli in prokaryotic form, and finally obtained by affinity purification with nickel column. The kit is used to detect the antibody of pseudorabies virus. It has a more accurate detection effect for the epidemic virus after 2001. The accuracy of the kit is manifested in that the test results are in better agreement with the neutralization test of the micro-serum antibody based on the epidemic strain, so it is more in line with the actual level of antibody protection in clinical practice.
【技术实现步骤摘要】
一种伪狂犬病病毒的间接ELISA检测试剂盒
本专利技术属于兽医生物
,涉及一种伪狂犬病病毒的间接ELISA检测试剂盒。
技术介绍
猪伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由猪伪狂犬病病毒(PRV)引起的一种烈性传染病,主要引起母猪流产、死胎,仔猪出现神经症状,对养猪业危害极大。多年以来,我国采用的PR疫苗主要基于疫苗株Batha-K61制备,并取得较好的效果。然而2011年以来,在我国北方多个省份相继暴发猪伪狂犬病,继而向全国蔓延,其流行特征为Batha-K61等经典疫苗株不能提供足够的保护,并且致死率高。我国学者研究认为,猪伪狂犬病病毒的流行是由于病毒的变异造成。交叉中和试验表明,2011年以来的流行毒株的免疫原性与之前的经典毒株已经有了一定的差异。基因测序结果表明,与经典毒株相比,病毒在gB、gC、gD和gE等多个关键基因都发生了特征性的重大变异。由于流行毒株的变异,不仅急需更换与之相匹配的疫苗,而且需要建立与之相匹配的检测技术,一则用于新疫苗的抗体监控和免疫评价,二则用于建立与变异株疫苗相匹配的免疫程序,以适应针对当前流行毒株的防控需要。酶联免疫吸附试验(ELISA)是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术,其用于检测特异性抗体,具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。该技术在猪伪狂犬病的防控中发挥了重要的作用。其中针对gB蛋白的抗体ELISA检测,是猪伪狂犬病抗体监测和免疫效果评价的最重要和最常用的方法。研究发现,2011年以来的猪伪狂犬病病毒,与经典的Batha-K61等传统疫苗株相比,基 ...
【技术保护点】
1.SEQ ID NO:1所示氨基酸序列在制备伪狂犬病毒间接ELISA检测试剂盒中的应用。
【技术特征摘要】
1.SEQIDNO:1所示氨基酸序列在制备伪狂犬病毒间接ELISA检测试剂盒中的应用。2.SEQIDNO:2所示核酸序列在制备伪狂犬病毒间接ELISA检测试剂盒中的应用。3.一种伪狂犬病毒的间接ELISA检测试剂盒,其特征在于,其组成包括:重组蛋白包被抗原、阳性对照血清、阴性对照血清、封闭液、酶标二抗、显色液及终止液和洗涤液;所述重组蛋白包被抗原中含有SEQIDNO:1所示氨基酸序列。4.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述封闭液为含脱脂奶的PBST溶液,脱脂奶浓度为3g/100mL~5g/100mL。5.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述酶标二抗为HRP标记的羊抗猪IgG。6.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述显色液为TMB底物液;所述终止液为:1.2mol/L~2mol/L硫酸。7.根据权利要求3所述的试剂盒,其特征在于,所述洗涤液为PBST缓冲液。8.一种伪狂犬病毒的间接ELISA检测方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)包被:用碳酸缓冲盐溶液稀释重组蛋白包被抗原,将重组蛋白包被抗原稀释为0.90mg/L,每孔加入80~120μL,3~7℃包被2...
【专利技术属性】
技术研发人员:黄元,向华,王晓虎,陈晶,
申请(专利权)人:广东省农业科学院动物卫生研究所,
类型:发明
国别省市:广东,44
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