溴硝醇有关物质的测定方法技术

本发明专利技术涉及一种溴硝醇有关物质的测定方法，取样品约10mg，置离心管中，加流动相100ml，漩涡震荡2分钟，滤过，取10μl注入高效液相色谱仪，按照以下的色谱条件试验测定含量，记录色谱图至主峰保留时间的2倍；色谱条件：色谱柱是RP‑ODS柱，柱温是30℃，检测波长为210nm，流速1.0ml/min，流动相为磷酸水：甲醇＝95:5。其优点表现在：本发明专利技术提供了一种快速、精准检测溴硝醇的HPLC分析方法，提供了一种研究复方皮乐宝粉的稳定性的方法，溴硝醇与其它分解产物分离良好，专属性强。将本发明专利技术的方法用于研究复方皮乐宝粉的稳定性，可确定其药性，便于后期的生产实践。

Method for determination of related substances in lithium nitrate

The present invention relates to a method for the determination of related substances of bromo-nitroalcohol. The sample is about 10mg, placed in a centrifugal tube, added a mobile phase of 100ml, swirled for 2 minutes, filtered, and injected into a high performance liquid chromatograph (HPLC). The content is determined according to the following chromatographic conditions, and the chromatographic conditions are recorded as follows: The column is RP_ODS column, the column temperature is 30 C, the detection wavelength is 210 nm, the flow rate is 1.0 ml/min, the mobile phase is phosphoric acid water: methanol = 95:5. The invention has the advantages of providing a rapid and accurate HPLC analysis method for detecting bromo-nitroalcohol and a method for studying the stability of compound Pilebao powder. Bromo-nitroalcohol is well separated from other decomposition products and has strong specificity. The method of the invention is used to study the stability of the compound Pilebao powder, determine its medicinal property, and is convenient for later production practice.

