恶性脑肿瘤的检测试剂盒或器件和检测方法技术

本发明专利技术提供恶性脑肿瘤的检测用试剂盒或器件、以及检测方法。本发明专利技术涉及包含能够与受检体的样品中的规定miRNA特异性地结合的核酸的恶性脑肿瘤检测用试剂盒或器件，以及包括体外(in vitro)测定该miRNA的步骤的恶性脑肿瘤的检测方法。

Detection kit or device and detection method for malignant brain tumors

The invention provides a detection kit or device for malignant brain tumors and a detection method. The present invention relates to a detection kit or device for malignant brain tumors containing specified RNA specifically bound to a sample of a subject, and a detection method for malignant brain tumors including steps for in vitro determination of the RNA.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】恶性脑肿瘤的检测试剂盒或器件和检测方法
本专利技术涉及用于检查受检体有无罹患恶性脑肿瘤的、包含能够与特定miRNA特异性地结合的核酸的恶性脑肿瘤的检测用试剂盒或器件，以及包括使用该核酸测定该miRNA的表达量的步骤的恶性脑肿瘤的检测方法。
技术介绍
脑肿瘤分为由脑组织自身发生的原发性脑肿瘤、和由其他脏器的癌向脑转移而成的转移性脑肿瘤。原发性脑肿瘤分为良性与恶性，根据成为其起源的细胞型进行细分类。原发性脑肿瘤主要分类为神经胶质瘤(恶性)、中枢神经系统原发恶性淋巴瘤(恶性)、脑脊膜瘤(主要为良性)、下垂体腺瘤(良性)、神经鞘瘤(良性)、先天性肿瘤等，神经胶质瘤占全体的28％。神经胶质瘤根据构成肿瘤的细胞形态进一步分类为星形细胞瘤、少突胶质瘤、少突胶质星形细胞瘤、毛细胞型星形细胞瘤、室管膜瘤、神经节神经胶质瘤等。根据由国立研究开发法人国立癌症研究中心癌症对策信息中心(日本)所报告的2014年日本国内按部位区分的癌症死亡率的统计，脑/中枢神经系统的癌症的死亡数为2302人，2013年按部位区分的癌症死亡率为男性占2.0％、女性占1.5％。这样，脑肿瘤虽然在全部癌症中考虑癌症患者100人中为5人以下，发生率低，但如果仅考虑儿童癌患者，则脑肿瘤多得仅次于白血病，在幼年中多达儿童的癌患者每5人就有1人。在UICC(国际抗癌联合会；UnioInternationalisContraCancrum)“TNM恶性肿瘤的分类”第6版中，没有规定脑肿瘤的病期分类(TNM)。脑肿瘤的恶性度根据2007年的WHO分类而分类为I～IV级。不存在脑肿瘤中的有用血液标志物。通常，脑肿瘤通过患者自述头痛、呕吐、麻痹、失语/构音障害、意识障害等自觉症状，以及轻微的头部外伤的图像检查、脑健康检查(脳ドック)这样的健康诊断中的图像检查等被发现。图像诊断中利用CT、MRI、脑血管造影等。在通过图像诊断发现了脑肿瘤时，通过开颅手术摘出肿瘤，使用摘出的组织进行病理诊断。目前用于以血液中的标志物发现恶性脑肿瘤的肿瘤标志物在临床现场尚未普及。另一方面，尚在研究阶段的使用以血液为代表的生物体样本中的miRNA的表达量来治疗/诊断脑肿瘤的方法如下所述，尚未实用化。专利文献1中记载了使用在人的成胶质细胞瘤干细胞与正常神经干细胞之间表达量有差异的miRNA来治疗/诊断包含脑肿瘤的癌症的方法。但是，专利文献1停留于记载细胞中的miRNA表达量的变化数据。获得脑细胞作为样品带给患者的肉体负担重，因此不优选以脑细胞作为样品的检查方法。另外，关于专利文献1所记载的诊断方法，没有对于判别脑肿瘤的具体的准确度、灵敏度、特异度等判别性能、手段的记载，缺乏产业上的实用性。现有技术文献专利文献专利文献1：美国专利申请公开第US2014/0088170
技术实现思路
