薏苡仁源降压多肽及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种薏苡仁源降压多肽及其应用。该多肽的基酸序列如序列表中序列1所示。该多肽可用于制备血管紧张素转化酶抑制剂，可用于制备降压药物。本发明专利技术的多肽对血管紧张素转化酶具有明显的抑制作用，具有显著的降压效果。

【技术实现步骤摘要】
薏苡仁源降压多肽及其应用
本专利技术涉及一种薏苡仁源降压多肽及其应用。
技术介绍
薏苡仁为禾本科植物薏苡(Coixlacryma-jobiL.var.meyuan(Romen.)Stapf)的干燥成熟种仁，主产于福建、河北、辽宁等地。性甘、淡、微寒，归脾、胃、肺经。具有利水渗湿、健脾止泻、清热排脓、除弊的功效。《本草纲目》将其列为上品养心药。根据现代药理研究表明薏苡仁具有降压作用并可药食兼用，薏苡仁在临床上具有明确的降压疗效。近年来，高血压患病主体越来越年轻化，患病率呈逐年增加的趋势。目前我国成人高血压患病率已达到25％-30％，成为世界上高血压患病大国。治疗高血压的药物多为化学合成药物，患者长期服用会产生各种各样的副作用。随着人们健康意识的不断提高，具有降压作用的非化学合成替代品日益受到人们的亲睐。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种多肽，所述多肽的氨基酸序列如序列表中序列1所示。本专利技术的多肽对血管紧张素转化酶具有抑制作用。本专利技术的多肽具有降压作用。本专利技术的多肽可用于制备血管紧张素转化酶抑制剂。本专利技术的多肽可用于制备降压药物。本专利技术的另一个目的是提供一种小分子量多肽提取物，其由如下方法制备：将薏苡仁药材粉碎，脱脂，干燥，然后室温下使用硼酸钠缓冲液提取谷蛋白；将获得的谷蛋白溶解于胃蛋白酶溶液中，37℃进行水解，所述胃蛋白酶与所述谷蛋白的质量比为1:10；反应终止后离心，取上清液，过滤；采用截留分子量为3KDa的超滤膜在0.1Mpa下进行超滤，收集≤3KDa组分，获得所述小分子量多肽提取物，即下文中所述的≤3KDa组分。本专利技术的又一个目的是提供一种多肽提取物，其由如下方法制备：所述的小分子量多肽提取物经冷冻干燥，采用SephadexG-10进行凝胶过滤色谱(1.6×60cm)纯化；色谱条件为超纯水作为洗脱液，流速1mL/min，使用HD-4核酸蛋白检测仪在220nm下检测，收集出峰时间为75-100min的组分，获得所述多肽提取物，即下文中所述的组分F5。本专利技术的又一个目的是提供一种具有增强免疫调节活性的保健食品，其包含所述的小分子量多肽提取物。本专利技术的另一个目的是提供一种血管紧张素转化酶抑制剂，所述血管紧张素转化酶抑制剂的活性成分为所述的多肽、所述小分子量多肽提取物或所述多肽提取物。本专利技术的又一个目的是提供一种降压药物，所述降压药物的活性成分为所述的多肽、所述小分子量多肽提取物或所述多肽提取物。本专利技术的多肽、小分子量多肽提取物和多肽提取物对血管紧张素转化酶具有明显的抑制作用，具有显著的降压效果。附图说明图1显示了≤3KDa组分凝胶过滤色谱图。图2显示了反相-高效液相色谱法(RP-HPLC)的色谱图，其中，a为HA对照品，b为HHL对照品，c为空白对照，d为卡托普利阳性对照，e为七肽GAAGGAF。图3显示了七肽GAAGGAF单次给药SHR大鼠血压变化图。图4显示了组分F5单次给药SHR大鼠血压变化图。图5显示了≤3KDa组分单次给药SHR大鼠血压变化图。图6显示了≤3KDa组分对腹腔巨噬细胞的ACP活性的影响，其中，每个值表示为平均值±标准差；不同的字母表示显著差异(P<0.05)。图7显示了≤3KDa组分对RAW264.7细胞中NO生成的影响，其中，不同的字母表示显著差异(P<0.05)。图8显示了重复给药21天后≤3KDa组分对小鼠体重的影响。具体实施方式本专利技术的专利技术人通过如下研究发现了可能具有血管紧张素转化酶抑制(ACEI)活性的七肽GAAGGAF：薏苡仁药材(产地福建)经粉碎，过40目筛，石油醚脱脂，低温振荡4h，离心弃上清，真空干燥。使用0.0125M硼酸钠缓冲液(1％SDS，2％β-巯基乙醇，pH＝10.0)室温下从干燥后的薏苡仁粉末中提取谷蛋白。