The invention belongs to the technical field of bacterial detection, in particular to a primer group of Salmonella, the use of the primer group, a kit containing the primer group and a detection method thereof. The primers group consisted of external primers, internal primers and probes. The external primers were F3 and B3, the internal primers were FIP and BIP. The nucleotide sequences of HP, F3, B3, FIP, BIP and BP were shown as SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.5, BIP was 5'biotin-labeled nucleotide sequence and HP was 5' isothiocyanate-labeled nucleotide sequence. The advantages of the invention are that the primer group provided by the invention has good specificity, the kit prepared by the primer group and its detection method have good specificity, high sensitivity, low cost, and does not need expensive equipment such as a PCR instrument. The results can be judged by naked eyes, and the accurate and specific detection of Salmonella can be applied to real-time, rapid and accurate detection of Salmonella at grass-roots or in the field.
【技术实现步骤摘要】
一种检测沙门氏菌的引物组、用途、试剂盒及其检测方法
本专利技术属于细菌检测
,具体涉及一种检测沙门氏菌的引物组,同时涉及该引物组的用途、利用该引物组制备的试剂盒及该使用试剂盒检测沙门氏菌的检测方法。
技术介绍
沙门氏菌(Salmonellaspp.)是一大群寄生于人类和动物肠道内的革兰氏阴性杆菌(G-),是肠杆菌科中最常见的人畜共患型致病菌。目前已知的沙门氏菌血清型超过2500种,除了不到10种罕见的血清型属于邦戈尔沙门氏菌外,其余血清型都属于肠道沙门氏菌,因此几乎所有的沙门氏菌都能引起严重的食物中毒事件。入侵作用是沙门氏菌进入机体,引起机体患病主要的关键因素,有毒力的沙门氏菌能入侵小肠粘膜上皮细胞,并穿越细胞层进入血液体循环。世界卫生组织(WTO)将沙门氏菌列入具有严重危害和中等危害的食物传播性病原菌。据统计,目前世界上54%的食源性致病是由沙门氏菌引起的,位居于前列,并且在过去16年由沙门氏菌引起发病率从未降低。然而,引起沙门氏菌中毒的食品中,约90%是肉、蛋、奶等畜产品,是人们生活中极为常见并且必需的食品,由此可见,沙门氏菌的污染严重影响着人们的生活。目前,对沙门氏菌的检测主要是以传统的细菌分离、血清型实验和生化鉴定等方法为主,通常需要5-7天的检测周期,存在操作繁琐、灵敏度低、准确率不高且需要的试剂多且杂等缺陷,不能满足对食品及时有效的质量监测和疾病控制的需求。同时,市面上也存在灵敏度更高的检测方法,如常规PCR检测技术,该方法也是检测机体或食物中沙门氏菌最常用的方法,但是该方法存在特异性低的缺陷,复杂样品中的某些成分对PCR扩增存在抑制作用 ...
【技术保护点】
1.一种检测沙门氏菌的引物组,其特征在于:所述引物组包括外引物、内引物和探针,其中外引物为F3和B3,内引物为FIP和BIP,探针为HP,所述F3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,所述B3的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示;所述FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示,所述BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示,所述BIP为5’生物素标记的核苷酸序列,所述HP的序列如SEQ ID NO.5所示,所述HP序列为5’异硫氰酸荧光素标记的核苷酸序列。
【技术特征摘要】
1.一种检测沙门氏菌的引物组,其特征在于:所述引物组包括外引物、内引物和探针,其中外引物为F3和B3,内引物为FIP和BIP,探针为HP,所述F3的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示,所述B3的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示;所述FIP的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示,所述BIP的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示,所述BIP为5’生物素标记的核苷酸序列,所述HP的序列如SEQIDNO.5所示,所述HP序列为5’异硫氰酸荧光素标记的核苷酸序列。2.一种检测沙门氏菌的试剂盒,其特征在于:包括权利要求1所述的引物组、LAMP扩增试剂、阳性质控品和阴性质控品,所述阳性质控品为沙门氏菌标准株基因组DNA,所述阴性质控品为双蒸水。3.根据权利要求2所述的检测沙门氏菌的试剂盒,其特征在于:所述LAMP扩增试剂包括浓度为10×的IsothermalAmplificationBuffer、浓度为8000U/mL的Bst2.0WarmStartDNA聚合酶、浓度为10mmol/L的dNTPsMIX和浓度为100mmol/L的MgSO4。4.根据权利要求3所述的检测沙门氏菌的试剂盒,其特征在于:所述浓度为10×的IsothermalAmplificationBuffer中包含浓度为200mmol/L的Tris-HCl、浓度为100mmol/L的(NH4)2SO4、浓度为500mmol/L的KCl、浓度为20mmol/L的MgSO4和体积百分数为0.1%的Tween20,所述IsothermalAmplificationBuffer的pH为8.8。5.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员:王红宁,梅雪然,翟熙雯,雷昌伟,叶晓兰,
申请(专利权)人:四川大学,
类型:发明
国别省市:四川,51
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