The invention relates to the technical field of traditional Chinese medicine detection, in particular to a detection kit for Guangdilong and a preparation method thereof. It consists of three parts: genome extraction system, PCR reaction system and detection system. It includes sample pretreatment, genome extraction, PCR reaction and result identification. The sample pretreatment of earthworm is divided into dry sample and wet sample. The DNA detection method of earthworm is to design genome specific oligonucleotide primers, synthesize primers, determine the reaction procedure and determine the results. It can accurately judge whether it is earthworm from the dragon-like raw materials of medicinal land. The method is simple, rapid and reliable.
【技术实现步骤摘要】
中药材广地龙DNA检测试剂盒及其鉴定方法
本专利技术涉及中药检测
,更具体的说,是一种地龙DNA检测试剂盒及其鉴定方法。
技术介绍
地龙是可以作为药用的蚯蚓,是常用的动物类中药。从我国地龙的药源调查和商品鉴定中发现:我国地龙药材的原动物主要有13个种和变种,分别隶属于钜蚓科、正蚓科和链胃蚓科4个属。除了药典收集记载的品种外,还包括湖北环毛蚓、直隶环毛蚓、白经环毛蚓等。由于药用地龙的原动物品种较多,目前尚缺乏真实有效的鉴定方法,导致各地市场上出现广地龙药材品种混杂,药材品质优劣参差不齐等问题,严重影响了临床疗效并给服用者留下健康隐患。韦健红在《地龙药材DNA条形码分子鉴定的研究》中采用COI基因序列及16SrRNA基因对广地龙及其他地龙原动物共3个科5个属9个物种的进行了序列比较研究,同时探讨了12SrRNA基因和Cytb基因对地龙原动物分子鉴定的可行性。从中筛选出适用于地龙物种鉴定的DNA条形码。这种方法无疑对于进行学术型的种属鉴定,是适宜的,但就操作性来讲却有失简便。序列对比发现这4个基因在其他类型的地龙甚至其他生物中同源性较高,在使用中除非进行DNA测序,否则很难确定是药用蚯蚓甚至是蚯蚓,而且DNA测序成本高,耗时长。基于此,本专利技术提供一种更加简便快捷且准确度高的药用广地龙的检测试剂盒及其试用方法。
技术实现思路
金属硫蛋白是具有结合金属能力和高诱导特性的低分子量蛋白质,它普遍存在于生物体内。参环毛蚓在中国习称广地龙,通过序列比对发现参环毛蚓的金属硫蛋白(metallothionein)与其他物种同源性低。本专利技术基于本蛋白的特异性,提供一种能 ...
【技术保护点】
1.一种广地龙鉴定试剂盒,其特征在于:包含鉴定反应体系、阳性对照反应体系、阴性对照反应体系1、阴性对照反应体系2、蛋白抽提液和蛋白裂解液。
【技术特征摘要】
1.一种广地龙鉴定试剂盒,其特征在于:包含鉴定反应体系、阳性对照反应体系、阴性对照反应体系1、阴性对照反应体系2、蛋白抽提液和蛋白裂解液。2.权利要求1所述的一种地龙鉴定试剂盒,其特征在于:所述的鉴定反应体系为100μL,包含缓冲液10μL,0.2mMdNTP混合物各1-2μL,0.1mM正向引物的5‘GCGAGAAACTCTTTGTGGCG’3和反向引物5‘GGAACTGCCGAAAGGCAAAA’3为1-3μL,TaqDNA聚合酶1-5μL,待检样本1-5μL,用去离子水补齐体系。3.权利要求1所述的一种地龙鉴定试剂盒,其特征在于:所述的阳性对照反应体系为总体系为100μL,缓冲液10μL,0.2mMdNTP混合物各5-15μL,0.1mM引物1的5‘GCGAGAAACTCTTTGTGGCG’3和引物5‘GGAACTGCCGAAAGGCAAAA’3为1-3μL,TaqDNA聚合酶1-5μL,地龙基因组DNA1-5μL,用去离子水补齐体系。4.权利要求1所述的一种地龙鉴定试剂盒,其特征在于:阴性对照反应体系1为总体系为100μL,缓冲液10μL,0.2mMdNTP混合物各5-15μL,0.1mM引物1的5‘GCGAGAAACTCTTTGTGGCG’3和引物5‘GGAACTGCCGAAAGGCAAAA’3为1-3μL,TaqDNA聚合酶1-5μL,用去离子水补齐体系。5.权利要求1所述的一种地龙鉴定试剂盒,其特征在于:阴性对照反应体系2为阴性对照反应体系:总体系为100μL,缓冲液10μL,0.2mMdNTP混合物各5-15μL,0.1mM引物1的5‘GCGAGAAACTCTTTGTGGCG’3和引物5‘GGAACTGCCGAAAGGCAAAA’3为1-3μL,TaqDNA聚...
【专利技术属性】
技术研发人员:高倩倩,王伟,于跃,张振伟,张焕琴,
申请(专利权)人:临沂市科学技术合作与应用研究院,
类型:发明
国别省市:山东,37
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。