TNFR2基因及其编码蛋白的应用制造技术

本发明专利技术公开了TNFR2基因及其所编码的蛋白、以及TNFR2特异性激动剂在制备和筛选治疗自身免疫性疾病的药物中的应用；本发明专利技术同时公开了一种调节性T细胞表面的分子标志物，该分子标志物为TNFR2。本发明专利技术提出了TNFR2激动剂可作为治疗自身免疫性疾病的一种药物；由于TNFR2仅局限地表达于部分细胞表面，尤其在调节性T细胞表面高表达，TNFR2参与调节性T细胞的分化、增殖及抑制功能，并维持调节性T细胞的存活状态，由此，本发明专利技术提出TNFR2激动剂能治疗自身免疫性或炎症性疾病，如多发性硬化，类风湿关节炎等，能够靶向作用于TNFR2，激活TNFR2信号的免疫调节功能，避免了完全阻断TNFα信号所带来的严重副作用，降低了用药剂量。

【技术实现步骤摘要】
TNFR2基因及其编码蛋白的应用
本专利技术涉及生物医药
，尤其是TNFR2基因及其编码蛋白的应用；本专利技术还涉及生物标记物，尤其是T细胞表面的一种分子标记；更具体地，本专利技术涉及TNFR2激动剂，其通过作用于调节性T细胞表面的TNFR2，促进调节性T细胞的分化、增殖和功能等来治疗自身免疫性或炎症性疾病。
技术介绍
众所周知，肿瘤坏死因子(TumorNecrosisFactor,TNF)α是一种非常重要的前炎症因子，参与激活并促进免疫反应以清除病原体。而近年来，越来越多的报道发现TNFα也参与免疫调节活动。调节性T细胞(Tregs)作为经典的抑制性T细胞亚群，在维持自身免疫耐受的稳态和预防自身免疫方面起关键作用。如果Tregs的数量不足或者功能受损，就会导致炎症性T细胞持续性过度激活，从而导致自身免疫性疾病的发生。另一方面，越来越多的研究发现TNFR2在Tregs表面高表达，且TNFα能够增强Tregs的稳定性和功能。而针对于TNFα所介导的炎症反应而出现的TNFα总抑制剂，虽然在某些自身免疫病中起到了一定的作用，然而，有一些患者对其没有反应，甚至长期服用出现严重的副作用。TNFR1和TNFR2的胞内段没有功能信号通路，两者传导激活不同的细胞活动。而TNFR1和TNFR2对调节性T细胞的具体作用尚不清楚。因此，TNFR1和TNFR2对炎症T细胞和调节性T细胞的作用还有待进一步研究。
技术实现思路
基于上述问题，本申请的专利技术人在研究过程中，通过大量的实验研究TNFα/TNFR对Tregs分化、存活状态、增殖和抑制功能的影响过程中，意外地发现TNFR2在Tregs表面高表达，TNFα通过TNFR2促进Tregs的分化、增殖和抑制功能。基于此发现，专利技术人提出的技术方案包括以下几个方面：在第一个方面，本专利技术提供了TNFR2基因在制备和筛选治疗自身免疫性或炎症性疾病的药物中的应用。在第二个方面，本专利技术提供了TNFR2基因所编码的蛋白质在制备和筛选治疗自身免疫性或炎症性疾病的药物中的应用。在第三个方面，本专利技术提供了TNFR2特异性激动剂在制备和筛选治疗自身免疫性或炎症性疾病的药物中的应用。优选地，所述自身免疫性疾病为多发性硬化、类风湿关节炎、脑脊髓炎或结肠炎。在第四个方面，本专利技术提供了一种用于治疗自身免疫性或炎症性疾病的药物，所述药物含有TNFR2特异性激动剂。根据本专利技术的实施例，所述TNFR2在Tregs表面高表达，激活TNFR2能够促进Tregs的分化、扩增和抑制功能，而TNFR2缺乏可能导致Tregs的扩增和抑制功能受损，从而导致自身免疫病的发生。根据本专利技术的实施例，本专利技术提出了特异性TNFR2激动剂能够介导iTregs的分化。TNFα能够促进iTreg细胞的体外分化，并且随着TNFα浓度的升高诱导为iTreg细胞就越多。加入TNFα的时间越早，诱导为iTreg细胞就越多。TNFR1基因敲除后不影响naiveCD4+T细胞向iTregs分化，而TNFR2基因敲除后iTregs的分化明显受损，且对TNFα刺激无反应。本专利技术还提出了特异性TNFR2激动剂能够介导Tregs的扩增。专利技术人发现TNFR2能够促进Tregs的扩增，尤其是在机体发生过度自身免疫反应时，TNFR2基因敲除后，Tregs的扩增能力明显受损，不能扩增到一定数目，因而Tregs不能有效发挥免疫抑制能力，抑制过度的免疫反应，从而导致了自身免疫病的发生。而特异性TNFR2激动剂能够促进Tregs在体内的扩增，起到治疗自身免疫性疾病的作用。本专利技术又提出了特异性TNFR2激动剂能够介导Tregs的抑制功能。专利技术人发现TNFα预处理的Tregs的体外抑制功能增强，而且TNFα的存在并不损伤Tregs的抑制功能。但是将TNFR2基因敲除之后，Tregs的抑制功能明显受损。