【技术实现步骤摘要】
溴硝醇有关物质的测定方法
本专利技术涉及药物
，具体地说，是溴硝醇有关物质的测定方法。
技术介绍
溴硝醇化学名为2-溴-2-硝基-1,3-丙二醇，又名溴硝丙二醇、布罗波尔、拌棉醇、抑菌醇和皮乐宝等，英文名为2-bromo-2-nitro-1,3-propanediol，国外商品名为Bronopol。它是一种白色或淡黄色结晶性粉末，熔点120～122℃，易溶于水、乙醇和丙二醇等极性溶剂，难溶于氯仿、丙酮和苯等非极性溶剂。在pH＝8和高温时易分解，在光照下会发黄，对铝材有腐蚀作用。溴硝醇是一种溴代硝基醇类广谱杀菌剂，具有很高的杀菌活性和很低的使用浓度以及较宽的pH使用范围，对人体皮肤无刺激、无过敏反应，是美国FDA批准使用的化妆品防腐剂之一。与其它防腐剂相比，溴硝醇具有高效、用量少、价格低廉、配伍性能好、适宜的pH范围、水溶性好等优点。“复方皮乐宝粉”(美婷II)【主要成分】皮乐宝(溴硝醇)、硫酸亚铁【药理作用】“复方皮乐宝粉”(美婷Ⅱ)的作用机理是活性成分直接作用于细胞膜表面的硫醇基，使之成为二硫化合物，在细胞壁产生特大突起，导致细胞壁破裂、内容物外流、菌丝体死亡、孢子失活，同时本品还具有收敛作用，促进水生动物伤口愈合。【适应症】主要用于防治水霉菌等真菌引起的水产动物疾病(如鱼卵发霉，鱼苗、成鱼水霉病等)。中国专利文献CN104926661A、CN102850226A等公开了溴硝醇的制备工艺。中国专利文献CN102293831A公开了一种防治水产动物水霉病的复方粉剂，由五倍子、大黄、溴硝醇、分散剂一定重量百分比的原料制成。中国专利文献CN101708187A公开了一种用于防治水产动物水霉病的干粉制剂：71-79％生化黄腐酸、10-15％偏重亚硫酸钠、10-15％溴硝醇。中国专利文献CN102920715A公开了一种淡水养殖鱼类真菌病药物配方：磺基水杨酸20-35％，溴硝醇8-20％，硝酸咪康唑2-5％，硅藻土55-70％。但是关于本专利技术的溴硝醇有关物质的测定方法目前还未见报道。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是，针对现有技术中的不足，提供一种溴硝醇有关物质的测定方法。本专利技术的第二个目的是，提供一种复方皮乐宝粉的稳定性测定方法。为实现上述第一个目的，本专利技术采取的技术方案是：一种溴硝醇的HPLC分析方法，所述的分析方法包括以下步骤：取溴硝醇10mg，置离心管中，加流动相100ml，漩涡震荡2分钟，滤过，取10μl注入高效液相色谱仪，按照以下的色谱条件试验测定含量，记录色谱图至主峰保留时间的2倍；色谱条件：色谱柱是RP-ODS柱，RP-ODS柱的规格为150mm×4.6mm、5μm，柱温是30℃，检测波长为210nm，流速1.0ml/min，流动相为磷酸水：甲醇＝95:5(V:V)，磷酸水为磷酸：水＝1:1000。一种复方皮乐宝粉的HPLC分析方法，所述的分析方法包括以下步骤：取复方皮乐宝粉10mg，置离心管中，加流动相100ml，漩涡震荡2分钟，滤过，取10μl注入高效液相色谱仪，按照以下的色谱条件试验测定含量，记录色谱图至主峰保留时间的2倍；色谱条件：色谱柱是RP-ODS柱，RP-ODS柱的规格为150mm×4.6mm、5μm，柱温是30℃，检测波长为210nm，流速1.0ml/min，流动相为磷酸水：甲醇＝95:5(V:V)，磷酸水为磷酸：水＝1:1000。所述的复方皮乐宝粉的主要成分为溴硝醇和硫酸亚铁。为实现上述第二个目的，本专利技术采取的技术方案是：一种溴硝醇稳定性分析方法，所述的分析方法包括氧化破坏试验、加热破坏试验、碱破坏试验、酸破坏试验。氧化破坏试验方法为：取溴硝醇10mg，加30％过氧化氢5mL，放置1h，取出，加流动相稀释制成每1mL中含5mg的溶液，上HPLC。加热破坏试验方法为：取溴硝醇适量，加流动相溶解并稀释成每1mL中含有5mg的溶液，置100℃水浴中，加热40min，取出，放至室温，上HPLC。碱破坏试验方法为：取溴硝醇10mg，加1mol/L氢氧化钠5mL，置热水浴中，加热1h取出，放冷，用1mol/L盐酸溶液中和，加流动相稀释制成每1mL中含5mg的溶液，上HPLC。酸破坏试验方法为：取溴硝醇10mg，加1mol/L盐酸溶液5mL，置热水浴中，加热1h取出，放冷，用1mol/L氢氧化钠调节pH值，加流动相稀释制成每1mL中含5mg的溶液，上HPLC。HPLC条件为：色谱柱是RP-ODS柱，RP-ODS柱的规格为150mm×4.6mm、5μm，柱温是30℃，检测波长为210nm，流速1.0ml/min，流动相为磷酸水：甲醇＝95:5(V:V)，磷酸水为磷酸：水＝1:1000。本专利技术优点在于：1、本专利技术提供了一种快速、精准检测溴硝醇的HPLC分析方法。2、本专利技术在前述溴硝醇的HPLC分析方法的基础上提供了一种研究“复方皮乐宝粉”(美婷II)的稳定性的方法，溴硝醇与其它分解产物分离良好，专属性强。3、将本专利技术的方法用于研究“复方皮乐宝粉”(美婷II)的稳定性，可确定其药性，便于后期的生产实践。附图说明附图1是未破坏的系统适应性溶液色谱图。附图2是氧化破坏溴硝醇色谱图。附图3是高温破坏溴硝醇色谱图。附图4是碱破坏溴硝醇色谱图。附图5是酸破坏溴硝醇色谱图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术提供的具体实施方式作详细说明。因为“复方皮乐宝粉”(美婷II)处方中的主要有效成分是溴硝醇，我们建立了利用高效液相色谱法测定溴硝醇的方法并研究其在不同条件下的稳定性。色谱条件：色谱柱是RP-ODS柱(150mm×4.6mm，5μm)，柱温是30℃，检测波长为210nm，流速1.0ml/min，流动相为磷酸水(磷酸：水＝1:1000)：甲醇＝95:5(V:V)。取本品约10mg，置离心管中，加流动相100ml，漩涡震荡2分钟，滤过，取10μl注入高效液相色谱仪，按照以下的色谱条件试验测定含量，记录色谱图至主峰保留时间的2倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，按峰面积归一法计算，单一杂质不得超过4.0％，杂质峰面积的总和不得过6.0％。对照品：溴硝醇对照品：购自北京世纪奥科生物技术有限公司，德国Dr.Ehrenstorfer，CAS编号52-51-7(WaterContent0.1％,Det.Purity98.5％,Tolerance/Uncertainty+/-0.5％,DeterminedbyKarl-FischerTitration)。供试品：“复方皮乐宝粉”(美婷II)，长沙拜特生物科技研究所有限公司提供。溶液制备供试品溶液取本品适量，加流动相稀释至每1mL中约含溴硝醇0.1mg的溶液，作供试品溶液。对照品溶液精密称取溴硝醇对照品适量，加流动相溶解并稀释为每1mL中约含0.1mg溴硝醇的溶液，作为对照品溶液。实施例1未破坏取溴硝醇10mg，置离心管中，加流动相100ml，漩涡震荡2分钟，滤过，取10μl注入高效液相色谱仪，按照以下的色谱条件试验测定含量，记录色谱图至主峰保留时间的2倍。色谱条件：色谱柱是RP-ODS柱(150mm×4.6mm，5μm)，柱温是30℃，检测波长为210nm，流速1.0ml/min，流动相为磷酸水(磷酸：水＝1:1000)：甲醇＝95:5(V:V)。未破坏的系统适本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种溴硝醇的HPLC分析方法，其特征在于，所述的分析方法包括以下步骤：取溴硝醇10mg，置离心管中，加流动相100ml，漩涡震荡2分钟，滤过，取10μl注入高效液相色谱仪，按照以下的色谱条件试验测定含量，记录色谱图至主峰保留时间的2倍；色谱条件：色谱柱是RP‑ODS柱，RP‑ODS柱的规格为150mm×4.6mm、5μm，柱温是30℃，检测波长为210nm，流速1.0ml/min，流动相为磷酸水：甲醇＝95:5(V:V)，磷酸水为磷酸：水＝1:1000。

