一种从虾肉肌肉组织中制备高纯度原肌球蛋白的方法技术

本发明专利技术涉及一种从虾肉肌肉组织中制备高纯度原肌球蛋白的方法，包括以下步骤：（1）原肌球蛋白粗品制备：液氮研磨法+全蛋白提取试剂盒提取；取新鲜虾类肌肉组织，用小刀切成泥状，置于研钵中，加入液氮研磨，直至粉末状；用全蛋白提取试剂盒提取蛋白浸液，按照全蛋白提取试剂盒说明书处理组织粉末，得到原肌球蛋白粗品；（2）原肌球蛋白提纯；原肌球蛋白粗品经阴离子交换柱层析，得到高纯度原肌球蛋白。本发明专利技术采用全蛋白提取试剂盒与阴离子交换柱相结合的方法，从虾类肌肉组织中提取高纯度原肌球蛋白，蛋白纯度可达95%以上。

【技术实现步骤摘要】
一种从虾肉肌肉组织中制备高纯度原肌球蛋白的方法
本专利技术属于生物
，尤其涉及一种从虾肉肌肉组织中制备高纯度原肌球蛋白的方法。
技术介绍
联合国粮农组织(FAO)的统计数据显示，引起世界范围内2％的成人和8％的婴幼儿过敏的八大类蛋白来源于鱼、甲壳类动物、蛋、奶、花生、大豆、坚果和小麦等。水产品占八大过敏来源中的两项，我国是水产品的生产和消费大国，水产品以其营养丰富且味道鲜美的特性深受消费者青睐。水产品的摄入可以减少冠心病的发生，提供人类蛋白质的来源。然而，水产品中的过敏蛋白严重影响了过敏人群食用水产品和以水产品为来源的食品后的人身健康，可造成其产生食物过敏反应。食物过敏反应的普遍症状包括急性呼吸困难、喷嚏、口腔发痒、呕吐、恶心、腹痛和腹泻。在一些病例中，过敏原会导致危及生命的过敏反应，症状有嘴部肿胀、重度喷咬、呼吸浅短甚至休克。针对水产原过敏蛋白造成的食品安全问题，国内外对水产原过敏蛋白的检测方法开展了广泛和深入的研究。国内外的检测方法主要有：间接竞争酶联免疫吸附试验(inhibitionELLSA)、双夹心ELLSA法、免疫印迹法(immunoblotting)和实时荧光定量PCR(real-timePCR)法等，这些方法主要围绕着免疫检测研究展开。除此之外，还有一些新的方法被开发和应用，如高效毛细管电泳法、液相色谱-串联质谱法、组胺释放实验法和过敏原指纹图谱检测方法等。这些方法在测试过程中都需要有过敏蛋白的标准样品作为内标或外标进行定量，或者作为阳性对照进行比较。在过敏蛋白特性、致敏反应机制及消减方法等研究中，需要大量的纯度较高的过敏蛋白样品。在食品等产品中过敏蛋白定性定量检测研究中，也需要纯度较高的过敏蛋白样品作为对照。原肌球蛋白是一种较常见的过敏蛋白，广泛的存在于印度对虾(Penaeusindicus)、棕虾(Penaeusaztecus)、刀额新对虾(Metapenaeusensis)、中华绒螯蟹(Eriocheirsinensis)等在内的甲壳类软甲纲十足目动物肌肉组织中。本专利技术专利就是为原肌球蛋白的纯化富集提供方法，通过本专利技术专利可富集纯度达到95％以上的原肌球蛋白。
技术实现思路
本专利技术的目的是用全蛋白提取试剂盒与阴离子交换柱相结合的方法制备高纯度原肌球蛋白，为原肌球蛋白定性定量检测和研究原肌球蛋白特性提供高纯度原肌球蛋白样品。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的，一种从虾肉肌肉组织中制备高纯度原肌球蛋白的方法，包括以下步骤：(1)原肌球蛋白粗品制备：液氮研磨法+全蛋白提取试剂盒提取；取新鲜虾类肌肉组织，用小刀切成泥状，置于研钵中，加入液氮研磨，直至粉末状；用全蛋白提取试剂盒提取蛋白浸液，按照全蛋白提取试剂盒说明书处理组织粉末，得到原肌球蛋白粗品；(2)原肌球蛋白提纯；原肌球蛋白粗品经阴离子交换柱层析，得到高纯度原肌球蛋白。优选地，所述阴离子交换柱层析在pH为6.0到9.0且电导率为0.5到5mS/cm的条件下进行。优选地，所述阴离子交换柱层析使用选自季铵或胺、二乙胺、二乙氨基丙基、氨基、三甲基铵乙基、三甲基苄基铵、二甲基乙醇苄基铵、多胺的配体。优选地，所述阴离子交换柱层析使用选自下组的树脂或膜进行：DEAE纤维素、SartobindQ、MonoQ、MiniQ、Source15Q、Source30Q、ANXSepharoseFastFlow、QSepharosehighPerformance、CaptoQ、QAESEPHADEXTM、FASTQSEPHAROSETM、WPPEI、WPDEAM、WPQUAT、HydrocellDEAE、HydrocellQA、UNOsphereQ、Macro-PrepDEAE、Macro-PrepHighQ、CeramicHyperDQ、ceramicHyperDDEAE、SpherodexLSDEAE、QMASpherosilLS、QMASpherosilM、MustangQ、DOWEX细筛强碱I型阴离子树脂、DOWEX细筛强碱II型阴离子树脂、DOWEXMONOSPHERE77、来自DowLiquidSeparations的弱碱阴离子、InterceptQ膜、MatrexCellufineQ500、MatrexCellufineA500和MatrexCellufineQ800、FractogelEMDTMAE、FractogelEMDDEAE和FractogelEMDDMAE和Amberlite。优选地，所述虾类包括印度对虾、棕虾或刀额新对虾。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术采用全蛋白提取试剂盒与阴离子交换柱相结合的方法，从虾类肌肉组织中提取高纯度原肌球蛋白，蛋白纯度可达95％以上。具体实施方式以下由特定的具体实施例说明本专利技术的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点及功效。实施例1一种从虾肉肌肉组织中制备高纯度原肌球蛋白的方法，包括以下步骤：(1)原肌球蛋白粗品制备：液氮研磨法+全蛋白提取试剂盒提取；取新鲜虾类肌肉组织，用小刀切成泥状，置于研钵中，加入液氮研磨，直至粉末状；用全蛋白提取试剂盒提取蛋白浸液，按照全蛋白提取试剂盒说明书处理组织粉末，得到原肌球蛋白粗品；(2)原肌球蛋白提纯；原肌球蛋白粗品经阴离子交换柱层析，得到高纯度原肌球蛋白。优选地，所述阴离子交换柱层析在pH为6.0到9.0且电导率为0.5到5mS/cm的条件下进行。优选地，所述阴离子交换柱层析使用选自季铵或胺、二乙胺、二乙氨基丙基、氨基、三甲基铵乙基、三甲基苄基铵、二甲基乙醇苄基铵、多胺的配体。优选地，所述阴离子交换柱层析使用选自下组的树脂或膜进行：DEAE纤维素、SartobindQ、MonoQ、MiniQ、Source15Q、Source30Q、ANXSepharoseFastFlow、QSepharosehighPerformance、CaptoQ、QAESEPHADEXTM、FASTQSEPHAROSETM、WPPEI、WPDEAM、WPQUAT、HydrocellDEAE、HydrocellQA、UNOsphereQ、Macro-PrepDEAE、Macro-PrepHighQ、CeramicHyperDQ、ceramicHyperDDEAE、SpherodexLSDEAE、QMASpherosilLS、QMASpherosilM、MustangQ、DOWEX细筛强碱I型阴离子树脂、DOWEX细筛强碱II型阴离子树脂、DOWEXMONOSPHERE77、来自DowLiquidSeparations的弱碱阴离子、InterceptQ膜、MatrexCellufineQ500、MatrexCellufineA500和MatrexCellufineQ800、FractogelEMDTMAE、FractogelEMDDEAE和FractogelEMDDMAE和Amberlite。优选地，所述虾类包括印度对虾、棕虾或刀额新对虾。本专利技术采用全蛋白提取试剂盒与阴离子交换柱相结合的方法，从虾类肌肉组织中提取高纯度原肌球蛋白，蛋白纯度可达95％以上。上述实施例仅例示性说明本专利技术的原理及其功效，而非用于限制本专利技术。任何熟悉此技术的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从虾肉肌肉组织中制备高纯度原肌球蛋白的方法，其特征是，包括以下步骤：(1)原肌球蛋白粗品制备：液氮研磨法+全蛋白提取试剂盒提取；取新鲜虾类肌肉组织，用小刀切成泥状，置于研钵中，加入液氮研磨，直至粉末状；用全蛋白提取试剂盒提取蛋白浸液，按照全蛋白提取试剂盒说明书处理组织粉末，得到原肌球蛋白粗品；(2)原肌球蛋白提纯；原肌球蛋白粗品经阴离子交换柱层析，得到高纯度原肌球蛋白。

