一种空白尿液基质及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种空白尿液基质，通过如下制备方法获得：(1)收集尿液；(2)向步骤(1)收集的尿液中加碱调节pH值至碱性，去除儿茶酚胺类物质；(3)向步骤(2)获得的尿液中加酸调节pH值至接近中性；(4)使用弱阳离子交换柱吸附去除步骤(3)获得的尿液中儿茶酚胺的代谢产物，即得所述空白尿液基质。本发明专利技术还公开了所述空白尿液基质在尿液儿茶酚胺及其代谢产物的定性和/或定量检测中的用途。本发明专利技术所述空白尿液基质制备方法简单，可操作性强，不仅有效地去除了干扰物质，与实际样本基质匹配度高，避免了基质效应，而且具有成本较低，能够用于实际临床检测等优势。

A blank urine matrix and its application

The invention discloses a blank urine matrix, which is obtained by the following preparation methods: (1) collecting urine; (2) adding alkali to the collected urine to regulate the pH value to alkalinity and remove catecholamines; (3) adding acid to the obtained urine to regulate the pH value to approximate neutrality; (4) using weak cation exchange column to adsorb and remove catecholamine metabolites in the urine; (3) using weak cation exchange column to remove catecholamine metabolites. The blank urine matrix is obtained. The invention also discloses the use of the blank urine matrix in the qualitative and/or quantitative detection of catecholamines and their metabolites in urine. The preparation method of blank urine matrix of the invention is simple and operable, which not only effectively removes interfering substances, has high matching degree with actual sample matrix, avoids matrix effect, but also has the advantages of low cost and can be used in actual clinical detection.