【技术特征摘要】
1.一种溴硝醇的HPLC分析方法，其特征在于，所述的分析方法包括以下步骤：取溴硝醇10mg，置离心管中，加流动相100ml，漩涡震荡2分钟，滤过，取10μl注入高效液相色谱仪，按照以下的色谱条件试验测定含量，记录色谱图至主峰保留时间的2倍；色谱条件：色谱柱是RP-ODS柱，RP-ODS柱的规格为150mm×4.6mm、5μm，柱温是30℃，检测波长为210nm，流速1.0ml/min，流动相为磷酸水：甲醇＝95:5(V:V)，磷酸水为磷酸：水＝1:1000。2.一种复方皮乐宝粉的HPLC分析方法，其特征在于，所述的分析方法包括以下步骤：取复方皮乐宝粉10mg，置离心管中，加流动相100ml，漩涡震荡2分钟，滤过，取10μl注入高效液相色谱仪，按照以下的色谱条件试验测定含量，记录色谱图至主峰保留时间的2倍；色谱条件：色谱柱是RP-ODS柱，RP-ODS柱的规格为150mm×4.6mm、5μm，柱温是30℃，检测波长为210nm，流速1.0ml/min，流动相为磷酸水：甲醇＝95:5(V:V)，磷酸水为磷酸：水＝1:1000。3.根据权利要求2所述的分析方法，其特征在于，所述的复方皮乐宝粉的主要成分为溴硝醇和硫酸亚铁。4.一种溴硝醇稳定性分析方法，其特征在于，所述的分析方法包括氧化破坏试验、加热破坏试验、碱破坏...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡鲲，孙晶，周桂娴，姜莺颖，刘力硕，苏惠冰，杨先乐，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：发明
国别省市：上海,31