这提示TNFR2在Tregs发挥抑制功能时起关键作用。而特异性TNFR2激动剂能够促进Tregs的抑制功能，在发生自身免疫时，扩大其免疫抑制能力，起到治疗自身免疫性疾病的作用。优选地，所述药物中含有能使TNFR2基因过表达的试剂；优选地，所述药物中含有能促进TNFR2基因所编码的蛋白活性的试剂。由此，通过提升TNFR2基因的表达水平，进而获得更多TNFR2编码蛋白质，或促进TNFR2基因所编码的蛋白活性，都能促进Tregs的分化、扩增和抑制功能。优选地，所述自身免疫性疾病为多发性硬化、类风湿关节炎、脑脊髓炎或结肠炎。在第五个方面，本专利技术提供了一种调节性T细胞表面的分子标志物，所述分子标志物为TNFR2，在正常人的调节性T细胞表面，TNFR2的表达水平高于TNFR1；而在自身免疫性疾病患者的调节性T细胞表面，所述TNFR2的表达水平下降，而TNFR1的表达水平上升。根据本专利技术的实施例，TNFR1基因敲除导致其在体内和体外向Th1和Th17方向转化的能力受损，而TNFR2基因敲除的naiveCD4+T细胞向Tregs分化的能力受损。而TNFR2基因敲除的小鼠发展为自身免疫性疾病的症状较WT小鼠更重，而TNFR1基因敲除的小鼠则能够对抗自身免疫病的发生。TNFR1基因敲除小鼠的Tregs扩增能力和免疫抑制能力正常，而TNFR2基因敲除的Tregs扩增能力和免疫抑制能力均明显受损。优选地，所述自身免疫性疾病为多发性硬化或类风湿关节炎。根据本专利技术的实施例，专利技术人还发现TNFR1基因敲除后Tregs表面TNFR2表达水平升高，TNFR2基因敲除后Tregs表面TNFR1表达水平升高。而且专利技术人还发现，在类风湿关节炎和多发性硬化患者的外周血中提取的Tregs表面，TNFR1表达水平升高，而TNFR2表达水平下降，因此，专利技术人进一步提出了TNFR1和TNFR2在Tregs表面的表达水平随着免疫微环境的变化而改变，两者存在功能上的重叠和代偿；非炎症环境下，TNFR1和TNFR2受体完整，可能两个受体的信号维持稳态平衡；炎症微环境下，Tregs表面能的TNFR1表达水平升高，这可能使Tregs趋向于凋亡，或向炎症细胞分化；而TNFR2表达水平下降，其稳定性、增殖能力及功能均可能受损。因此，本专利技术实施例提出的特异性TNFR2激动剂避免了TNFα完全性抑制剂导致的全身毒性和其他严重副作用，也可能间接地降低了Tregs表面的TNFR1的表达。综上所述，本专利技术的有益效果为：本专利技术首次提出TNFR2激动剂可作为治疗自身免疫性疾病的一种药物，TNFα作为一种多向功能细胞因子，其受体TNFR1广泛表达于全身细胞，主要介导炎症反应；而TNFR2仅局限地表达于部分细胞表面，尤其在调节性T细胞表面高表达；TNFR2参与调节性T细胞的分化、增殖及抑制功能，并维持调节性T细胞的存活状态；本专利技术所提出的TNFR2激动剂能治疗自身免疫性或炎症性疾病，如多发性硬化、类风湿关节炎等，能够靶向作用于TNFR2，激活TNFR2信号的免疫调节功能，避免了完全阻断TNFα信号所带来的严重副作用，降低了用药剂量。附图说明图1是带有Foxp3-GFP的naiveCD4+T细胞在体外诱导分化为iTregs的结果图；其中a，b和c显示了TNFα以剂量依赖的形式促进iTregs的分化，d和e显示了TNFα维持iTregs的稳定性，f显示了TNFR1-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.TNFR2基因在制备和筛选治疗自身免疫性或炎症性疾病的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.TNFR2基因在制备和筛选治疗自身免疫性或炎症性疾病的药物中的应用。2.TNFR2基因所编码的蛋白质在制备和筛选治疗自身免疫性或炎症性疾病的药物中的应用。3.TNFR2特异性激动剂在制备和筛选治疗自身免疫性或炎症性疾病的药物中的应用。4.根据权利要求1～3任一项所述的应用，其特征在于，所述自身免疫性疾病为多发性硬化、类风湿关节炎、脑脊髓炎或结肠炎。5.一种用于治疗自身免疫性或炎症性疾病的药物，其特征在于，所述药物含有TNFR2特异性激动剂。6.根据权利要求5所述的药物，其特征在于，所述药物中含有能使TNFR2基因过表达的试剂。7.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑颂国，杨素娟，王菊华，
申请(专利权)人：中山大学附属第三医院中山大学肝脏病医院，
类型：发明
国别省市：广东,44