一种生物菌肥及其制备方法和防治白绢病、改良土壤环境的应用技术

本发明专利技术公开了一种生物菌肥及其制备方法和防治白绢病、改良土壤环境的应用，属于微生物技术领域。该生物菌肥由下述原料按质量份数经发酵、包埋、干燥制成：包埋菌体A 40份，包埋混合菌体B 60份。本发明专利技术不但能够抑制白绢病，而且还具改良土壤微生物环境，吸附土壤重金属的作用。本发明专利技术采用包埋的方法克服实际生产过程中微生物损失比较大、不易保存、有效菌含量过低等问题，提高了菌肥的使用效率。与传统的化学农药防治相比，本发明专利技术的菌肥无农残，对环境友好。

【技术实现步骤摘要】
一种生物菌肥及其制备方法和防治白绢病、改良土壤环境的应用
本专利技术属于微生物
，涉及一种生物菌肥及其制备方法和防治白绢病、改良土壤环境的应用。
技术介绍
白绢病是农业中发病频率高、危害大的一类土传病害。引起白绢病的病原菌无性态为齐整小核菌(Sclerotiumrolfsii)。该病原菌于1891年美国首次在番茄感染白绢病中发现，此后全世界范围内陆续有不同作物感染白绢病的报道。已有的研究表明，白绢病菌植物寄主多种多样，涉及近600种植物，广泛分布于作物、蔬菜、花卉和中药材。已报道的寄主包括玉米、大豆、花生、棉花、棉花、马铃薯、附子、茄子、蝴蝶兰等。齐整小核菌在10～35℃下均可生长，其中25～35℃时，菌丝生长速度快。低于10℃时，生长很慢。其菌丝主要在土壤表面或表层生长扩展，最适条件下每天的生长扩展距离达2.9cm，可导致植物茎基部腐烂而引起死亡。当入夏温度升高，湿度增加时，齐整小核菌生长异常迅速，植物之间传染速度加快。如果不能及时防治，可能导致绝收。加之齐整小核菌(Sclerotiumrolfsii)以菌核或菌丝在土壤中或者植物病残体中越冬，菌核在土壤中存活期长，高达5～6年，具有危害时间长、越冬场所快、防控难度大的特点。因此如何有效防治齐整小核菌引发的白绢病是目前农业生产中面临的一大难题。目前农业中防治齐整小核菌引发的白绢病的手段有多种。主要包括以下几类。(1)化学防治。目前报道单施一种或联合使用几种化学药剂成功防治不同植物白绢病的报道。这些化学药剂包括苯菌灵、百菌清、代森锰锌、氟硅唑、恶霉灵等。也有化学药剂与肥料混合使用成功防治白绢病的报道。该方法操作简单，防治效率高，但容易引起土壤和植物的农药残留，污染环境。(2)农业防治。包括及时清除病残枝条、使用不同的肥料、合理轮作与套作等。该方法虽然操作简单，对环境友好，但整体防治白绢病的效果一般。(3)生物防治。目前报道的对齐整小核菌有很好防治效果的生防菌包括哈茨木霉(Trichodermaharzianum)、木霉(Trichodermasp.)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)和枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)等。此外也有将氮肥和哈茨木霉合理搭配后可以很好防治白绢病的报道。生物防治具有专一性强、绿色环保的优点，因此生防菌防治白绢病一直是的研究与应用的热点。在专利号为CN106854098A公开了一种防治甜叶菊白绢病的菌肥添加剂及制备方法，包括甜叶菊渣、茶渣、紫草、地榆、南瓜藤、豌豆麸、石灰、草木灰、芽孢杆菌、木霉菌、绿黏帚霉菌。利用芽孢杆菌、木霉菌、绿黏帚霉菌等也可有效防治花生白绢病。但目前这些生防菌肥防治白绢病存在一些不足，导致其防治效果难以达到预期。正如前面所提及的，齐整小核菌的寄主植物种类多，菌核在土壤中存活期长。用化学药剂防治后，土壤中农药与重金属残留量大。在后期种植中，施用目前报道的这些生防菌的过程中，土壤中残留的大量的农药与重金属可以抑制这些生防菌的存活，从而降低其生防效果。加之不同的生防菌之间简单复配后，在合适的温度与湿度条件下，相互之间能产生很强的拮抗效果，也会降低生防菌肥的效果。研发既能降低土壤农药与重金属残留量，又能提高防治白绢病的生物菌肥具有重要的现实意义。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种生物菌肥及其制备方法和防治白绢病、改良土壤环境的应用。为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：本专利技术公开的一种生物菌肥，以质量份数计，包括：40份包埋菌体A和60份包埋混合菌体B；所述包埋菌体A是以海藻酸钠包埋巨大假单胞菌制成，海藻酸钠与巨大假单胞菌的质量比为3:1；所述包埋混合菌体B是以聚乙烯醇和海藻酸钠包埋LysobacteryanansisSNNU513和解淀粉芽孢杆菌的混合菌制成，聚乙烯醇、海藻酸钠以及LysobacteryanansisSNNU513和解淀粉芽孢杆菌的混合菌的质量比为7:6:1。本专利技术还公开了上述生物菌肥的制备方法，包括以下步骤：1)分别取巨大假单胞菌、LysobacteryanansisSNNU513菌和解淀粉芽孢杆菌，分别接种于LB培养基中，培养制备种子液；2)按10％的接种量，将巨大假单胞菌种子液接种于发酵液A中，经培养制得含有巨大假单胞菌的发酵液，再经离心处理，制得巨大假单胞菌；按10％的接种量，将LysobacteryanansisSNNU513菌接种于发酵液B中，经培养制得含有LysobacteryanansisSNNU513的发酵液，然后向该发酵液中按10％的接种量继续接种解淀粉芽孢杆菌，经培养制得含有两种菌的发酵液，再经离心处理，制得混合菌；3)按1g:100ml的用量比，将巨大假单胞菌与3％海藻酸钠溶液混合均匀后，加入4％CaCl2溶液，边滴边搅拌，形成固化小球，将固化小球在4℃交联固化24h，获得包埋巨大假单胞菌颗粒，将包埋巨大假单胞菌颗粒接种于发酵液A中，增殖培养，制得包埋菌体A；4)配制3.5％聚乙烯醇与3％海藻酸钠混合液，然后与步骤2)制得的混合菌按照100ml:1g的用量比混合均匀，滴入饱和硼酸中，形成固化小球，4℃交联固化24h，获得包埋混合菌颗粒，将包埋混合菌颗粒接种于发酵液B中，增殖培养，制得包埋菌体B；5)将包埋菌体A和包埋菌体B干燥后，按质量比4:6混匀，制得生物菌肥。优选地，发酵液A中包含蔗糖10g/l、酵母膏5g/l和MgSO41g/l；发酵液B中包含蔗糖33g/l、酵母提取物4g/l、胰蛋白胨4.5g/l、(NH4)2SO49g/l、CO(NH2)22g/l。优选地，步骤1)中，三种菌株的培养条件均为37℃、180r/min培养18～20h；步骤2)中，巨大假单胞菌的培养条件为37℃、180r/min培养2d；LysobacteryanansisSNNU513菌的培养条件为37℃、180r/min培养18h；加入解淀粉芽孢杆菌后，培养条件为37℃、180r/min培养1d；步骤3)和步骤4)中，增殖培养条件为30℃、180r/min培养3d；步骤2)中，离心是在4℃下，以6000r/min离心30min。优选地，步骤3)中，按照(5～10)g:1L的接种量，将包埋巨大假单胞菌颗粒接种于发酵液A中；步骤4)中，按照(5～10)g:1L的接种量，将包埋混合菌颗粒接种于发酵液B中。本专利技术还公开了上述生物菌肥在改善土壤环境中的应用。优选地，所述生物菌肥能够吸附土壤中的重金属Cr2+、Cu2+和Pb2+。优选地，所述生物菌肥能够将土壤中难溶性磷化合物转化为可溶性磷酸盐。本专利技术还公开了上述生物菌肥在防治植物白绢病中的应用，该生物菌肥能够防治由齐整小核菌(Sclerotiumrolfsii)引起的植物白绢病。优选地，在播种期采用穴施的方法将所述生物菌肥施于种子附近。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：1、本专利技术提供的生物菌肥属于多功能的菌肥，菌肥中的巨大假单胞菌既能吸附土壤中的Cr2+、Cu2+和Pb2+重金属离子，又能将难溶性磷转化为可溶性磷提供给植物使用，改良土壤环境的同时还可降低磷肥的施用量，促进植物生长。菌肥中的LysobacteryanansisSNNU513(C本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生物菌肥，其特征在于，以质量份数计，包括：40份包埋菌体A和60份包埋混合菌体B；所述包埋菌体A是以海藻酸钠包埋巨大假单胞菌制成，海藻酸钠与巨大假单胞菌的质量比为3:1；所述包埋混合菌体B是以聚乙烯醇和海藻酸钠包埋Lysobacter yanansis SNNU513和解淀粉芽孢杆菌的混合菌制成，聚乙烯醇、海藻酸钠以及Lysobacter yanansis SNNU513和解淀粉芽孢杆菌的混合菌的质量比为7:6:1。

