一种帕金森病致病基因、试剂盒及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种帕金森病致病基因、试剂盒及应用，其中，该致病基因包括Chr6:118015345、Chr6:118014264、Chr6:118014276、Chr6:118015279和Chr6:118028193，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1‑5所示。检测方法是样品组织DNA的提取；对DNA样本进行聚合酶链扩增反应，获取产物；对所述产物进行核苷酸序列测定，以确定所述生物样本中是否含有NUS1基因的突变。

【技术实现步骤摘要】
一种帕金森病致病基因、试剂盒及应用
本专利技术属于基因工程
，具体地说，涉及一种帕金森病致病基因、试剂盒及应用。
技术介绍
帕金森病(Parkinson’sDisease，PD)，为一种常见的神经退行性疾病(Neurodegenerativediseases)，患病率高，国内外流行病学调查显示65岁以上的老年人群中PD的患病率约为1～2％，80岁以上老年人群患病率高达4％。我国现有约250万名PD患者，随着我国人口老龄化及人均寿命的延长，预计到2030年，我国将有约500万名PD患者，占世界PD患者总数的57％。PD患者隐袭起病，早期临床表现多不明显，给临床工作中早期诊断带来很大困难，而当患者出现典型的帕金森症状进行临床诊断时，此时患者多已进入疾病中晚期，已错过最佳干预治疗期，给患者及家庭带来沉重负担。因此，对PD的病因和发病机制的探讨，以便更好地对PD进行早期诊断与及早防治将显得迫切而必要。PD主要临床表现包括运动迟缓(bradykinesia)、静止性震颤(resttremor)、肌强直(rigidity)等运动症状和嗅觉障碍(hyposmia)、快动眼期睡眠行为障碍(Rapideyemovementsleepbehaviordisorder,RBD)、焦虑/抑郁(anxiety/depression)、自主神经功能障碍(autonomicnervousdysfunction)等非运动症状(non-motorsymptoms)。其病理特征主要是中脑黑质多巴胺能神经元变性缺失和残留神经元胞体中路易小体(Lewybody)、路易轴突(Lewyneurities)的形成。至今，PD的病因及发病机制仍不十分明确，现多认为老年化因素(aging)、遗传因素(geneticfactors)和环境因素(environmentalfactors)及其共同作用而参与疾病发生。自上世纪90年代鉴定了PD的第一个致病基因-SNCA以来，遗传因素对PD的贡献受到越来越多关注。目前，遗传因素在PD发病机制研究、药物研发、疾病早期诊断/预警研究等方面提供了新思路。至今，在致病基因研究方面，已有20个遗传性PD致病基因被明确：其中SNCA、UCH-L1、LRRK2、HTRA2、GIGYF2、VPS35、EIF4G1、DNAJC13、CHCHD2及TMEM230基因与常染色体显性(autosomaldominant，AD)遗传性PD相关；Parkin、DJ-1、PINK1、ATP13A2、PLA2G6、FBXO7、DNAJC6、SYNJ1和VPS13C基因与常染色体隐性(autosomalrecessive,AR)遗传性PD相关；RAB39B与X连锁(X-linked)遗传性PD有关。上述致病基因的发现，为解析PD患者病因提供了新思路。几十年来，国内外许多研究人员都对PD家系进行研究，希望鉴定出更多PD候选基因。本专利技术首次鉴定了PD的新候选基因NUS1，对PD的诊断和治疗、发病机制提供了新思路。NUS1包含5个外显子(NM_138459.4)，共31345bp，编码一个由293个氨基酸组成的跨膜蛋白。NUS1序列高度保守，并在大脑高表达(含黑质及基底节)，其具体功能仍不十分明确。NUS1编码蛋白为Nogo-B受体(Nogo-Breceptor)，其可与NPC2蛋白互作，可参与细胞内胆固醇代谢、α-synuclein代谢等。目前，PD治疗主要为对因治疗，尚无治愈手段。进行早期诊断，将使患者有机会获得及时、有效、合理的干预；同时新候选基因的发现及研究，也将为PD发病机制研究提供新思路。因此PD新候选基因的发掘及其突变位点的检测，将对潜在PD患者的超早期诊断、PD发病机制研究具有重要意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种帕金森病致病基因、试剂盒及应用。为了解决上述技术问题，本专利技术公开了一种帕金森病致病基因，包括Chr6:118015345、Chr6:118014264、Chr6:118014276、Chr6:118015279和Chr6:118028193，其具有SEQIDNO.1-5的序列。