【技术实现步骤摘要】
一种白藤梨根抗肿瘤活性物质的筛选及提取方法
本专利技术涉及中药材中活性物质筛选与提取
,特别是一种白藤梨根抗肿瘤活性物质的筛选及提取方法。
技术介绍
随着社会及经济的发展,生产环境及生活方式的改变,恶性肿瘤成为威胁人类健康的主要疾病之一。自20世纪70年代以来中国恶性肿瘤发病率和死亡率呈持续增长趋势,在肝癌、食道,胃、肺等恶性肿瘤中,中国新增病例和死亡人数均居世界首位。近些年大量临床及实验数据表明中医中药在肿瘤患者的治疗过程中有其独到的作用,已经成为肿瘤综合治疗的重要组成部分。中药在改善肿瘤患者临床症状,提高患者生存质量,防止肿瘤复发转移,以及与化疗配合增效减毒等方面都有很好的疗效。但是,中药所含的化学成分十分复杂,既含有效成分,也有无效成分,日常煎煮服用也不方便。中药提取就是利用一些技术最大限度提取其中有效成份,使得中药制剂的内在质量和临床治疗效果提高,使中药的效果得以最大限度的发挥。提取中药中的有效成分并进一步加以分离、纯化,得到有效单体是当前中药研究领域中的一项重要内容。从中草药中提取出抗肿瘤的有效活性成分,已成为抗肿瘤药物开发的重要来源。毛花猕猴桃(ActinidiaerianthaBenth),即我们俗称的白藤梨,是猕猴桃科猕猴桃属植物,广泛分布于浙江、福建、江西、广西及广东。白藤梨根是毛花猕猴桃的干燥根,性寒、味苦涩,具有清热、利湿、活血消肿、解毒等功效,为畲族民间治疗肿瘤的习用药材,广泛地用于抗肿瘤的治疗。但是长久以来白藤梨根抗肿瘤的有效活性部位并不明确,导致其有效活性成分的提取也缺乏针对性。现有的提取工艺一般采用水或乙醇为溶剂进行回流 ...
【技术保护点】
1.一种白藤梨根抗肿瘤活性物质的筛选方法,其特征在于该白藤梨根抗肿瘤活性物质的筛选方法包括以下步骤:⑴预处理:取一定量的白藤梨根药材,烘干后高速粉碎机粉碎,过药筛得到颗粒均匀的白藤梨根粉末;⑵制备石油醚提取物:称取适量白藤梨根粉末,量取一定体积的石油醚浸泡白藤梨根粉末,超声提取后将白藤梨根药渣与提取液分离,提取液用滤纸过滤后,用旋转蒸发仪减压浓缩,得到石油醚提取物;⑶制备乙酸乙酯提取物:将步骤⑵中超声提取后的白藤梨根药渣在烘箱中烘干,挥干残余的溶剂,烘干后的药渣置于一定体积的乙酸乙酯中浸泡,浸泡后的白藤梨根药渣用乙酸乙酯为溶剂采用渗漉法提取,药渣待用,渗漉液用滤纸过滤后在旋转蒸发仪中减压浓缩,得到乙酸乙酯提取物;⑷制备乙醇提取物:将步骤⑶中渗漉提取后的白藤梨根药渣经烘箱烘干溶剂,加入一定体积的乙醇浸泡,浸泡后的白藤梨根药渣用乙醇为溶剂采用渗漉法提取,渗漉液用滤纸过滤后在旋转蒸发仪中减压浓缩,得到乙醇提取物;⑸活性评价:采用RTCA DP实时细胞分析系统进行体外抗肿瘤实验,检测以上三种提取物对肿瘤细胞活性的影响,根据实验结果筛选出抗肿瘤效果最佳的提取物。
【技术特征摘要】
1.一种白藤梨根抗肿瘤活性物质的筛选方法,其特征在于该白藤梨根抗肿瘤活性物质的筛选方法包括以下步骤:⑴预处理:取一定量的白藤梨根药材,烘干后高速粉碎机粉碎,过药筛得到颗粒均匀的白藤梨根粉末;⑵制备石油醚提取物:称取适量白藤梨根粉末,量取一定体积的石油醚浸泡白藤梨根粉末,超声提取后将白藤梨根药渣与提取液分离,提取液用滤纸过滤后,用旋转蒸发仪减压浓缩,得到石油醚提取物;⑶制备乙酸乙酯提取物:将步骤⑵中超声提取后的白藤梨根药渣在烘箱中烘干,挥干残余的溶剂,烘干后的药渣置于一定体积的乙酸乙酯中浸泡,浸泡后的白藤梨根药渣用乙酸乙酯为溶剂采用渗漉法提取,药渣待用,渗漉液用滤纸过滤后在旋转蒸发仪中减压浓缩,得到乙酸乙酯提取物;⑷制备乙醇提取物:将步骤⑶中渗漉提取后的白藤梨根药渣经烘箱烘干溶剂,加入一定体积的乙醇浸泡,浸泡后的白藤梨根药渣用乙醇为溶剂采用渗漉法提取,渗漉液用滤纸过滤后在旋转蒸发仪中减压浓缩,得到乙醇提取物;⑸活性评价:采用RTCADP实时细胞分析系统进行体外抗肿瘤实验,检测以上三种提取物对肿瘤细胞活性的影响,根据实验结果筛选出抗肿瘤效果最佳的提取物。2.根据权利要求1所述的一种白藤梨根抗肿瘤活性物质的筛选方法,其特征在于所述的三种提取物中乙酸乙酯提取物中所含抗肿瘤活性物质含量最高,对肿瘤细胞抑制作用明显,乙酸乙酯提取物对人肝癌HepG2细胞有显著抑制作用,IC50为7.6μg/mL;对人肺癌A549细胞有抑制作用,IC50为150μg/mL。3.根据权利要求1或2所述的一种白藤梨根抗肿瘤活性物质的筛选方法,其特征在于所述抗肿瘤效果最佳的提取物是乙酸乙酯提取物,其中的活性成分为三萜类化合物。4.根据权利要求1所述的一种白藤梨根抗肿瘤活性物质的筛选方法,其特征在于所述步骤⑸中选用的肿瘤细胞为人肺癌A549细胞、人肝癌HepG2细胞中的至少一种。5.根据权利要求1所述的一种白藤梨根抗肿瘤活性物质的筛选方法,其特征在于所述步骤⑸的具体操作为:取对数生长期的肿瘤细胞,胰酶消化后制成单细胞悬液,调整细胞浓度为5×104个...
【专利技术属性】
技术研发人员:张家敏,张骋,
申请(专利权)人:张家敏,张骋,金华市人民医院,
类型:发明
国别省市:浙江,33
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