多糖P2及其分离纯化方法和在制备降血脂药物中的应用技术

本发明专利技术公开了一种桃金娘多糖P2及其分离纯化方法和在制备降血脂药物中的应用，该多糖包含以下摩尔百分比的单糖：核糖8.25％，鼠李糖2.10％，阿拉伯糖53.75％，木糖5.16％，甘露糖8.22％，葡萄糖12.01％，半乳糖10.51％。本发明专利技术的实验结果表明，桃金娘多糖P2具有一定的体外结合胆酸盐能力，以考来烯胺作为阳性对照，按考来烯胺对各胆酸盐的结合率为100％计算，转换出桃金娘多糖P2对牛磺胆酸钠、甘氨胆酸钠、胆酸钠的相对结合率分别为：29.87％、47.49％、53.69％。

Polysaccharide P2 and Its Separation and Purification Method and Its Application in the Preparation of Hypolipidemic Drugs

The invention discloses a Myrtle polysaccharide P2 and its separation and purification method and application in the preparation of hypolipidemic drugs. The polysaccharide contains the following molar percentages of monosaccharides: ribose 8.25%, rhamnose 2.10%, arabinose 53.75%, xylose 5.16%, mannose 8.22%, glucose 12.01%, galactose 10.51%. The results of the present invention show that Myrtle polysaccharide P2 has certain ability to bind cholate in vitro. The relative binding rates of Myrtle polysaccharide P2 to sodium taurocholate, sodium glycochlorate and sodium cholate are 29.87%, 47.49% and 53.69% respectively, using colenemine as positive control and calculating the binding rate of colenemine to each cholate as 100%.

