一株短尾帚霉WNF22及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株短尾帚霉WNF22及其应用。该菌株已于2018年5月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2018293。本发明专利技术所述的短尾帚霉WNF22是高效降解磺化褐煤和废弃磺化水基钻井泥浆的菌株，抗逆性较强。菌株WNF22与植物联合处理废弃磺化水基钻井泥浆，对样品浸出液COD、总石油烃(TPH)、硫化物去除效果好，可作为废弃聚磺水基钻井泥浆生物处理的优良菌株，应用前景广阔。

A broom mold WNF22 and its application

The invention discloses a broom mold WNF22 and its application. The strain was preserved in the China Typical Culture Preservation Center on May 21, 2018, and its storage number is CCTCC NO: M 2018293. The breviscapus breviscapus WNF22 of the invention is a strain capable of efficiently degrading sulfonated lignite and waste sulfonated water-based drilling mud, and has strong stress resistance. The combined treatment of waste sulfonated water-based drilling mud by strain WNF22 and plant has good removal effect on COD, TPH and sulfide in sample leachate. It can be used as an excellent strain for biological treatment of waste polysulfonated water-based drilling mud and has broad application prospects.

【技术实现步骤摘要】
一株短尾帚霉WNF22及其应用
本专利技术属于微生物
，涉及一株短尾帚霉WNF22及其应用。
技术介绍
天然气是国民经济发展的重要能源，但天然气勘探开采过程中必须使用钻井基液以润滑冷却钻具、保护井壁、平衡地层压力。聚磺体系钻井基液，具有抗高温和降滤失、成本低等优点，广泛应用于深井和超深井钻探。聚磺体系钻井基液添加了3％-5％磺化褐煤(SMC)和2.5％磺化酚醛树脂(SMP)等有机聚合物，这些聚合物均由多种有机物聚合而成，是废弃泥浆COD的重要来源。我国每年累计产生废弃钻井泥浆2.50×106m3，且废弃泥浆具有高污染物浓度、高水溶性COD和色度大等特点。因此，若不经处理或处理不彻底进入水环境或土壤，严重影响动物、作物生长，甚至危害人体健康，开展废弃钻井泥浆无害化处理意义重大。为实现钻井废弃泥浆无害化，世界各国均开展了废弃泥浆理化处理、生物降解技术、废弃泥浆治理工艺的研究与应用。目前常用的钻井废弃泥浆处理工艺包括：注入安全地层、回填处理、固液分离、固化处理和干燥焚烧等。但这些处理工艺未对废弃泥浆进行无害化处理，存在能耗高，易造成二次污染风险。为此，近年来提出了“钻井泥浆不落地”处理工艺，将钻井废弃泥浆分成为岩屑、泥饼和水三部分，再进行分类深度处理，其中岩屑作为铺路材料回收利用，水溶液经预处理—反渗透膜工艺实现达标排放；由于泥饼含有较高浓度的磺化褐煤等有机污染物，仍需要进行无害化处理，因此迫切需要筛选高效降解微生物。自然界中微生物是环境中有机污染物生物修复的主力军。通过微生物新陈代谢，有机污染物被彻底分解、矿化降解为无机小分子或气体。迄今已报道了100多个属，200多个种的细菌、放线菌、酵母、霉菌以及藻类等微生物类群能够降解有机污染物，部分菌株已得到应用。在石油和天然气勘探领域，钻井废弃泥浆的微生物处理技术已成为国内外研究的热点，但现有研究只涉及石油烃类降解微生物，而对高分子有机物添加物的降解微生物研究较少。四川盆地是目前全国最大的天然气工业基地，但天然气开采多为深层钻探，主要采用聚磺体系钻井基液。据统计四川省每年天然气钻探井超过300口，年产废弃泥浆90000～150000m3。四川地处长江上游生态敏感和脆弱区，而废弃泥浆主要采用固化处理，环境风险高，因此迫切需要筛选高效降解聚磺废弃泥浆中有机污染物的微生物，进而建立适合四川地理气候条件的废弃磺化钻井泥浆生物处理体系。
技术实现思路
