一株对大白菜菌核病菌具有拮抗作用的菌株及其培养方法和应用技术

本发明专利技术公开了一株对大白菜菌核病菌具有拮抗作用的菌株，该菌株为克里布所类芽孢杆菌(Paenibacillus kribbensis)，单个菌体直径为0.5～0.7×2～3微米；无荚膜，周生鞭毛。革兰氏阳性，芽孢0.7～0.9×1.1～1.4微米，椭圆型。菌落表面粗糙不透明，白色或微黄色，在马铃薯葡萄糖液体培养基中摇菌培养72h后曾微黄色；于2018年4月26日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏号为CCTCC M 2018236。本发明专利技术的菌株制作简单且成本低，无毒、无害、及无环境污染，有利于安全有效的抑制大白菜菌核病菌菌丝生长，同时有利于大白菜的绿色栽培，保护农田生态系统。

【技术实现步骤摘要】
一株对大白菜菌核病菌具有拮抗作用的菌株及其培养方法和应用
本专利技术涉及菌株领域，具体涉及一株对大白菜菌核病菌具有拮抗作用的菌株及其培养方法和应用。
技术介绍
类芽孢杆菌属(Paenibacillus)细菌已被从各种环境中分离出来，许多物种与人类、动物、植物和环境有关。其中大部分类芽孢杆菌属细菌是在土壤中发现的，通常为植物根系促生菌，这些类芽孢杆菌属细菌具有促进植物生长的作用，可在农业生产上加以利用。有些类芽孢杆菌属细菌会产生抗菌化合物，这些化合物在医药或杀虫剂中都很有用，还有些类芽孢杆菌属细菌会用于生产有生物修复作用的酶或生产珍贵的化学品。多粘类芽孢杆菌可产生多肽抗生素、拮抗蛋白、酶、植物激素、絮凝剂等多种生物活性物质，兼有生物农药和生物菌肥的作用，已广泛应用于农业、工矿业及废水处理等领域。美国环境保护署(EPA)已将其列为可在商业上应用的微生物种类之一，我国农业部也将其列为免做安全鉴定的一级菌种。传统农业中化学农药的过量使用不仅会增加农药残留量，同时导致了许多作物病虫害的抗药性，并对土壤、水体及生态环境造成污染。随着社会的进步，人们生活水平的提高，对食品安全的意识不断加强，在这种情况下应用高效、广谱、安全、无毒的有益微生物进行植物疫病的防治越来越受到人们的重视。类芽孢杆菌属细菌产生的多肽类抗菌物质对植物病原真菌具有很好的拮抗活性，且性质比较稳定，可用于多种植物病害的生物防治。因此，类芽孢杆菌属细菌是一类极具开发前景和应用价值的生防细菌。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一株对大白菜菌核病菌具有拮抗作用的菌株及其培养方法和应用。为实现上述目的，专利技术人从大白菜上分离得到一株对大白菜菌核病菌具有拮抗作用的菌株，通过鉴定证明其为克里布所类芽孢杆菌(Paenibacilluskribbensis)，于2018年4月26日保藏于中国典型培养物保藏中心；地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内。本专利技术的菌株DG1为需氧菌，单个菌体直径为0.5～0.7×2～3微米；无荚膜，周生鞭毛。革兰氏阳性，芽孢0.7～0.9×1.1～1.4微米，椭圆型。菌落表面粗糙不透明，白色或微黄色，在马铃薯葡萄糖液体培养基中摇菌培养72h后曾微黄色。所述菌株的16SrDNA序列GenBank序列号为SEQMH351014。本专利技术还提供了上述一株对大白菜菌核病菌具有拮抗作用的菌株的培养方法，包括如下步骤：将该菌株接种于含有5mlPS(马铃薯蔗糖)培养基因的180mm╳18mm试管中，于28℃、180rpm摇床恒温培养2d,然后将发酵液于4℃、10000╳g条件下离心10min收集上清液，并采用0.22μm微孔滤膜过滤除菌，即可获得该菌株的发酵液。上述的一株对大白菜菌核病菌具有拮抗作用的菌株的应用，其特征在于，可用于植物病害的防治。所述菌株的发酵液可抑制大白菜菌核病菌菌丝生长。本专利技术的菌株制作简单且成本低，无毒、无害、及无环境污染，有利于安全有效的抑制大白菜菌核病菌菌丝生长，同时有利于大白菜的绿色栽培，保护农田生态系统。附图说明图1为菌株DG1基于16SrRNA基因序列比对结果以Thermobacillusxylanilyticus(AJ005795.1)为外枝构建的Neighbor-Joining系统发育树。具体实施方式为了使本专利技术的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。拮抗菌发酵液对大白菜菌核病菌菌丝生长的影响共设三个处理：处理1为对照(ck)马铃薯蔗糖(PS)液体培养基300ul；处理2为150ul发酵液+150ul马铃薯蔗糖(PS)液体培养基；处理3为300ul发酵液。每处理3次重复，分别涂布于PSA培养基上，然后再用5mml的打孔器在大白菜菌核病菌的菌落边缘打取菌饼，然后将其接种于已涂布好的PSA培养基平板中央，28℃培养72小时后，分别量取菌落直径，计算抑制率。抑制率的计算公式为：抑制率％＝(对照-处理)/对照*100；计算结果如表1所示。表1三组处理的抑制率计算结果处理菌落直径cm抑制率％对照(ck)3.1150ul发酵液/皿2.519.4300ul发酵液/皿1.7742.9拮抗菌对不同植物病原菌的抑菌带宽度比较采用平板对峙法测定拮抗菌对不同植物病原菌的抑菌带，分别将大白菜菌核病菌、番茄镰刀病菌、番茄黑斑病菌、花椰菜黑斑病菌分别接种于PSA培养基平板中央，将拮抗菌接点接于距病原菌2cm的四周，28℃培养72小时后，分别量抑菌带宽度，结果见表2。表2拮抗菌对不同植物病原菌的抑菌带宽度不同病原菌大白菜菌核病菌番茄镰刀病菌番茄黑斑病菌花椰菜黑斑病菌抑菌带宽度cm0.90.30.70.83以上所述仅是本专利技术的优选实施方式，应当指出，对于本
的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株对大白菜菌核病菌具有拮抗作用的菌株，其特征在于，经鉴定该菌株为克里布所类芽孢杆菌(Paenibacillus kribbensis)，于2018年4月26日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏号为CCTCC M 2018236。

【技术特征摘要】
1.一株对大白菜菌核病菌具有拮抗作用的菌株，其特征在于，经鉴定该菌株为克里布所类芽孢杆菌(Paenibacilluskribbensis)，于2018年4月26日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏号为CCTCCM2018236。2.如权利要求1所述的一株对大白菜菌核病菌具有拮抗作用的菌株，其特征在于，所述菌株的16SrDNA序列GenBank序列号为SEQMH351014。3.一株对大白菜菌核病菌具有拮抗作用的菌株的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：将该菌株...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷娟利，钟新民，李必元，岳智臣，陶鹏，赵彦婷，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：浙江,33