【技术特征摘要】
1.一种生物菌肥，其特征在于，以质量份数计，包括：40份包埋菌体A和60份包埋混合菌体B；所述包埋菌体A是以海藻酸钠包埋巨大假单胞菌制成，海藻酸钠与巨大假单胞菌的质量比为3:1；所述包埋混合菌体B是以聚乙烯醇和海藻酸钠包埋LysobacteryanansisSNNU513和解淀粉芽孢杆菌的混合菌制成，聚乙烯醇、海藻酸钠以及LysobacteryanansisSNNU513和解淀粉芽孢杆菌的混合菌的质量比为7:6:1。2.权利要求1所述的生物菌肥的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)分别取巨大假单胞菌、LysobacteryanansisSNNU513菌和解淀粉芽孢杆菌，分别接种于LB培养基中，培养制备种子液；2)按10％的接种量，将巨大假单胞菌种子液接种于发酵液A中，经培养制得含有巨大假单胞菌的发酵液，再经离心处理，制得巨大假单胞菌；按10％的接种量，将LysobacteryanansisSNNU513菌接种于发酵液B中，经培养制得含有LysobacteryanansisSNNU513的发酵液，然后向该发酵液中按10％的接种量继续接种解淀粉芽孢杆菌，经培养制得含有两种菌的发酵液，再经离心处理，制得混合菌；3)按1g:100ml的用量比，将巨大假单胞菌与3％海藻酸钠溶液混合均匀后，加入4％CaCl2溶液，边滴边搅拌，形成固化小球，将固化小球在4℃交联固化24h，获得包埋巨大假单胞菌颗粒，将包埋巨大假单胞菌颗粒接种于发酵液A中，增殖培养，制得包埋菌体A；4)配制3.5％聚乙烯醇与3％海藻酸钠混合液，然后与步骤2)制得的混合菌按照100ml:1g的用量比混合均匀，滴入饱和硼酸中，形成固化小球，4℃交联固化24h，获得包埋混合菌颗粒，将包埋混合菌颗粒接种于发酵液B中，增殖培养，制得包埋菌体B；5)将包埋菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖光辉，陈佳阳，王丽娜，付盟，王冬阁，冯正平，闫亚平，崔浪军，
申请(专利权)人：陕西师范大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61