一种溶瘤病毒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种溶瘤病毒及其应用，涉及生物技术领域。该溶瘤病毒的保藏号为CCTCC No.V201809。该溶瘤病毒具有抗肿瘤效应，可用于制备一种抗肿瘤效果卓越的抗肿瘤药物。

An oncolytic virus and its application

The invention discloses an oncolytic virus and its application, and relates to the field of biotechnology. The preservation number of the oncolytic virus is CCTCC No.V201809. The oncolytic virus has antineoplastic effect and can be used to prepare an antineoplastic drug with excellent antineoplastic effect.

【技术实现步骤摘要】
一种溶瘤病毒及其应用
本专利技术涉及生物
，具体而言，涉及一种溶瘤病毒及其应用。
技术介绍
溶瘤病毒(Oncolyticvirus)是优先感染并杀死肿瘤细胞的一类病毒。初期，部分肿瘤细胞被溶瘤病毒特异性感染和破坏。随后，溶瘤病毒在肿瘤细胞进行复制和繁殖，释放出新的感染性病毒颗粒感染和破坏其他肿瘤细胞。溶瘤病毒通过直接溶解肿瘤细胞或者刺激宿主产生抗肿瘤免疫反应来发挥溶瘤的功效。病毒具有抗肿瘤药物的潜力在20世纪初便被发现，但是，直到20世纪60年代才被正式的进行深入的研究和开发。目前已有多种病毒包括腺病毒，呼肠孤病毒、麻疹病毒、单纯疱疹病毒、新城疫病毒和牛痘病毒等在临床上作为溶瘤剂进行检测，且自然界中的仅少数病毒可以自然的发生溶瘤(如呼肠孤病毒、塞内卡病毒以及新城疫病毒等)。由国家管理机构批准的第一个溶瘤病毒是遗传修饰的ECHO-7肠道病毒RIGVIR，2004年在拉脱维亚批准用于治疗皮肤黑色素瘤。后来(分别在2015年和2016年)，格鲁吉亚(国家)和亚美尼亚也批准了这一规定。2005年，中国公司上海三维(Sunway)生物技术有限公司注册了一种名为H101的基因修饰溶瘤腺病毒，并获得了国家食品药品监督管理局的监管部门批准，用于治疗头颈部肿瘤。2015年，USFDA和欧盟EMA批准T-VEC作为第一个溶瘤疱疹病毒(一种改良的单纯疱疹病毒)，用于治疗黑色素瘤，也是目前最成功的一款溶瘤病毒。新城疫病毒属于禽副粘病毒科，是禽类的致命病毒，但对于人类支造成轻微的流感样症状或结膜炎。新城疫病毒可通过病毒复制使细胞毒性病毒蔓延到身体的每一个癌细胞，但是病毒中和抗体的免疫系统的生产可能会限制这种可能性。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种溶瘤病毒，其具有溶瘤能力，可用于制备抗肿瘤药物。本专利技术的第二目的在于提供一种载体，其能够装载溶瘤病毒，精准靶向肿瘤细胞，具有促进病毒特异性免疫反应以及增强抗肿瘤效果的优点。本专利技术的第三目的在于提供一种装载有溶瘤病毒的免疫效应细胞的制备方法，能够制备出具有溶瘤效果的免疫效应细胞。本专利技术的第四目的在于提供上述载体或上述溶瘤病毒在制备抗肿瘤药物中的应用，其能够制备出能够精确靶向肿瘤且抗肿瘤效果卓越的抗肿瘤药物。本专利技术的第五目的在于提供一种抗肿瘤药物，其具有抗肿瘤效果卓越的优点。本专利技术是这样实现的：本专利技术提供了一种溶瘤病毒，其保藏号为CCTCCNOV201809。本专利技术提供了一种载体，该载体装载有上述的溶瘤病毒。本专利技术提供了一种装载有溶瘤病毒的免疫效应细胞的制备方法。该制备方法包括将溶瘤病毒溶液与免疫效应细胞溶液接触，溶瘤病毒溶液中的溶瘤病毒为上述溶瘤病毒。本专利技术提供了上述溶瘤病毒或上述载体在制备抗肿瘤药物中的应用。本专利技术提供了一种抗肿瘤药物，其包括有上述的溶瘤病毒或上述的载体。本专利技术具有以下有益效果：本专利技术实施例提供的溶瘤病毒，其保藏号为CCTCCNo.V201809。该溶瘤病毒具有溶瘤能力，可用于制备抗肿瘤效果卓越的抗肿瘤药物。本专利技术实施例提供的包含上述溶瘤病毒的载体，该载体能够转载溶瘤病毒，精准靶向肿瘤细胞，具有促进病毒特异性免疫反应以及增强抗肿瘤效果的优点。本专利技术实施例提供的装载有溶瘤病毒的免疫效应细胞的制备方法，其包括将上述溶瘤病毒与免疫效应细胞容易接触，该方法能够制备出靶向性好，抗肿瘤效果卓越的免疫效应细胞。本专利技术实施例提供上述溶瘤病毒或上述载体在制备抗肿瘤药物中的应用。