本发明专利技术公开了一种草鱼SNP标记，草鱼SNP标记为草鱼mstn1基因465ntC/G、草鱼mstn1基因467nt G/A、草鱼mstn2基因909nt C/T和草鱼mstn2基因1024nt G/A中的任一种、任两种、任三种或四种。mstn1基因的GenBank登录号为KM874826.1。mstn2基因的GenBank登录号为KM874827.1。本发明专利技术还公开了用于发现或检测该SNP的方法、引物组以及应用。该SNP标记能够用于检测或监测草鱼的体重、全长、体长、体高、头长、尾柄长、尾柄高、体厚或其任意种的组合或任两种的比值。
【技术实现步骤摘要】
一种与ENU诱变草鱼家系生长特性相关连的SNP标记及检测引物
本专利技术属于水产科学领域，涉及一种与ENU诱变草鱼家系生长特性相关连的SNP标记。
技术介绍
ENU(N-乙基-N-亚硝基脲)是一种常用的化学诱变剂，它能对基因组DNA碱基产生烷基化修饰，进而引起DNA在复制时发生错配导致突变体生成[1,2]。ENU主要诱发不定点的单碱基突变，没有任何的倾向性，从而使基因发生突变，其诱变模式与自然变异相似[3,4]。同时，ENU诱变效率很高，是其他诱变手段的10倍左右。在模式生物中，利用ENU获得大规模突变体进行功能基因的研究已成为常用手段。但在养殖鱼类中的应用报道很少。目前，仅前苏联报道采用ENU诱变结合雌核发育技术获得了鲤优良突变品系[5]。国内韩启霞等[6]采用ENU浸泡的方法诱变银鲫得到突变个体。草鱼(Ctenopharyngodonidellus)肌肉生长抑制素(Mstn)基因是一种肌细胞生长负向调控因子，具有抑制肌肉分化和生长的作用，其表达量与肌肉质量的变化呈负相关[7,8]。目前，mstn基因在哺乳动物方面针对功能及调控机理进行大量的研究[9-13]，在水产动物方面还处于cDNA克隆与表达，功能研究相对较少[14-17]。在鱼类中mstn基因存在两种亚型(mstn1、mstn2)并且时空表达具有较大的差异，濮剑威等[18]研究表明mstn1在草鱼肌肉、脑和眼中的转录量较高，mstn2只在脑和肌肉中有表达。并且通过注射mstn1型mRNA过表达可导致斑马鱼体节发生期胚胎的前-后轴拉长，背-腹轴变短，脊索轻微扭曲，以及体节发育受到强烈抑制而不分化等现象。注射mstn2型mRNA胚胎早期发育有所延迟并未发生明显变化，但发育至60h之后尾部明显发生严重弯曲。单核苷酸多态性(SNP)是指在基因组水平上由于单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。SNP作为第三代分子遗传标记在分子育种方面已经得到广泛的应用[19,20]。参考文献:[1]MullinsMC,HammerschmidtM,HaffterP,etal.Largescalemutagenesisinthezebrafish：insearchofgenescontrollingdevelopmentinavertebrate.CurrBiol,1994,4:189-202.[2]VanEedenFJ,GranatoM,OdenthalJ,etal.Developmentalmutantscreensinthezebrafish.MethCellBiol,1999,60:21-41.[3]HitotsumachiS,CarpenterDA,RussellWL.Dose-repetitionincreasesthemutageniceffectivenessofN-ethyl-N-nitrosoureainmousespermatogonia.ProcNatlAcadSciUSA,1985,82:6619-6621.[4]DrieverW,Solnica-KrezelL,SchierAF,etal.Ageneticscreenformutationsaffectsembryogenesisinzebrafish.Development,1996,123:37-46.[5]JinP,TianT,SunZ,eta1.GenerationofmutantswithdevelopmentaldefectsinzebrafishbyENUmutagenesis.ChineseSciBull2004,49:2154-2158.[6]韩启霞,常玉梅,梁利群等.ENU诱变银鲫F1的遗传差异分析.中国水产科学,2010.09,17(5),895-902.[7]MccroskeryS,ThomasM,PlattL,etal.Improvedmusclehealingthroughenhancedregenerationandreducedfibrosisinmyostatin-nullmice[J].JournalofCellScience,2005,118(15):3531-3541.[8]MarcqF,BarkoukiSEI,ElsenJM,etal.InvestigatingtheroleofmyostatininthedeterminismofdoublemusclingcharacterizingBelgianTexelsheep[J].AnimalGenetics,1998,29(Sup.1):52.