本发明专利技术公开了具有1型血小板反应蛋白基序的解聚素和金属蛋白酶4，即ADAMTSL4，或其片段在制备用于预测系统性硬化症中肺动脉高压可能性的试剂中的用途。本发明专利技术采用高密度蛋白芯片技术筛选出113个SSc相关自身抗体靶抗原。采用113个SSc相关自身抗体对应靶抗原构建制备SSc相关自身抗体靶抗原蛋白芯片进行临床扩大样本验证。结果显示抗ADAMTSL4抗体在SSc合并PAH患者中的阳性率为14.9％，显著高于SSc不合并PAH患者中的阳性率2.88％，可用于预测SSc中PAH发生的可能性。
Biomarkers for systemic sclerosis diagnosis and PAH prediction
The present invention discloses the use of depolymers and metalloproteinases 4 (ADAMTSL4) with type 1 platelet reaction protein motif, or their fragments, in the preparation of reagents for predicting the possibility of pulmonary hypertension in systemic sclerosis. The invention uses high-density protein chip technology to screen 113 SSc associated autoantibody target antigens. Using 113 SSc-related autoantibodies and corresponding target antigens to construct SSc-related autoantibodies target antigen protein chip for clinical verification. The results showed that the positive rate of anti-ADAMTSL4 antibody in patients with SSC and PAH was 14.9%, which was significantly higher than that in patients with SSc and PAH. It could be used to predict the possibility of PAH in SSc.
【技术实现步骤摘要】
系统性硬化症诊断及PAH预测的生物标志物
本专利技术属于生物检测领域，具体涉及系统性硬化症诊断及PAH预测的生物标志物及其用途。
技术介绍
系统性硬化症(Systemicsclerosis,SSc)，也被称为硬皮病(scleroderma)，是一种以局限性或弥漫性皮肤增厚和纤维化为主要特征的系统性自身免疫病。本病的主要特点为固有免疫和适应性免疫功能异常以及微血管损伤，最后导致细胞外基质和胶原的过度产生和堆积。尽管临床上通常以进行性的皮肤增厚变硬及纤维化为最主要特征，但除皮肤受累外，纤维化病变还可累及多个内脏器官(肺、心脏、肾脏和消化道等)，并且这些改变才是临床预后的决定性因素。其中肺间质病变(InterstitiallungDisease，ILD)和肺动脉高压(pulmonaryhypertension，PAH)不仅是最严重且预后最差的并发症，也是患者主要的死亡原因。最新的流行病学数据显示，SSc患者中约50％会出现ILD，约15％会出现PAH。其他并发症状还包括食管功能障碍，肾危象，指端溃疡，甲褶微循环异常以及皮肤病理显示真皮层胶原纤维增多融合等。此外，SSc作为一种自身免疫性疾病，往往伴随自身抗体的产生，其中具有诊断意义最重要的自身抗体包括抗拓扑异构酶I抗体(Anti–topoisomeraseI)，也称为抗Scl-70抗体，抗着丝点抗体(Anticentromere，ACA)和抗RNA聚合酶III抗体(Anti–RNApolymeraseIII)。目前研究认为SSc是在具有遗传易感性的患者中由环境因素导致发病的，并且是由一种由免疫细胞和细胞因子介导的慢性级联放大的多灶性过程所触发，这一过程主要以血管改变、炎症、自身免疫过程以及纤维化为主要特征。例如，血管内皮细胞在受到外界刺激或异常激活之后，其细胞表面的内皮素和多种受体结合引起转化生长因子β(transforminggrowthfactorβ，TGF-β)介导的和II型骨形态发生蛋白受体(BonemorphogeneticproteinreceptortypeII，BMPR2)介导的Smad信号通路转导异常，既而影响B细胞自身抗体的分泌和T细胞的分化；T细胞异常分化，白细胞介素(Interleukin，IL)IL-1、IL-6、TGF-β等细胞因子水平的改变导致调节性T细胞(Regulatorycells，Tregs)Treg/Th17细胞调节失衡，使其下游的核因子-κB(Nuclearfactor-κB，NF-κB)等促进炎症效应的信号通路效应削弱；TGF-β信号通路的异常调节可打破其促进炎症和促进纤维化的双重效应之间的平衡，通过结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor，CTGF)向下游传递促使成纤维细胞向肌纤维母细胞转分化的信号，从而导致细胞外基质的大量产生和胶原堆积。SSc的更进一步发病机制目前仍未明确，需要不断的深入研究来补充目前所发现的可能途径。在亚洲，SSc的发病率为7.2-10.9/1000,00人，患病率为38-56.3/1000,00人，女性发病人群明显多于男性。性别比例也差别较大，女性多见，发病率约为男性的4-12倍。多在中年发病，儿童相对少见。