一种链霉菌和以链霉菌产生的angucycline类化合物及其制备与应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物技术领域，具体涉及一种链霉菌和以链霉菌产生的angucycline类化合物及其制备与应用。所述链霉菌为Streptomyces dengpaensis XZHG99，于2018年5月26日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.16347。本发明专利技术提供的链霉菌能发酵产生较高含量的angucycline类化合物，尤其是能产生新型angucycline类抗肿瘤活性化合物grincamycins L、M和N，它们可作为医用抗肿瘤药物；本发明专利技术所提供的制备方法简单、高效、所得化合物纯度高。本发明专利技术在制备抗肿瘤药物方面具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种链霉菌和以链霉菌产生的angucycline类化合物及其制备与应用
本专利技术涉及微生物
，具体涉及一种链霉菌和以链霉菌产生的angucycline类化合物及其制备与应用。
技术介绍
链霉菌属是放线菌目中最庞大的成员，为革兰氏阳性、好氧、丝状菌，广泛分布于自然环境中，产生多种生物活性的次级代谢产物，如抗生素、维生素、酶制剂、酶抑制剂等。据统计，临床抗生素有60%以上来自链霉菌。近年来研究发现存在于低氧、盐碱、极寒、高温、干旱等特殊生境中的链霉菌具有代谢产物特殊、化学结构新颖、生物活性强等作为药用资源的巨大潜力。Angucyclines是一类具有抗肿瘤、抗病毒、抗菌、酶抑制、血小板凝集抑制及免疫抑制等多种生物活性的芳香多聚酮类化合物。目前已发现的angucycline类化合物有landomycins,urdamycins,jadomycins,gilvocarcin,ravidomycins,chrysomycins,oviedomycins,gaudimycins,azicemicins,kinamycins,hatomarubigins,saquayamycins和BE-7585A等。其独特的化学结构及其广泛的生物活性备受药物研发工作者的青睐。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种链霉菌。本专利技术还提供了一种以链霉菌产生的angucycline类化合物。本专利技术还提供了一种上述以链霉菌产生的angucycline类化合物的制备与应用。为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案为：本专利技术提供了一种链霉菌，该链霉菌为StreptomycesdengpaensisXZHG99，于2018年5月26日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCCNO.16347。本专利技术还提供了一种上述链霉菌产生的angucycline类化合物，化合物结构式如式（）所示的grincamycinsL（1）、M（2）和N（3）；（）。本专利技术还提供了一种以链霉菌产生的angucycline类化合物的制备方法，包括以下步骤：（1）将链霉菌StreptomycesdengpaensisXZHG99接种于含人工珊瑚盐的淀粉酪素液体培养基中发酵；将发酵液和菌体固液分离，其中发酵液用等体积乙酸乙酯萃取三次，再用40～50°C水浴旋转蒸发得到发酵液萃取物浸膏；菌体经70%～90%丙酮水溶液浸提三次，将浸提液用40～50°C水浴旋转蒸发去除丙酮，再用乙酸乙酯萃取得到菌体浸提物浸膏;（2）将发酵液萃取物浸膏和菌体浸提物浸膏合并，采用正相硅胶柱A分离，按照二氯甲烷：甲醇（v/v）比为100：0–0：100梯度洗脱，收集所有不同体积比的二氯甲烷-甲醇（v/v）的洗脱组分，通过薄层层析（TLC）和高效液相色谱（HPLC）分析获得浸膏中所含化合物的色谱馏分;（3）将上述所得的色谱馏分采用正相硅胶柱B进一步分离，按照二氯甲烷：丙酮（v/v）比为100：0–0：100梯度洗脱，收集所有不同体积比的二氯甲烷-丙酮（v/v）的洗脱组分，通过TLC分析获得含angucycline类化合物的色谱馏分，编号为Fr.3-1–Fr.3-6;（4）将色谱馏分Fr.3-4采用SephadexLH-20色谱柱进行分离纯化，按照甲醇：二氯甲烷（v/v）比为1：1等度洗脱，收集甲醇-二氯甲烷洗脱液，将收集的组分再用反相HPLC进行纯化，用乙腈：水（v/v）比为70：30的流动相等度洗脱，流速为3.0ml/min，收集保留时间为27.3min的色谱峰即得到grincamycinL（1）;（5）将色谱馏分Fr.3-5采用SephadexLH-20色谱柱进行分离纯化，按照甲醇：二氯甲烷（v/v）比为1：1等度洗脱，收集到四个甲醇-二氯甲烷洗脱组分，将其中含量最大的组分再用反相HPLC进行纯化，用甲醇：水（v/v）比为77：23的流动相等度洗脱，流速为3.0ml/min，收集保留时间为14.6min的色谱峰即得到grincamycinM（2）;（6）将色谱馏分Fr.3-3采用反相中压色谱进行纯化，按照甲醇：水（v/v）比为100：0–0：100梯度洗脱，收集甲醇-水洗脱液，将收集的组分再用反相HPLC进行纯化，用甲醇：水：冰醋酸（v/v/v）比为95：5：0.05的流动相等度洗脱，流速为3.0ml/min，收集保留时间为13.6min的色谱峰即得到grincamycinN（3）。