【技术特征摘要】
1.一种从虾肉肌肉组织中制备高纯度原肌球蛋白的方法，其特征是，包括以下步骤：(1)原肌球蛋白粗品制备：液氮研磨法+全蛋白提取试剂盒提取；取新鲜虾类肌肉组织，用小刀切成泥状，置于研钵中，加入液氮研磨，直至粉末状；用全蛋白提取试剂盒提取蛋白浸液，按照全蛋白提取试剂盒说明书处理组织粉末，得到原肌球蛋白粗品；(2)原肌球蛋白提纯；原肌球蛋白粗品经阴离子交换柱层析，得到高纯度原肌球蛋白。2.根据权利要求1所述的从虾肉肌肉组织中制备高纯度原肌球蛋白的方法，其特征是，所述阴离子交换柱层析在pH为6.0到9.0且电导率为0.5到5mS/cm的条件下进行。3.根据权利要求1所述的从虾肉肌肉组织中制备高纯度原肌球蛋白的方法，其特征是，所述阴离子交换柱层析使用选自季铵或胺、二乙胺、二乙氨基丙基、氨基、三甲基铵乙基、三甲基苄基铵、二甲基乙醇苄基铵、多胺的配体。4.根据权利要求1所述的从虾肉肌肉组织中制备高纯度原肌球蛋白的方法，其特征是，所述阴离子交换柱层析使用选自下组的树脂或膜进行：DEAE纤维素、SartobindQ、MonoQ、MiniQ、Source15Q、Source30Q、ANXSepharoseFastFlow、QS...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴琦，
申请(专利权)人：中国标准化研究院，
类型：发明
国别省市：北京,11