【技术实现步骤摘要】
一种空白尿液基质及其用途
本专利技术属于医学检测
，具体涉及一种空白尿液基质及其在尿液儿茶酚胺和/或其代谢产物检测中的用途。
技术介绍
儿茶酚胺类物质包含多巴胺、肾上腺素、去甲肾上腺素，其代谢产物包括甲氧基肾上腺素、甲氧基去甲肾上腺素和3-甲氧基酪胺，儿茶酚胺及其代谢产物一方面来源于人体自身代谢，一方面直接来源于嗜铬细胞。儿茶酚胺及其代谢产物大量分泌通常会引起血浆与尿液中相关化合物浓度的增加。尿液中代谢产物的检测具有含量高、易检出、无创性等特点。24h尿液儿茶酚胺及其代谢产物可用于PPGL患者的初步筛查。基于液相色谱-串联质谱法检测内分泌性疾病的代谢产物，目前已广泛应用于各种临床色谱质谱实验室，嗜铬细胞瘤和副神经节瘤(PPGL)是以儿茶酚胺及其代谢产物大量分泌为特征的肿瘤。液相色谱-串联质谱法的引入可以更有效、更准确、快速地检出PPGL患者的儿茶酚胺及其代谢产物水平。对于生物样品(血液，血清，尿液，积液等)而言，若分析物为外源性物质(大多数药物，环境污染物等)都可以方便的使用正常人的标本作为空白基质；但如果分析物为内源性物质(人体内本身含有的，如类固醇、维生素、儿茶酚胺类等)，就很难获得空白基质用于标准曲线和质控的配制。对于尿液中儿茶酚胺及其代谢产物的检测，现有空白尿液基质获取的主要方式及存在的问题有：1、目前临床上存在的商业化试剂盒产品批次间差异大，保存时间短，主要靠国外进口，成本高，不利于实验室大批量样本的检测；2、由于内源性化合物儿茶酚胺及其代谢产物在尿液中大量存在，致使很难直接全面地去除空白样本基质中的儿茶酚胺及甲氧基肾上腺素类物质；3、有部分研究采用缓冲盐或纯水作为尿液替代基质，用于配制标准曲线或质控，虽然基质效应较弱，但该替代基质无法反应实际样本的真实基质状态，使尿液样本的检测结果可能会不准确。基于以上原因，迫切需要一种制备简单、成本较低、基质效应等均符合要求的用于尿液中内源性儿茶酚胺及其代谢物检测的空白尿液基质。
技术实现思路
基于此，本专利技术的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种空白尿液基质，其制备方法简单、成本较低、基质效应等均符合要求，可应用于儿茶酚胺和/或其代谢产物检测中标准曲线和质控的配制，基质效应满足检测要求，稳定性好。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种空白尿液基质，通过如下制备方法获得：(1)收集尿液；(2)向步骤(1)收集的尿液中加碱调节pH值至碱性，去除儿茶酚胺类物质；(3)向步骤(2)获得的尿液中加酸调节pH值至接近中性；(4)使用弱阳离子交换柱吸附去除步骤(3)获得的尿液中儿茶酚胺的代谢产物，即得所述空白尿液基质。优选地，所述步骤(1)中收集的尿液为健康人尿液。优选地，所述步骤(1)中收集的尿液为不同年龄和不同性别的健康人群的混合尿液。优选地，所述步骤(1)中收集的尿液为随机尿液或24h尿液。优选地，所述步骤(2)中去除尿液中儿茶酚胺类物质的方法为：向尿液中加碱调节pH值至碱性，然后室温放置24小时。优选地，所述步骤(2)中碱为13～16mol/LNaOH溶液。优选地，所述13～16mol/LNaOH溶液与尿液的体积比为1：(400～500)。优选地，所述步骤(3)中加酸调节尿液pH值至6～7。优选地，所述酸为10～15mol/LHCl溶液。优选地，所述10～15mol/LHCl溶液与尿液的体积比为1：(400～500)。优选地，所述步骤(4)中尿液中儿茶酚胺的代谢产物去除方法包括以下步骤：A、活化和平衡所述弱阳离子交换柱；B、将步骤(3)获得的尿液过步骤A获得的弱阳离子交换柱；C、收集步骤(B)获得的尿液。优选地，所述步骤A中弱阳离子交换柱的填料为经羧基修饰的混合型弱阳离子吸附剂。经羧基修饰的混合型弱阳离子吸附剂能够提供双重保留模式，即离子交换与反相保留。所述经羧基修饰的混合型弱阳离子吸附剂填料在pH0～14范围内都很稳定，同时具有很大的结合容量，且只针对于生物基质中的碱性化合物有很好的保留效果，甲氧基肾上腺素类物质刚好符合该特性。优选地，所述步骤A中先使用甲醇活化所述弱阳离子交换柱，然后使用水平衡所述弱阳离子交换柱。优选地，所述甲醇与弱阳离子交换柱的体积比为(1～2)：1；所述水与甲醇体积相同。优选地，所述步骤B中可将步骤(3)获得的尿液分多次上样，每次上样的量可根据弱阳离子交换柱的规格而定。