本专利技术针对现有降解聚磺废弃泥浆中有机污染物的技术难题，旨在提供一株从聚磺废弃水基钻井泥浆中分离得到的短尾帚霉WNF22，以及其在降解钻井泥浆高分子有机污染物的应用。为了达到上述技术目的，本专利技术具体通过以下技术方案实现：本专利技术从四川省德阳市废弃钻井泥浆处理场地采集废弃聚磺水基钻井泥浆样品，通过驯化、分离纯化得到真菌菌株WNF22。在PDA培养基上培养，菌株WNF22菌丝白色有膈膜、产生圆形的分生孢子、孢子大小4×2.5μm；菌落为粉质状、质地紧密。提取该菌株的总DNA，扩增ITS片段，所述的菌株WNF22的ITS序列如SEQIDNO.1所示。将所测得的ITS序列在美国国立生物信息中心(NCBI)进行比对，WNF22与GenBank模式菌株短尾帚霉(Scopulariopsisbrevicaulis)IFM55293T的相似度最高(99.7％)，WNF22在分类上属于短尾帚霉，命名为ScopulariopsisbrevicaulisWNF22。基于以上特征，本专利技术提供了一株短尾帚霉(Scopulariopsisbrevicaulis)WNF22，该菌株已进行保藏，保藏单位：中国典型培养物保藏中心；地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内；保藏日期：2018年5月21日，保藏编号为CCTCCNO：M2018293。本专利技术所得到的短尾帚霉WNF22在降解水基钻井泥浆中的应用，特别是对磺化褐煤的降解。优选的，所述的短尾帚霉WNF22或其菌悬液或其培养液或其发酵产物在降解水基钻井泥浆中的应用也在本专利技术的保护范围内。同时本专利技术还提供了所述的短尾帚霉WNF22在修复水基钻井泥浆污染介质中的应用，所述的介质为土壤、水或空气。另外本专利技术所述的短尾帚霉WNF22在制备降解水基钻井泥浆的生物制剂中的应用，所述的生物制剂包含短尾帚霉WNF22或其菌悬液或其培养液或其发酵产物。本专利技术的有益效果为本专利技术提供了一株短尾帚霉WNF22，该菌株能有效降解废弃水基钻井泥浆及主要有机添加物，接菌培养14d后，其对泥浆的COD去除率达24.32％，磺化褐煤降解率达29.29％，处理效果显著。同时，短尾帚霉WNF22具有较强抗逆能力，可作为优良降解菌用于废弃泥浆污染生物处理，应用前景良好。附图说明图1是短尾帚霉WNF22在PDA培养基上的菌落形态；图2是短尾帚霉WNF22的ITS序列的系统发育图。具体实施方式下面将结合本专利技术具体的实施例，对本专利技术技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1短尾帚霉WNF22的分离、纯化和保存从四川省德阳市钻井废弃泥浆处理场地采集聚磺废弃水基钻井泥浆样品，低温保存带回实验室。分别制备：微量元素液：MgSO42g，MnSO45g，FeSO4·7H2O5g，CaCl25g，ZnSO45g，蒸馏水1L。MS培养基：NH4Cl0.6g，K2HPO40.5g，KH2PO40.5g，微量元素液16mL，pH自然，水1000mL。PDA培养基：土豆200g，葡萄糖10g，琼脂20g，pH自然，水1000mL。取聚磺废弃水基钻井泥浆样品5.0g，加入含95mLMS培养基，25℃和140r/min条件下振荡培养7d；吸取1mL培养液，加入新鲜已灭菌的99mL含1％磺化褐煤MS培养基，25℃、140r/min继续振荡培养7d，重复此操作3次。最后吸取1mL培养液，采用梯度稀释法，于PDA培养基上涂布，25℃恒温培养。待长出菌落后，从平板上挑选形态不同的菌落在PDA平板上点接培养。待菌落产生孢子，挑去一环进行重复点接，结合显微观察，直至纯化为止。纯化后的菌株接入PDA培养基的试管斜面培养基保存。如图1所示，本实施例的分离纯化得到的菌株WNF22在PDA培养基上培养，菌丝白色有膈膜、产生圆形的分生孢子、孢子大小4×2.5μm，菌落为粉质状、质地紧密。实施例2菌株WNF22的ITS的扩增及系统发育分析提取菌株总DNA，以总DNA为模板，用ITS4(5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’)和ITS5(5’-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3’)为引物扩增ITS片段，PCR反应用Bio-RADMyCyclerTM仪器。反应体系(50μl)：2×PCRMix25μl，引物ITS4和ITS5(10μM)各1μl，DNA模板1μl，加超纯水补足至50μl；PCR反应条件：94℃预变性5min；94℃变性1min，54℃退火1min，72℃延伸2min，循环30次；72℃最终延伸8min。PCR扩增产物在1.0％的琼脂糖凝胶电泳上检测后，送到上海生工生物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株短尾帚霉WNF22，其特征在于，该菌株已于2018年5月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2018293。

【技术特征摘要】
1.一株短尾帚霉WNF22，其特征在于，该菌株已于2018年5月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：M2018293。2.根据权利要求1所述的短尾帚霉WNF22，其特征在于，所述的短尾帚霉WNF22在PDA上培养，菌丝白色有膈膜，产生圆形的分生孢子，孢子大小4×2.5μm；菌落为粉质状、质地紧密。3.根据权利要求1所述的短尾帚...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈强，刘汉军，张凌子，刘轶豪，陈立荣，黄敏，张可，廖德聪，赵珂，辜运富，余秀梅，徐开未，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川,51