谷蛋白提取液于4℃低温透析24h，期间换水数次，谷蛋白液冷冻干燥获得谷蛋白。准确称取谷蛋白(作为底物，浓度为2％(w/v)，胃蛋白酶与底物的比为1:10(w/w))，将其溶于胃蛋白酶溶液(0.01MHCl)中，37℃恒温水浴48h，反应结束后,100℃煮沸5min终止反应，冰浴至室温，在10000rmp，4℃离心，取上清液，经G4漏斗过滤。经过G4漏斗的收集液，置于卷式膜小型实验机中进行超滤，其中卷式膜的截留分子量为3KDa，超滤压力为0.1Mpa，温度25℃。收集≤3KDa组分。超滤所得的≤3KDa组分冷冻干燥，然后通过SephadexG-10(1.6×60cm)凝胶过滤色谱。色谱条件：超纯水为洗脱液，恒流泵调节流速1mL/min，使用HD-4核酸蛋白检测仪在220nm下检测，根据洗脱峰收集各组分。收集到分子量不同的5个组分，分别标记为组分F1-F5(如图1所示)。使用高效液相色谱法对组分F1-F5进行体外ACEI活性的测定。检测体外ACEI活性的原理为人工合成的三肽底物马尿酰-组氨酰-亮氨酸(Hip-His-Leu，HHL，美国Sigma公司)，在ACE酶的作用下生成马尿酸，通过228nm检测马尿酸的生成量来评价ACEI活性。当ACE抑制剂与ACE作用后，ACE活性受到抑制，与HHL作用生成的马尿酸量减少，因此测定加入抑制剂前后马尿酸的生成量即可反映抑制剂对ACE的抑制程度。反应体系：总反应液为50μL，其中样品溶液10μL、ACE溶液20μL(2mU)和HHL溶液20μL(2mM)。样品与ACE溶液充分混匀后，于37℃恒温水浴10min，加入HHL溶液充分混匀继续37℃保温60min，乙腈终止反应。反应液经C18色谱柱(250×4.6mm,5μm,Tianhe)进行分析测定，色谱条件：柱温30℃，流速1mL/min，流动相：乙腈:水(0.05％三氟乙酸)＝25:75等度洗脱，进样体积10μL，检测波长228nm，根据HA的峰面积计算ACE抑制率，公式如下：ACE抑制率(％)＝(b-a)/b×100％式中，a为样品反应液HA的峰面积，b为空白对照液HA的峰面积在终浓度为0.02mg/mL下，5个组分F1-F5的ACEI活性分别为68.60±0.21％，77.91±1.09％，70.50±1.12％，75.43±0.37％，84.75±0.42％。组分F5具有较高的体外ACEI活性(P＜0.05)，其IC50＝14.6±0.58μg/mL。组分F5经RP-HPLC分离。使用SymmetryPrepTMC18column(7um，7.8×300mm)柱。色谱条件为：流速2mL/min，检测波长220nm；流动相A：超纯水(含0.1‰三氟乙酸，v/v)，流动相B：乙腈；洗脱条件：0-30min，5％-15％B；30-55min，15％-30％B。根据洗脱峰收集各组分，冷冻干燥。RP-HPLC分离获得9个组分分别标记为F5-1至F5-9。在终浓度为0.01mg/mL下，F5-3具有较高的ACEI活性(60.06％)，F5-9具有较低的ACEI活性(9.61％)。进一步测得F5-3的IC50＝9.80±0.02μg/mL。组分F5-3通过基于TripleTOF5600的LC-ESI-MS/MS进行多肽序列分析，Mascot2.3.02软件搜索Uniprot和NCBInr数据库鉴定出6条多肽序列，分子量范围在756.4本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多肽，其氨基酸序列如序列表中序列1所示。

【技术特征摘要】
1.一种多肽，其氨基酸序列如序列表中序列1所示。2.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽对血管紧张素转化酶具有抑制作用。3.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述多肽具有降压作用。4.权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：王灵芝，乔延江，李斌，张燕玲，李玲玲，张小华，
申请(专利权)人：北京中医药大学，
类型：发明
国别省市：北京,11