优选地，收集完所述步骤(4)获得的空白尿液后，可对弱阳离子交换柱进行回收，回收的方法为：待尿液收集完毕后，依次加入1-2倍柱体积的水、甲醇和0.1-0.5％wt甲酸乙腈淋洗小柱，然后使用2-4倍柱体积的2-5％wt甲酸乙腈进一步清洗，最后将弱阳离子交换柱填料浸泡在甲醇中保存供二次利用。本专利技术所述弱阳离子交换柱的其中一种制备方法，包括以下步骤：a、取注射器，除去针头与柱塞杆，在靠近注射器针头的底部垫入脱脂棉；b、将弱阳离子填料装填至注射器中；c、在所述弱阳离子填料上部放入一个与注射器圆筒直径相当的滤纸片固定弱阳离子填料，即得所述弱阳离子交换柱。优选地，所述步骤a中脱脂棉的厚度为1-2mm。优选地，所述步骤b中弱阳离子填料与注射器柱体积的重量体积比为(0.1～0.2):1。对所述注射器的规格无限制，可根据需要制备的空白尿液基质的用量和时间来进行任意的调整。本专利技术还提供了所述的空白尿液基质在尿液儿茶酚胺和/或其代谢产物检测中的用途。优选地，所述尿液儿茶酚胺和/或其代谢产物的检测方法为液相色谱-串联质谱法。本专利技术还提供了一种尿液儿茶酚胺和/或其代谢产物检测试剂盒，包含所述的空白尿液基质。优选地，所述试剂盒为液相色谱-串联质谱法检测尿液儿茶酚胺和/或其代谢产物用试剂盒。相对于现有技术，本专利技术的有益效果为：(1)本专利技术空白尿液基质同时去除了尿液中内源性化合物儿茶酚胺及其代谢产物甲氧基肾上腺素类物质，本底测试(基质特异性验证)、基质效应均满足要求；(2)本专利技术空白尿液基质制备简单快速，可操作性强，每3g弱阳离子交换柱填料可制备70-100mL空白尿液，如需大量制备，可一次性装填大规格的弱阳离子交换柱或装填多根小规格的弱阳离子交换柱，可节约大量的时间成本；(3)本专利技术空白尿液基质制备方法中弱阳离子填料经过适当的处理可重复利用，制备成本低；(4)可实验室自行制作，价格低廉，随用随配。附图说明图1为弱阳离子交换柱的外观图及填料装填顺序。图2为儿茶酚胺及其代谢产物标准物质的总离子流色谱图。图3为本专利技术空白尿液基质中多巴胺标准出峰位置与基质特异性色谱图。图4为本专利技术空白尿液基质中3-甲氧酪胺标准出峰位置与基质特异性色谱图。图5为本专利技术空白尿液基质中去甲肾上腺素标准出峰位置与基质特异性色谱图。图6为本专利技术空白尿液基质中肾上腺素标准出峰位置与基质特异性色谱图。图7为本专利技术空白尿液基质中甲氧基去甲肾上腺素标准出峰位置与基质特异性色谱图。图8为本专利技术空白尿液基质中甲氧基肾上腺素标准出峰位置与基质特异性色谱图。图9为本专利技术空白尿液基质儿茶酚胺的总离子流色谱图。图10为本专利技术空白尿液基质代谢产物的总离子流色谱图。图11为对照组市售空白尿液基质中儿茶酚胺的总离子流色谱图。图12为对照组市售空白尿液基质中代谢产物的总离子流色谱图。具体实施方式为更好的说明本专利技术的目的、技术方案和优点，下本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种空白尿液基质，其特征在于，通过如下制备方法获得：(1)收集尿液；(2)向步骤(1)收集的尿液中加碱调节pH值至碱性，去除儿茶酚胺类物质；(3)向步骤(2)获得的尿液中加酸调节pH值至接近中性；(4)使用弱阳离子交换柱吸附去除步骤(3)获得的尿液中儿茶酚胺的代谢产物，即得所述空白尿液基质。

【技术特征摘要】
1.一种空白尿液基质，其特征在于，通过如下制备方法获得：(1)收集尿液；(2)向步骤(1)收集的尿液中加碱调节pH值至碱性，去除儿茶酚胺类物质；(3)向步骤(2)获得的尿液中加酸调节pH值至接近中性；(4)使用弱阳离子交换柱吸附去除步骤(3)获得的尿液中儿茶酚胺的代谢产物，即得所述空白尿液基质。2.根据权利要求1所述的空白尿液基质，其特征在于，所述步骤(2)中碱为13～16mol/LNaOH溶液。3.根据权利要求1所述的空白尿液基质，其特征在于，所述步骤(3)中加酸调节尿液pH值至6～7。4.根据权利要求3所述的空白尿液基质，其特征在于，所述酸为10～15mol/LHCl溶液。5.根据权利要求1所述的空白尿液基质，其特征在于，所述步骤(4)中尿液中儿茶酚胺的代谢产物去除方法包括以下...

【专利技术属性】
技术研发人员：程雅婷，赵蓓蓓，李维，佘旭辉，董衡，刘伟霞，
申请(专利权)人：广州金域医学检验中心有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44