本专利技术还公开了一种帕金森病致病基因的检测试剂盒，其特征在于，包括有用于扩增上述的致病基因的试剂盒。可选地，所述试剂盒中的引物序列如下所示：用于扩增Chr6:118015345位点的引物组：SEQIDNO:10和SEQIDNO:11；用于扩增Chr6:118014264位点的引物组：SEQIDNO:8和SEQIDNO:9；用于扩增Chr6:118014276位点的引物组：SEQIDNO:8和SEQIDNO:9；用于扩增Chr6:118015279位点的引物组：SEQIDNO:10和SEQIDNO:11，用于扩增Chr6:118028193位点的引物组：SEQIDNO:14和SEQIDNO:15。可选地，所述的检测试剂盒的反应体系中包括：dNTP、用于PCR反应的DNA聚合酶及其缓冲液。本专利技术还公开了一种检测上述帕金森病致病基因的PCR方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)样品组织DNA的提取；(2)通过权利要求3所述的引物对DNA样本进行聚合酶链扩增反应，获取产物；(3)对所述产物进行核苷酸序列测定，以确定所述生物样本中是否含有NUS1基因的突变。与现有技术相比，本专利技术可以获得包括以下技术效果：1)本专利技术提供了一种PD致病基因，通过对一个早发性PD核心家庭进行全基因组外显子组测序及Sanger测序分析，发现了一个新的PD致病基因NUS1基因的一种新生突变-c.691+2->A，针对该基因编码区序列设计诊断引物，专利技术检测试剂盒应用于PCR体外扩增基因组DNA，结合Sanger测序，检测PD致病基因NUS1基因的突变，应用于临床基因诊断。2)本专利技术提供了一种用于检测PD致病基因的检测试剂盒，通过将样品组织DNA提取，再通过设计PCR扩增的致病基因NUS1所有外显子及其外显子-内含子交界区序列的引物，提供了一种用于PD致病基因突变的检测试剂盒，该试剂盒检测方便、便捷。3)本专利技术为PD的发病机制研究奠定了重要基础，为治疗提供全新的理论依据，应用PD致病基因的检测试剂盒，可为临床确诊疾病提供重要的依据和参考价值，也可用于开展基因诊断和遗传咨询，有利于对该疾病的早期诊断及早期预防治疗，指导优生优育。当然，实施本专利技术的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有技术效果。附图说明此处所说明的附图用来提供对本专利技术的进一步理解，构成本专利技术的一部分，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：图1是本专利技术突变序列SEQIDNO.1-5的示意图，即PD患者NUS1基因测序的突变序列结果图；其中a表示一个早发性PD核心家庭中发现NUS1基因的一种新生突变-c.691+2->A，PCR扩增产物上的Chr6:118015345位碱基插入A碱基；b表示1例PD患者的PCR扩增产物上有Chr6:118014264位碱基C突变A；c表示2例PD患者的PCR扩增产物上有Chr6:118014276位碱基G突变C；d表示1例PD患者的PCR扩增产物上有Chr6:118015279位碱基G突变C；e表示本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种帕金森病致病基因，其特征在于，包括Chr6:118015345、Chr6:118014264、Chr6:118014276、Chr6:118015279和Chr6:118028193，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1‑5所示。

【技术特征摘要】
1.一种帕金森病致病基因，其特征在于，包括Chr6:118015345、Chr6:118014264、Chr6:118014276、Chr6:118015279和Chr6:118028193，其核苷酸序列分别如SEQIDNO.1-5所示。2.一种帕金森病致病基因的检测试剂盒，其特征在于，包括有用于扩增如权利要求1所述的致病基因的试剂盒。3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中的引物序列如下所示：用于扩增Chr6:118015345位点的引物组：SEQIDNO:10和SEQIDNO:11；用于扩增Chr6:118014264位点的引物组：SEQIDNO:8和SEQIDNO:9；用于扩增Chr6:118014276位...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐北沙，郭纪锋，严新翔，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：湖南,43