该应用能够制备出抗肿瘤效果卓越的抗肿瘤药物。本专利技术实施例提供的一种抗肿瘤药物，其包括有上述溶瘤病毒或上述载体，该药物具有能够精确靶向肿瘤且抗肿瘤效果卓越的的优点。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本专利技术第二实施例提供的装载溶瘤病毒的免疫效应细胞的共聚焦结果图；图2为本专利技术第三实施例提供的NDV/FMW感染肺癌细胞后的细胞存活图；图3为本专利技术第三实施例提供的NDV/FMW感染甲状腺癌细胞后的细胞存活图；图4为本专利技术第三实施例提供的NDV/FMW感染人胚肺成纤维细胞以及CIK细胞后的细胞存活图；图5为本专利技术第三实施例提供的装载NDV后CIK细胞中CD8+Tcell以及CD3+CD56+NKTcell的变化结果图；图6为本专利技术第四实施例提供的裸鼠皮下瘤体积变化结果图；图7为本专利技术第五实施例提供的CIK、NDV/FMW以及NDV/FMW+CIK的HE染色结果图；图8为本专利技术第六实施例提供的NDV在肿瘤细胞以及CIK细胞中的复制能力结果图；图9为本专利技术第一对比例提供的流式细胞仪检测CIK细胞装载NDV的效率结果图。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。下面对本专利技术实施例的溶瘤病毒及其应用进行具体说明。一方面，本专利技术实施例提供一种溶瘤病毒，具体为新城疫病毒NDV/FMW株，该病毒株已保藏于2018年2月6日中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉武汉大学，保藏号：CCTCCNOV201809。该溶瘤病毒具有溶瘤能力，能够用于制备抗肿瘤药物中。该溶瘤病毒的溶瘤能力可以通过向肿瘤细胞组织注射该溶瘤病毒溶液，肿瘤细胞变小，说明该溶瘤病毒对肿瘤组织具有溶瘤能力。溶瘤病毒是一类具有复制能力的肿瘤杀伤性病毒，可通过多种机制发挥抗肿瘤作用。然而，机体的免疫监视作用使溶瘤病毒不能高效到达肿瘤部位而不足以治疗肿瘤。因此，本专利技术实施例提供一种载体，其装载有上述溶瘤病毒。细胞载体作用溶瘤病毒的容器，可是溶瘤病毒逃避免疫监视，两者联合，具有更好的抗肿瘤功效。该载体包括有免疫效应细胞、间充质干细胞、内皮系细胞以及肿瘤细胞中的一种或多种。优选地，该免疫效应细胞可以包括有抗原特异性T细胞、细胞因子诱导的杀伤细胞、肿瘤相关的巨噬细胞、外周血淋巴细胞以及树突状细胞。优选地，该免疫效应细胞为CIK细胞。CIK细胞，英文名称为Cytokineinducedkiller，即细胞因子诱导的杀伤细胞，是一种新型的免疫活性细胞，增值能力强，细胞毒作用强，具有一定的免疫特性。CIK细胞对肿瘤细胞的识别能力很强，能够精确地靶向肿瘤细胞，但不会伤及正常细胞，杀瘤谱广，安全性好。装载有上述溶瘤病毒的CIK细胞，其结合了CIK细胞的肿瘤靶向性以及溶瘤病毒的肿瘤杀伤力，达到了更好的抗肿瘤效果。装载有溶瘤病毒的载体能够在靶向肿瘤能力的基础上，增强载体的溶瘤能力，提高载体的抗肿瘤效应。本专利技术实施例还提供一种装载有溶瘤病毒的免疫效应细胞的制备方法，该制备方法包括以下步骤：该制备方法包括将溶瘤病毒溶液与免疫效应细胞溶液接触，溶瘤病毒溶液中的溶瘤病毒为上述本专利技术实施例提供的溶瘤病毒NDV/FMW。进一步地，溶瘤病毒的感染复数为10～100MOI，免疫效应细胞溶液的细胞密度为1ⅹ106～5ⅹ106细胞/mL。溶瘤病毒的感染复数可以为：10、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种溶瘤病毒，其特征在于，所述溶瘤病毒的保藏号为CCTCC NO V201809。

【技术特征摘要】
1.一种溶瘤病毒，其特征在于，所述溶瘤病毒的保藏号为CCTCCNOV201809。2.根据权利要求1所述的溶瘤病毒，其特征在于，所述溶瘤病毒为新城疫病毒。3.一种载体，其特征在于，所述载体装载有权利要求1或2所述的溶瘤病毒。4.根据权利要求3所述的载体，其特征在于，所述载体为免疫效应细胞。5.根据权利要求4所述的载体，其特征在于，所述免疫效应细胞为CIK细胞。6.一种装载有溶瘤病毒的免疫效应细胞的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括将溶瘤病毒溶液与免疫效应细胞溶液接触，所述溶瘤病毒...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟松树，姜珂，
申请(专利权)人：大连医科大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21