专利技术要解决的课题本专利技术的课题是提供新的恶性脑肿瘤标志物、和能有效地检测恶性脑肿瘤的方法。用于解决课题的方法如上所述，恶性脑肿瘤的检测中不存在现有的肿瘤标志物，另外对于研究阶段的标志物没有具体显示性能、检测的方法，因此在利用它们时，可能将健常体误诊为恶性脑肿瘤患者而造成实施无益的追加检查、漏检恶性脑肿瘤患者而造成丧失治疗机会。另外，用于测定肿瘤标志物的脑组织采集存在伴随开颅手术的风险，带给患者的侵袭性高而不优选，因此开发使用能够低侵袭地采集的血液的简便且准确度高的非侵袭的诊断标志物在临床上是重要的。特别是预后差的恶性脑肿瘤的早期发现、早期治疗可期待成为治疗成绩提高的突破点。本专利技术者们为了解决上述课题而进行了深入研究，结果从可低侵袭地采集的血液中找到了能够用于恶性脑肿瘤的检测标志物的多种基因(miRNA)，发现通过使用能够与这些基因特异性结合的核酸，能够有意义地检测恶性脑肿瘤，由此完成了本专利技术。即，本专利技术具有以下特征。(1)恶性脑肿瘤的检测用试剂盒，包含能够与恶性脑肿瘤标志物特异性地结合的核酸，所述恶性脑肿瘤标志物是选自由miR-1909-3p、miR-6869-5p、miR-3178、miR-4787-5p、miR-6510-5p、miR-4695-5p、miR-4634、miR-4449、miR-3195和miR-6836-3p组成的组中的至少1种多核苷酸。(2)根据(1)所述的试剂盒，其中，miR-1909-3p为hsa-miR-1909-3p，miR-6869-5p为hsa-miR-6869-5p，miR-3178为hsa-miR-3178，miR-4787-5p为hsa-miR-4787-5p，miR-6510-5p为hsa-miR-6510-5p，miR-4695-5p为hsa-miR-4695-5p，miR-4634为hsa-miR-4634，miR-4449为hsa-miR-4449，miR-3195为hsa-miR-3195，并且miR-6836-3p为hsa-miR-6836-3p。(3)根据(1)或(2)所述的试剂盒，所述核酸是选自由下述(a)～(e)所示的多核苷酸组成的组中的多核苷酸，(a)由序列号1～10的任一项所示的碱基序列或该碱基序列中u为t的碱基序列组成的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，(b)包含序列号1～10的任一项所示的碱基序列的多核苷酸，(c)由与序列号1～10的任一项所示的碱基序列或该碱基序列中u为t的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，(d)包含与序列号1～10的任一项所示的碱基序列或该碱基序列中u为t的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸，和(e)与所述(a)～(d)的任一多核苷酸在严格条件下杂交的多核苷酸。(4)根据(1)～(3)的任一项所述的试剂盒，所述试剂盒还包含能够与别的恶性脑肿瘤标志物特异性地结合的核酸，所述别的恶性脑肿瘤标志物是miR-187-5p的多核苷酸。(5)根据(4)所述的试剂盒，其中，miR-187-5p为hsa-miR-187-5p。(6)根据(4)或(5)所述的试剂盒，其中，能够与miR-187-5p的多核苷酸特异性地结合的核酸是选自由下述(f)～(j)所示的多核苷酸组成的组中的多核苷酸，(f)由序列号11所示的碱基序列或该碱基序列中u为t的碱基序列组成的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，(g)包含序列号11所示的碱基序列的多核苷酸，(h)由与序列号11所示的碱基序列或该碱基序列中u为t的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，(i)包含与序列号11所示的碱基序列或该碱基序列中u为t的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸，和(j)与所述(f)～(i)的任一多核苷酸在严格条件下杂交的多核苷酸。(7)恶性脑肿瘤的检测用器件，包含能够与恶性脑肿瘤标志物特异性地结合的核酸，所述恶性脑肿瘤标志物是选自由miR-1909-3p、miR-6869-5p、miR-3178、miR-4787-5p、miR-6510-5p、miR-4695-5p、miR-4634、miR-4449、miR本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.