【技术实现步骤摘要】
多糖P2及其分离纯化方法和在制备降血脂药物中的应用
本专利技术属于天然产物(药物)领域，具体涉及一种桃金娘多糖P2及其分离纯化方法和在制备降血脂药物中的应用。
技术介绍
桃金娘(Rhodomyrtustomentosa)又名岗稔(广东)、豆稔干(广西)、石都捻子(《本草拾遗》)、倒捻子(《岭表录异》)、倒粘子(《苏沈良方》)等，广泛分布于南亚热带区域；在常绿阔叶林生态系统为优势种，覆盖度30～60％，呈先锋群落；在中国主要分布于岭南，是我国南方地区主要的林下植被，资源非常丰富，大多生于丘陵坡地、旷野、路边，而且野生桃金娘的分布面积广泛，但目前对其开发利用率较低，加工利用水平也相对较低，桃金娘属于一种尚未进行规模化开发利用的潜在的食品新资源。桃金娘的果实为浆果，成熟时果皮呈紫黑色，果肉则呈紫红色，肉质多汁，营养丰富。有研究表明，野生桃金娘果实成熟时，总糖含量占8.06％、还原糖占7.72％、果胶占1.01％、总酸占0.38％、蛋白质占1.30％、脂肪占0.32％、淀粉占3.08％、粗纤维占34.97％，维生素C含量为5.48mg/kg。桃金娘果实含有多糖类、黄酮类、皂苷类、多酚类、蒽醌类等多种活性成分，具有抗氧化、抗衰老、抗炎、抑菌、保肝等生物活性。作为一种野生植物资源，桃金娘在食品加工、保健品开发及医学药物研究等方面有着广阔的开发前景。
技术实现思路
本专利技术的首要目的在于提供一种桃金娘多糖P2，该多糖纯度高、具有生物活性。本专利技术的另一目的在于提供上述多糖P2的分离纯化方法，该方法是利用水提醇沉法对桃金娘果实进行多糖提取，并通过离子交换柱层析法对多糖进行分离纯化。本专利技术的再一目的在于提供上述多糖P2在制备降血脂药物中的应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种桃金娘多糖P2，包含以下摩尔百分比的单糖：核糖8.25％，鼠李糖2.10％，阿拉伯糖53.75％，木糖5.16％，甘露糖8.22％，葡萄糖12.01％，半乳糖10.51％；单糖的组成是由GC-MS面积归一化法计算出来的，是除溶剂峰外，把所有的出峰面积看作100％，计算主峰面积占总面积的百分数；上述桃金娘多糖P2的数均分子量(Mn)为2.57×104Da，重均分子量(Mw)为6.75×104Da。上述桃金娘多糖P2的分离纯化方法，包括以下步骤：(1)提取桃金娘果实多糖：将桃金娘果实烘干并粉碎，取其干粉和蒸馏水于回流装置中煮沸提取数次，合并提取液并减压浓缩，在浓缩液中加入数倍体积的95％(V/V)乙醇，不断搅拌使多糖均匀沉淀，然后在4℃下静置12h以上，离心收集沉淀，烘干后得桃金娘果实粗多糖；步骤(1)所述的煮沸提取，每次的提取时间优选4h；步骤(1)所述的离心优选5000r/min离心15min；(2)H2O2法脱色：取桃金娘果实粗多糖加蒸馏水溶解，调节pH值至8.0，然后一边滴加30％H2O2溶液，一边搅拌，直至溶液颜色变浅，随后在50℃水浴下保温2h；步骤(2)所述的粗多糖加蒸馏水溶解的浓度优选0.2g/mL；(3)Sevag法脱蛋白：在脱色后的多糖溶液中加入该溶液1/5体积的Sevag试剂，振荡培养20min，静置10min后离心，弃去下层有机相和中间层蛋白质与氯仿和正丁醇生成的凝胶物，重复该离心和弃去有机相、凝胶物的操作若干次；最后一次操作后，旋蒸除去溶液中残留的Sevag试剂，得到脱蛋白后的桃金娘果实多糖溶液，按步骤(1)的醇沉法收集沉淀，烘干后得初步纯化的桃金娘果实多糖；步骤(3)所述的Sevag试剂，是由氯仿和正丁醇按体积比5:1组成；步骤(3)所述的振荡培养，其转速优选150r/min；步骤(3)所述的离心优选4000r/min离心10min；(4)DEAE-Sepharosefastflow离子交换柱层析分离桃金娘果实多糖：DEAE-琼脂糖凝胶填料经预处理后装柱，步骤(3)的初步纯化的桃金娘果实多糖用去离子水溶解后过0.45μm微孔滤膜，然后上柱；先用蒸馏水洗脱，每0.1g桃金娘果实多糖用150mL蒸馏水洗脱，不收集流分；然后用浓度为0.1mol/L的NaCl溶液洗脱，每5mL收集一管洗脱液，用苯酚-硫酸法检测洗脱液在检测波长为490nm的吸光度值，直至吸光度值接近零时停止收集，合并流分，浓缩、透析、冻干，得到多糖P2；步骤(4)所述的填料预处理包括以下步骤：将填料进行抽滤并且用蒸馏水冲洗，由于在冲洗过程中会产生气泡，之后用超声波进行脱气泡，静置；步骤(4)所述的装柱包括以下步骤：将填料缓慢引流至层析柱(柱规格为1.5cm×20cm)中，柱床体积约为20mL；先用蒸馏水冲洗层析柱1h，再用浓度为1mol/L的NaCl溶液冲洗1h，最后用蒸馏水冲洗2h，即可准备上样；步骤(4)所述的初步纯化的桃金娘果实多糖用去离子水溶解，其浓度优选50mg/mL；步骤(4)所述的上样和洗脱流速优选0.5mL/min。步骤(4)所述的透析，是将浓缩后的流分转入透析袋(3000Da)中于4℃透析48h。本专利技术的桃金娘多糖P2具有降血脂作用，可用于制备降血脂药物；所述的药物还包含可接受的辅料和其他起配伍协同作用的有效成分；所述的药物可以为各种剂型，如片剂、颗粒剂、胶囊、滴丸、缓释剂、口服液、注射剂等。本专利技术的实验结果表明，桃金娘多糖P2具有一定的体外结合胆酸盐能力，以考来烯胺(一种降血脂药物，其降血脂机理即为结合胆酸盐)作为阳性对照，按考来烯胺对各胆酸盐的结合率为100％计算，转换出桃金娘多糖P2对牛磺胆酸钠、甘氨胆酸钠、胆酸钠的相对结合率分别为：29.87％、47.49％、53.69％。该实验结果初步表明桃金娘多糖P2具有一定效果的降血脂作用。本专利技术通过水提醇沉法得到桃金娘果实粗多糖，采用H2O2法脱色、Sevag法脱蛋白，并利用DEAE-Sepharosefastflow离子交换层析柱进行分离纯化，相对于现有技术具有如下的优点及效果：(1)本专利技术建立了一条完整可行的桃金娘果实多糖提取、分离纯化、结构特征和生物活性研究的技术路线，为野生植物资源桃金娘果实多糖的提取分离纯化提供了技术指导。(2)本专利技术所用的水提醇沉法可以完成大量的多糖提取操作，成本较低，重复性好，得率高，适用于工业化大规模生产。(3)本专利技术所用的DEAE-Sepharosefastflow理化稳定性能和机械性能更好，交换容量大，可以在位清洗，床体积随pH值的离子强度变化很小，由于流速和载量高，适合于进行大量粗产品的纯化工作。(4)本专利技术创造性地将多糖的水提醇沉提取方法与离子交换层析分离纯化方法结合起来用于桃金娘果实多糖的研究，比较并得到较优的工艺参数，为桃金娘果实多糖的提取分离纯化提供技术指导和新思路。附图说明图1是桃金娘果实多糖的洗脱曲线图。图2是多糖P2的紫外光谱图。图3是桃金娘果实多糖体外结合胆酸盐能力。图4是多糖P2的红外光谱图。具体实施方式下面结合实施例及附图对本专利技术作进一步详细的描述，但本专利技术的实施方式不限于此。实施例中，所得到的桃金娘果实多糖组分P2的分析由中国广州分析测试中心进行，报告编号分别2017011500-3。实施例1一种从桃金娘果实中提取并分离纯化多糖的方法，包括以下步骤：(1)提取桃金娘果实多糖：称取110g烘干后的桃金娘果实粉碎，过40目筛后称取100本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种桃金娘多糖P2，其特征在于包含以下摩尔百分比的单糖：核糖8.25％，鼠李糖2.10％，阿拉伯糖53.75％，木糖5.16％，甘露糖8.22％，葡萄糖12.01％，半乳糖10.51％。