此外，SSc患者常合并多种自身免疫性疾病，约有26％的SSc患者同时存在一种或多种自身免疫性疾病。根据皮肤受累的程度，临床上常将SSc分为：局限型SSc(lcSSc)，皮肤增厚局限于手肘或膝盖的远端，内脏器官受累较少；弥漫型(dcSSc)，皮肤受累范围较广，在早期和严重并发症中迅速发展。2013年，美国风湿病学会/欧洲风湿病联盟(AmericanCollegeofRheumatology/EuropeanLeagueAgainstRheumatism，ACR/EULAR)发布了最新的SSc分类诊断标准，强调了自身抗体在SSc诊断过程中的重要性。目前使用的SSc血清自身抗体标志物并不十分理想。抗Scl-70抗体是SSc临床使用的自身抗体，但是该抗体在SSc中的阳性率仅30％-40％左右。SSc疾病的早期病变一般属于临床治疗可逆转期或部分可逆转期，治疗效果较好；而后期或终末期属于临床治疗不可逆转期，愈后不佳，死亡率高，后果严重。因此，SSc疾病的早期诊断、早期治疗尤为重要。研究表明目前依靠组织病理活检、生化检查以及现已采用的血清自身抗体检查仅能及时发现并诊断部分SSc患者，该类疾病的诊断仍显得并不十分完善。由于自身抗体可以在自身免疫性疾病临床症状出现前10年，甚至更早出现在患者体内，因此，要彻底做到实际意义上的早期诊断以及早期有效治疗，以发病机制中处于重要地位的自身抗体作为整体，进一步全面系统研究SSc疾病的血清抗体全貌，找到用于该类疾病诊断相关的标志物是目前SSc疾病的研究重点及临床急待解决的问题。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供ADAMTSL4，或其片段在制备用于预测系统性硬化症中肺动脉高压可能性的试剂中的用途。其中，所述诊断包括：测定获自呈现系统性硬化症合并肺动脉高压的患者的生物样品中对ADAMTSL4或其片段的反应性的抗体的水平；任选地，与对照数据比较所述生物样品中抗体的水平，其中，相对于所述对照数据，所述样品中对ADAMTSL4为反应性的抗体的可检测地提高表明患系统性硬皮症的可能性。其中，所述生物样品为血清样品。其中，ADAMTSL4抗体的水平通过以下步骤来测量，包括：a.使来自患者的生物样品与ADAMTSL4或其片段接触；b.在生物样品中存在的抗体与ADAMTSL4或其片段之间形成抗体-蛋白质复合物；c.洗涤来除去任何未结合的抗体；d.添加被标记的并且对来自生物样品的抗体为反应性的检测抗体；e.洗涤来除去任何未结合的被标记的所述检测抗体；和f.将所述检测抗体的标记物转化为可检测信号；其中可检测信号的存在表明所述患者中存在抗ADAMTSL4抗体。其中，所述的ADAMTSL4或其片段沉积或固定在固相支持物上。其中，所述支持物是乳胶珠子、多孔平板或膜条的形式。其中，所述检测抗体通过共价连接到酶、具有荧光化合物或金属的标记物、或具有化学发光化合物的标记物来标记。本专利技术还提供一种用于检测和/或定量生物样品中抗ADAMTSL4抗体的诊断试剂盒，包括：一种固相支持物，其中，所述的ADAMTSL4或其片段沉积或固定在固相支持物上，所述的抗ADAMTSL4抗体作为预测系统性硬化症中肺动脉高压可能性的生物标志物。其中，所述诊断试剂盒还包括被标记的并且对来自生物样品的抗体为反应性的检测抗体。其中，所述支持物是乳胶珠子、多孔平板或膜条的形式。本专利技术采用高密度蛋白芯片技术筛选出113个SSc相关自身抗体靶抗原。采用113个SSc相关自身抗体对应靶抗原构建制备SSc相关自身抗体靶抗原蛋白芯片进行临床扩大样本验证。结果显示抗ADAMTSL4抗体在SSc合并PAH患者中的阳性率为14.9％，显著高于SSc不合并肺动脉高压患者中的阳性率2.88％，可用于预测SSc中PAH发生的可能性。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。本专利技术纳入的440例SSc患者来源于2013年1月至2018年1月北京协和医院门诊及住院病人，以及行业基金课题外院本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.具有1型血小板反应蛋白基序的解聚素和金属蛋白酶4，即ADAMTSL4，或其片段在制备用于预测系统性硬化症中肺动脉高压可能性的试剂中的用途。
【技术特征摘要】
1.具有1型血小板反应蛋白基序的解聚素和金属蛋白酶4，即ADAMTSL4，或其片段在制备用于预测系统性硬化症中肺动脉高压可能性的试剂中的用途。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述诊断包括：测定获自呈现系统性硬化症合并肺动脉高压的患者的生物样品中对ADAMTSL4或其片段的反应性的抗体的水平；任选地，与对照数据比较所述生物样品中抗体的水平，其中，相对于所述对照数据，所述样品中对ADAMTSL4为反应性的抗体的可检测地提高表明患系统性硬化症合并肺动脉高压的可能性。3.如权利要求1或2所述的用途，其中，所述生物样品为血清样品。4.如权利要求1或2所述的用途，其中，ADAMTSL4抗体的水平通过以下步骤来测量，包括：a.使来自患者的生物样品与ADAMTSL4或其片段接触；b.在生物样品中存在的抗体与ADAMTSL4或其片段之间形成抗体-蛋白质复合物；c.洗涤来除去任何未结合的抗体；d.添加被标记的并且对来自生物样品的抗体为反应性的检测抗体；e.洗涤来除去...
【专利技术属性】
技术研发人员：李永哲，胡朝军，吴琳，刘晨曦，李柳冰，张奉春，
申请(专利权)人：中国医学科学院北京协和医院，北京衡定联合生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11
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