恶性脑肿瘤的检测用试剂盒，包含能够与恶性脑肿瘤标志物特异性地结合的核酸，所述恶性脑肿瘤标志物是选自由miR‑1909‑3p、miR‑6869‑5p、miR‑3178、miR‑4787‑5p、miR‑6510‑5p、miR‑4695‑5p、miR‑4634、miR‑4449、miR‑3195和miR‑6836‑3p组成的组中的至少1种多核苷酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.04.01 JP 2016-0747171.恶性脑肿瘤的检测用试剂盒，包含能够与恶性脑肿瘤标志物特异性地结合的核酸，所述恶性脑肿瘤标志物是选自由miR-1909-3p、miR-6869-5p、miR-3178、miR-4787-5p、miR-6510-5p、miR-4695-5p、miR-4634、miR-4449、miR-3195和miR-6836-3p组成的组中的至少1种多核苷酸。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中，miR-1909-3p为hsa-miR-1909-3p，miR-6869-5p为hsa-miR-6869-5p，miR-3178为hsa-miR-3178，miR-4787-5p为hsa-miR-4787-5p，miR-6510-5p为hsa-miR-6510-5p，miR-4695-5p为hsa-miR-4695-5p，miR-4634为hsa-miR-4634，miR-4449为hsa-miR-4449，miR-3195为hsa-miR-3195，并且miR-6836-3p为hsa-miR-6836-3p。3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，所述核酸是选自由下述(a)～(e)所示的多核苷酸组成的组中的多核苷酸，(a)由序列号1～10的任一项所示的碱基序列或该碱基序列中u为t的碱基序列组成的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，(b)包含序列号1～10的任一项所示的碱基序列的多核苷酸，(c)由与序列号1～10的任一项所示的碱基序列或该碱基序列中u为t的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，(d)包含与序列号1～10的任一项所示的碱基序列或该碱基序列中u为t的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸，和(e)与所述(a)～(d)的任一多核苷酸在严格条件下杂交的多核苷酸。4.根据权利要求1～3的任一项所述的试剂盒，所述试剂盒还包含能够与别的恶性脑肿瘤标志物特异性地结合的核酸，所述别的恶性脑肿瘤标志物是miR-187-5p的多核苷酸。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其中，miR-187-5p为hsa-miR-187-5p。6.根据权利要求4或5所述的试剂盒，其中，能够与miR-187-5p的多核苷酸特异性地结合的核酸是选自由下述(f)～(j)所示的多核苷酸组成的组中的多核苷酸，(f)由序列号11所示的碱基序列或该碱基序列中u为t的碱基序列组成的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，(g)包含序列号11所示的碱基序列的多核苷酸，(h)由与序列号11所示的碱基序列或该碱基序列中u为t的碱基序列互补的碱基序列组成的多核苷酸、该多核苷酸的突变体、该多核苷酸的衍生物、或该多核苷酸的包含15个以上连续碱基的片段，(i)包含与序列号11所示的碱基序列或该碱基序列中u为t的碱基序列互补的碱基序列的多核苷酸，和(j)与所述(f)～(i)的任一多核苷酸在严格条件下杂交的多核苷酸。7.恶性脑肿瘤的检测用器件，包含能够与恶性脑肿瘤标志物特异性地结合的核酸，所述恶性脑肿瘤标志物是选自由miR-1909-3p、miR-6869-5p、miR-3178、miR-4787-5p、miR-6510-5p、miR-4695-5p、miR-4634、miR-4449、miR-3195和miR-6836-3p组成的组中的至少1种多核苷酸。8.根据权利要求7所述的器件，其中，miR-1909-3p为hsa-miR-1909-3p，m...

【专利技术属性】
技术研发人员：吉本真纪子，小园聪子，河内淳平，近藤哲司，信正均，落谷孝广，成田善孝，大野诚，
申请(专利权)人：东丽株式会社，国立研究开发法人国立癌症研究中心，
类型：发明
国别省市：日本,JP