进一步的，步骤（1）中，将链霉菌StreptomycesdengpaensisXZHG99经淀粉酪素培养基活化后接种于含人工珊瑚盐的淀粉酪素液体培养基中发酵培养5～10d，温度为25～35°C，转速为120～200rpm。本专利技术所使用的含人工珊瑚盐的淀粉酪素液体培养基为，可溶性淀粉3～10g，干酪素0.1～0.5g，KNO30.02～0.08g，MgSO4·7H2O0.02～0.08g，K2HPO4·3H2O1～5g，CaCO30.01～0.05g，FeSO4·7H2O0.001～0.003g，人工珊瑚盐20～50g，用蒸馏水配制1L，pH7.0～8.0。本专利技术还提供了一种上述以链霉菌产生的angucycline类化合物的应用，所述化合物可作为制备医药目的的抗肿瘤药物。上述化合物可作为抗肺癌、乳腺癌或肝癌的药物。本专利技术所述链霉菌，链霉菌的分类学命名为StreptomycesdengpaensisXZHG99，分离于中国西藏仲巴五沙漠，该菌株于2018年5月26日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCCNO.16347。保藏单位地址为中国.北京。本专利技术的优点为：（1）本专利技术提供了一种分离于中国西藏仲巴五彩沙漠的StreptomycesdengpaensisXZHG99，其能发酵产生较高含量的angucycline类化合物，尤其是能产生新型angucycline类抗肿瘤活性化合物grincamycinsL、M和N，它们可作为医用抗肿瘤药物；（2）本专利技术所提供的制备方法简单、高效、所得化合物纯度高。本专利技术在制备抗肿瘤药物方面具有良好的应用前景。保藏信息保藏时间：2018年5月26日保藏单位：中国普通微生物菌种保藏管理中心；保藏编号：CGMCCNO.16347；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；分类命名：StretomycesdengpaensisXZHG99附图说明图1为本专利技术实施例提供的StreptomycesdengpaensisXZHG99基于其16SrRNA基因序列构建的进化树。图2为本专利技术实施例提供的StreptomycesdengpaensisXZHG99的扫描电镜图。图3为本专利技术实施例提供的化合物grincamycinL（1）的HR-ESI-MS图。图4为本专利技术实施例提供的化合物grincamycinL（1）的1HNMR（BrukerAV600，CDCl3）光谱图。图5为本专利技术实施例提供的化合物grincamycinsL（1）的13CNMR（BrukerAV600，CDCl3）光谱图。图6为本专利技术实施例提供的化合物grincamycinL（1）的HSQC（BrukerAV600，CDCl3）光谱图。图7为本专利技术实施例提供的化合物grinc本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种链霉菌，其特征在于：该链霉菌为Streptomyces dengpaensis XZHG99，于2018年5月26日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC NO.16347。

【技术特征摘要】
1.一种链霉菌，其特征在于：该链霉菌为StreptomycesdengpaensisXZHG99，于2018年5月26日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCCNO.16347。2.一种以权利要求1所述的链霉菌产生的angucycline类化合物，其特征在于，如式（Ⅰ）所示的grincamycinsL（1）、M（2）和N（3）；。3.一种如权利要求2所述的以链霉菌产生的angucycline类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将链霉菌StreptomycesdengpaensisXZHG99接种于含人工珊瑚盐的淀粉酪素液体培养基中发酵；将发酵液和菌体固液分离，其中发酵液用等体积乙酸乙酯萃取三次，再用40～50°C水浴旋转蒸发得到发酵液萃取物浸膏；菌体经70%～90%丙酮水溶液浸提三次，将浸提液用40～50°C水浴旋转蒸发去除丙酮，再用乙酸乙酯萃取得到菌体浸提物浸膏;（2）将发酵液萃取物浸膏和菌体浸提物浸膏合并，采用正相硅胶柱A分离，按照二氯甲烷：甲醇（v/v）比为100：0–0：100梯度洗脱，收集所有不同体积比的二氯甲烷-甲醇（v/v）的洗脱组分，通过薄层层析（TLC）和高效液相色谱（HPLC）分析获得浸膏中所含化合物的色谱馏分;（3）将上述所得的色谱馏分采用正相硅胶柱B进一步分离，按照二氯甲烷：丙酮（v/v）比为100：0–0：100梯度洗脱，收集所有不同体积比的二氯甲烷-丙酮（v/v）的洗脱组分，通过TLC分析获得含angucycline类化合物的色谱馏分，编号为Fr.3-1–Fr.3-6;（4）将色谱馏分Fr.3-4采用SephadexLH-20色谱柱进行分离纯化，按照甲醇：二氯甲烷（v/v）比为1：1等度洗脱，收集甲醇-二氯甲烷洗脱液，将收集的组分再用反相HPLC进行纯化，用乙腈：水（v/v）比为70：30的流动相等度洗脱，流速为3.0ml/min，收集保留时...

【专利技术属性】
技术研发人员：李玉梅，李亚美，李强，张华，鲍洁，
申请(专利权)人：济南大学，
类型：发明
国别省市：山东,37