血浆/血清外泌体miRNA作为青光眼诊断标志物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种hsa‑miR‑21‑5p和/或hsa‑miR‑15b‑5p和/或hsa‑miR‑424‑5p作为青光眼诊断标志物中的应用，研究实验表明hsa‑miR‑21‑5p和/或hsa‑miR‑15b‑5p和/或hsa‑miR‑424‑5p在原发性青光眼患者的血液分离出的外泌体中表达上调，本发明专利技术提供了hsa‑miR‑21‑5p和/或hsa‑miR‑15b‑5p和/或hsa‑miR‑424‑5p表达水平的产品在制备青光眼疾病诊断工具中的应用。

【技术实现步骤摘要】
血浆/血清外泌体miRNA作为青光眼诊断标志物中的应用
本专利技术涉及分子诊断
，具体涉及到血浆/血清外泌体miRNA制备青光眼疾病诊断工具中的应用。
技术介绍
视觉作为人和动物最重要的感觉，至少有80％以上的外界信息经视觉获得。青光眼是全球第二位致盲性眼病和首位不可逆性致盲眼病，是因为病理性高眼压等各种原因导致视神经萎缩、视野缺损，最终导致失明的一种神经退行性病变。目前临床治疗以降低眼压和神经保护为主，但仍有约10％的患者最终失明，不能有效的控制视网膜神经节细胞(RGCs)进行性凋亡和促进损伤后修复再生是瓶颈所在。青光眼意味着不可逆性RGCs损伤的开始，可能会伴随患者终身，严重威胁着身心健康和生活质量。目前，中国40岁以上青光眼患者已超过940万，预计到2020年，中国将有2100万的青光眼患者，产生近630万盲人及超过1000万的视觉残障人士，严重威胁着人们的身心健康和生活质量，已成为重大公共卫生问题。而研究认为，因青光眼早期并无明显症状，临床诊断时30-50％的RGCs已丢失，这也表明了早期诊断的重要性。miRNA是一种内源性的具有调控功能的非编码单链小分子RNA，长度约为20-24个核苷酸，通过引导沉默复合体降解mRNA或阻碍其翻译，在转录后水平调控基因表达。在物种进化中相当保守，其组织特异性和时序性决定组织细胞的功能特异性。miRNA的生物学功能包括调控细胞增殖、分化、凋亡、代谢、迁移等等，在视网膜神经生长发育中也起着重要作用。目前，miRNA作为一种早期诊断的生物标志物在临床发展中已经显示出极大的前景。外泌体是一种包含了复杂的RNA和蛋白质的直径约40-100nm的盘状囊泡。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体，广泛存在于各种体液中，包括：血清、血浆、细胞培养上清等。近年来的研究显示，外泌体作为一种细胞间的通讯分子，可参与诸多生理及病理过程。由于其本身对具有富集作用以及双层膜结构的保护作用，外泌体所携带的miRNA较循环miRNA更为稳定，因而外泌体来源RNA更有望在各种疾病早期筛查与诊疗方案指导、疗效评估及预后测评领域发挥作用，具有极高的临床应用价值和市场前景。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的在于提供一种用于青光眼早期诊断的miRNA标记物，对青光眼的发病检测有重要意义。为实现上述目的，本专利技术提供一种检测样品中hsa-miR-21-5p和/或hsa-miR-15b-5p和/或hsa-miR-424-5p表达水平的产品在制备青光眼疾病诊断工具中的应用，其中hsa-miR-21-5p的序列如SEQIDNO.19所示：SEQIDNO.19：UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA；其中hsa-miR-15b-5p的序列如SEQIDNO.20所示：SEQIDNO.20：UAGCAGCACAUCAUGGUUUACA；其中hsa-miR-424-5p的序列如SEQIDNO.21所示：SEQIDNO.21：CAGCAGCAAUUCAUGUUUUGAA。作为本专利技术的进一步改进，所述青光眼疾病的类别为原发性青光眼疾病。作为本专利技术的进一步改进，其中包括使用实时荧光定量PCR检测hsa-miR-21-5p和/或hsa-miR-15b-5p和/或hsa-miR-424-5p表达水平的制剂，检测所述hsa-miR-21-5p和/或hsa-miR-15b-5p和/或hsa-miR-424-5p的表达水平。作为本专利技术的进一步改进，用实时荧光定量PCR检测hsa-miR-21-5p和/或hsa-miR-15b-5p和/或hsa-miR-424-5p表达水平的制剂包括特异性扩增hsa-miR-21-5p和/或hsa-miR-15b-5p和/或hsa-miR-424-5p的引物。作为本专利技术的进一步改进，用实时荧光定量PCR检测hsa-miR-15b-5p表达水平的特异性扩增hsa-miR-15b-5p的引物序列如SEQIDNO.13-14所示：F:5'-ACACTCCAGCTGGGTTAGCAGCACATCAT-3’；R:5’-CACAGCTCGTAGAACAGGAGG-3’。