【技术特征摘要】
1.一种桃金娘多糖P2，其特征在于包含以下摩尔百分比的单糖：核糖8.25％，鼠李糖2.10％，阿拉伯糖53.75％，木糖5.16％，甘露糖8.22％，葡萄糖12.01％，半乳糖10.51％。2.根据权利要求1所述的桃金娘多糖P2，其特征在于：数均分子量为2.57×104Da，重均分子量为6.75×104Da。3.权利要求1或2所述的桃金娘多糖P2的分离纯化方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将桃金娘果实回流提取，得桃金娘果实粗多糖；(2)桃金娘果实粗多糖加入30％H2O2溶液脱色；(3)脱色后的多糖加入Sevag试剂去蛋白，得到初步纯化的桃金娘果实多糖；(4)DEAE-琼脂糖凝胶填料经预处理后装柱，步骤(3)的初步纯化的桃金娘果实多糖用去离子水溶解后过0.45μm微孔滤膜，然后上柱；先用蒸馏水洗脱，每0.1g桃金娘果实多糖用150mL蒸馏水洗脱，不收集流分；然后用浓度为0.1mol/L的NaCl溶液洗脱，每5mL收集一管洗脱液，用苯酚-硫酸法检测洗脱液在检测波长为490nm的吸光度值，直至吸光度值接近零时停止收集，合并流分，浓缩、透析、冻干，得到多糖P2。4.根据权利要求3所述的分离纯化方法，其特征在于：所述的步骤(1)包括以下操作：将桃金娘果实烘干并粉碎，取其干粉和蒸馏水于回流装置中煮沸提取数次，合并提取液并减压浓缩，在浓缩液中...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄儒强，王静辉，王倩，高林林，张竞雯，
申请(专利权)人：华南师范大学，
类型：发明
国别省市：广东,44