[9]DunnerS,MirandaME,AmiguesY,etal.Haplotypediversityofthemyostatingeneamongbeefcattlebreeds[J].GeneticsSelectionEvolution,2003,35:103-118.[10]LangleyB,ThomasM,BishopA,etal.MyostatinInhibitsMyoblastDifferentiationbyDown-regulatingMyoDExpression[J].TheJournalofBiologicalChemistry,2002,277:49831-49840.[11]LeeSJ,LeeYS,ZimmersTA,etal.RegulationofMuscleMassbyFollistatinandActivins[J].MolecularEndocrinology,2010,24:1998-2008.[12]LeeSJ,McpherronAC.Regulationofmyostatinactivityandmusclegrowth[J].ProceedingsoftheNationalAcadSciences,2001,98(16):9306-9311.[13]XuC,WuG,ZoharY,etal.Analysisofmyostatingenestructure,expressionandfunctioninzebrafish[J].TheJournalofExperimentalBiology,2003,206:4067-4079.[14]BauerH,MeierA,HildM,etal.FollistatinandNogginAreExcludedfromtheZebrafishOrganizer[J].DevelopmentalBiology,1998,204:488-507.[15]RescanPY,JutelI,RalliereC.Twomyostatingenesaredifferentiallyexpressedinmyotomalmusclesofthetrout(Oncorhynchusmykiss)[J].TheJournalofExperimentalBiology,2001,204:3523–3529.[16]MedeirosEF,PhelpsMP,FuentesFD,etal.Overexpressionoffollistatinintroutstimulatesincreasedmu本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种草鱼SNP标记，所述草鱼SNP标记为草鱼mstn1基因465ntC/G、草鱼mstn1基因467nt G/A、草鱼mstn2基因909nt C/T和草鱼mstn2基因1024nt G/A中的任一种、任两种、任三种或四种。
【技术特征摘要】
1.一种草鱼SNP标记，所述草鱼SNP标记为草鱼mstn1基因465ntC/G、草鱼mstn1基因467ntG/A、草鱼mstn2基因909ntC/T和草鱼mstn2基因1024ntG/A中的任一种、任两种、任三种或四种。2.如权利要求1所述的SNP标记，其特征在于：所述mstn1基因的GenBank登录号为KM874826.1。3.如权利要求1所述的SNP标记，其特征在于：所述mstn2基因的GenBank登录号为KM874827.1。4.一种用于发现或检测如权利要求1或2或3所述的SNP标记的方法，所述方法包括如下步骤：(1)提取草鱼的基因组DNA。(2)用PCR方法扩增所述草鱼的基因组DNA，其中，针对所述草鱼mstn1基因465ntC/G，引物对(i)为：第一方向引物：5’-CGGTGCGTGGTGAGGTT，如SEQIDNO.1所示；第二方向引物：5’-CGCTTGGATTTTCGGACTGA，如SEQIDNO.2所示；针对所述草鱼mstn1基因467ntG/A，引物对(ii)为：第一方向引物：5’-TGTTGCTTTTTCTCCTTCAGTC，如SEQIDNO.3所示；第二方向引物：5’-CCCAAGTCCAGCCAGTA，如SEQIDNO.4所示；针对所述草鱼mstn2基因909ntC/T，引物对(iii)为：第一方向引物：5’-AGTGCTGTTTGGAGAGAGTGCGTAT，如SEQIDNO.5所示；第二方向引物：5’-GGGTGACATCTTGGTGG，如SEQIDNO.6所示；针对所述草鱼mstn2基因1024ntG/A，引物对(iv)为：第一方向引物：5’-ACTCCTGGCAGCACAT，如SEQIDNO.7所示；第二方向引物：5’-AGCCCGTCAAGTCATC，如SEQIDNO.8所示；(3)对PCR扩增产物...
【专利技术属性】
技术研发人员：邹曙明，王成龙，郑国栋，陈杰，周春雪，徐文迪，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：发明
国别省市：上海,31
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