作为本专利技术的进一步改进，用实时荧光定量PCR检测hsa-miR-21-5p表达水平的特异性扩增hsa-miR-21-5p的引物序列如SEQIDNO.15-16所示：F:5'-ACACTCCAGCTGGGTAGCTTATCAGACTGAT-3’R:5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGTCAACA-3’。作为本专利技术的进一步改进，用实时荧光定量PCR检测hsa-miR-424-5p表达水平的特异性扩增hsa-miR-424-5p的引物序列如SEQIDNO.17-18所示：F:5'-GGCAGCAGCAATTCATG-3’R:5’-CAGTGCGTGTCGTGGAG-3’。作为本专利技术的进一步改进，所述样品来源于血浆或血清或血浆外泌体或血清外泌体。本专利技术发现相对于正常人群，hsa-miR-21-5p和/或hsa-miR-15b-5p和/或hsa-miR-424-5p在原发性青光眼患者的血液分离出的外泌体中表达上调。提示hsa-miR-21-5p和/或hsa-miR-15b-5p和/或hsa-miR-424-5p是有助于青光眼诊断的生物标志物。本专利技术为青光眼诊断提供了强有力的分子生物学基础，具有深远的临床意义和推广性。附图说明图1为韦恩图显示PACG与POAG差异血浆外泌体miRNAs；图2为Control、PACG、AACG、CACG患者血液外泌体中的hsa-miR-29a-3p表达量；图3为Control、PACG、AACG、CACG患者血液外泌体中的hsa-miR-29b-3p表达量；图4为Control、PACG、AACG、CACG患者血液外泌体中的hsa-miR-29c-3p表达量；图5为Control、PACG、AACG、CACG患者血液外泌体中的hsa-miR-15b-5p表达量；图6为Control、PACG、AACG、CACG患者血液外泌体中的hsa-miR-21-5p表达量；图7为Control、PACG、AACG、CACG患者血液外泌体中的hsa-miR-424-5p表达量。具体实施方式下面将结合附图以及实施例对本专利技术做进一步的详述，而非限制本专利技术。1.1实验组标本的准备：收集的231例患者血样均来自于2016年4月至2018年3月间温州医科大学附属眼视光医院门诊或住院患者，其中原发性开角型青光眼80例，原发性闭角型青光眼131例。同期收集单纯性白内障对照组120例。受试者中排除了伴有全身性疾病、眼部患有其它疾病以及手术等病例，排除糖尿病、高血压等慢性疾病以及感染等伴有全身性疾病患者；排除眼部患有其它疾病或手术史患者。病例的情况如表1所示。下文中出现的简称分别表示：PACG:原发性闭角型青光眼，POAG:原发性开角型青光眼，Control为单纯性白内障，AACG为原发性急性闭角型青光眼；CACG为原发性慢性闭角型青光眼。表1(1)提取血浆：用EDTA抗凝管采集患者静脉血5ml，4℃静置30min，4℃2000×g离心10min后抽提上层黄色半透明血浆并分装至E本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测样品中hsa‑miR‑21‑5p和/或hsa‑miR‑15b‑5p和/或hsa‑miR‑424‑5p表达水平的产品在制备青光眼疾病诊断工具中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测样品中hsa-miR-21-5p和/或hsa-miR-15b-5p和/或hsa-miR-424-5p表达水平的产品在制备青光眼疾病诊断工具中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述青光眼疾病的类别为原发性青光眼疾病。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，其中包括使用实时荧光定量PCR检测hsa-miR-21-5p和/或hsa-miR-15b-5p和/或hsa-miR-424-5p表达水平的制剂，检测所述hsa-miR-21-5p和/或hsa-miR-15b-5p和/或hsa-miR-424-5p的表达水平。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，用实时荧光定量PCR检测hsa-miR-21-5p和/或hsa-miR-15b-5p和/或hsa-miR-424-5p表达水平的制剂包括特异性扩增hsa-miR-21-5p和/或hsa-miR-15b-5p和/或hsa-miR-424-5p的引物。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，用实时荧光定量PCR检测hsa-miR-15b-5p表达水平的特异性扩增hs...

【专利技术属性】
技术研发人员：池在龙，张文梦，关吉田，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33