The invention relates to the field of species identification, and provides a kit for identifying Periplaneta americana. The kit includes positive control, positive and negative primers, mixed solution of PCR reaction and distilled water. The positive control uses DNA barcode standard detection fragment CO II such as SEQ ID NO.1, and the sequence of positive and negative primers such as SEQ ID NO.2 and SEQ ID NO.3. In the present invention, the homology of CO II gene fragment (SEQ ID NO.1) from Periplaneta Americana is 98-100% in the species of Periplaneta americana, while the homology with non-Periplaneta Americana is significantly reduced. Further, the primer design and PCR amplification can accurately distinguish Periplaneta Americana from other similar species. The kit provided by the invention can be used to identify Periplaneta Americana in powder or processed products, with wider detection range, higher detection accuracy and shorter identification time.
【技术实现步骤摘要】
一种鉴别美洲大蠊的DNA条形码标准检测片段COⅡ、试剂盒及其使用方法
本专利技术涉及物种鉴定
,具体涉及一种鉴别美洲大蠊的试剂盒及其使用方法。
技术介绍
美洲大蠊(PeriplanetaamericanaLinn.)是长期应用于民间的动物药药材,常以干燥或鲜成虫入药,主治儿童疳积、扁桃腺炎、身体包块、痈疮肿痛和蜈蚣叮咬等。近年来,研究表明美洲大蠊作为昆虫药物的临床应用记录显示,其具有抗肿瘤、治疗心血管疾病、促进组织修复、抗菌、抗病毒、抗氧化、增强免疫等药理作用,美洲大蠊药物制剂在临床上的应用也越来越广泛,而对美洲大蠊药材的真伪鉴定是入药及进行药理学研究的基础。目前在国际范围内对昆虫的种类鉴定主要是依据成虫的形态学特征,而在中国的药材市场上,美洲大蠊药材通常以粉末或炮制品等形式入药。由于传统的性状鉴别缺乏准确的内部解剖特征或者是在贮藏、加工炮制过程中形态被严重破坏,因此基于形态结构细微差别的归类描述稳定性差、可信度低,导致药用美洲大蠊的鉴定存在很大困难。同时,由于传统的性状鉴别无法准确、快速的鉴定药材市场贩售的美洲大蠊药材,导致有部分伪品(例如药效不及美洲大蠊的澳洲大蠊、德国小蠊、甚或其它科属的昆虫)在市场内流通,市场较为混乱。常规的分类学鉴别方法需要将美洲大蠊幼虫需要培养为成虫才能鉴定,耗时较长;对与残缺不全的昆虫药材炮制品、虫体粉末则基本上不能检测;以传统分类学方法鉴定美洲大蠊要求掌握昆虫,尤其是蜚蠊属昆虫形态分类学的专业技术人员才能对美洲大蠊成虫进行药材鉴定。因此,该昆虫药物的药材鉴定及原料药饮片的质量控制等均亟需寻求一种新的方法,以弥补传统分类 ...
【技术保护点】
1.一种用于鉴别美洲大蠊的DNA条形码标准检测片段COⅡ,所述标准检测片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
【技术特征摘要】
1.一种用于鉴别美洲大蠊的DNA条形码标准检测片段COⅡ,所述标准检测片段的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。2.一种用于鉴别美洲大蠊的引物对,其特征在于,所述引物对用于扩增权利要求1所述DNA条形码标准检测片段COⅡ,所述引物对中,正向引物的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示,反向引物的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。3.一种用于鉴别美洲大蠊的试剂盒,包括权利要求2所述的引物对、PCR反应混合液;所述PCR反应混合液包括:0.1UTaq聚合酶、500μmol/LdNTP、20mmol/L且pH=8.3的Tris-HCl、100mmol/L氯化钾以及3μmol/L的氯化镁。4.根据权利要求3所述用于鉴别美洲大蠊的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括阳性对照,所述阳性对照为权利要求1所述DNA条形码标准检测片段COⅡ或美洲大蠊成虫。5.根据权利要求3或4所述的用于鉴别美洲大蠊的试剂盒,其特征在于,所述引物对中正反向引物的浓度均为10μmol/L。6.一...
【专利技术属性】
技术研发人员:耿福能,巫秀美,刘彬,陈壮志,沈咏梅,马秀英,吴桃清,白丽,
申请(专利权)人:大理大学,
类型:发明
国别省市:云南,53
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