本发明专利技术的目的在于提供能够高精度地鉴定金黄色葡萄球菌的检测手段。本发明专利技术的一个方式涉及一种用于检测金黄色葡萄球菌的培养基，其包含1种以上的营养成分、在α‑葡萄糖苷酶的存在下显色的显色剂、在磷酸酶的存在下显色的显色剂、以及0.5mg/cm3以上的粘菌素甲磺酸钠。本发明专利技术的另一方式还涉及具有所述培养基的金黄色葡萄球菌检测片、以及使用它们的金黄色葡萄球菌的检测方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测金黄色葡萄球菌的培养基和具有该培养基的金黄色葡萄球菌检测片、以及使用它们的金黄色葡萄球菌的检测方法
本专利技术涉及用于检测金黄色葡萄球菌的培养基和具有该培养基的金黄色葡萄球菌检测片、以及使用它们的金黄色葡萄球菌的检测方法。
技术介绍
金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)是产生各种毒素的细菌。金黄色葡萄球菌也是引起败血症、心内膜炎以及肺或骨关节病之类的严重的细菌感染症的病原菌。因此，在对食品或饮料品进行处理的设施(例如工厂或餐厅等)以及医疗设施等中，需要简便且高精度地检测金黄色葡萄球菌的手段。例如，专利文献1记载了一种用于对包含1种以上细菌的样品内的葡萄球菌进行鉴定和测定的方法，其特征在于，包括下述步骤：i)将部分量的样品接种在选择培养基中的步骤，该步骤的特征在于，上述培养基包含用于促进葡萄球菌的增殖的抑制剂、在β-葡萄糖苷酶的存在下能够形成可观察的第1颜色的第1底物、以及在葡萄球菌的存在下能够形成第2颜色的第2底物；ii)对上述接种后的培养基进行温育，形成在该培养基中的上述第1底物和第2底物的存在下能够观察到细菌菌落的充分大小的上述细菌菌落的步骤；以及iii)对通过上述第2底物的上述第2颜色的存在而鉴定出的上述菌落进行测定从而得出上述样品内的葡萄球菌数的步骤。该文献中记载了上述抑制剂可从由粘菌素甲磺酸盐、萘啶酸和氯化锂组成的组中选择。另外，该文献记载了上述第1底物为在β-葡萄糖苷酶的存在下发生视觉上的颜色变化的吲哚基吡喃葡萄糖苷底物，上述第2底物在葡萄球菌的存在下发生视觉上的颜色变化。专利文献2记载了一种用于检测金黄色葡萄球菌和/或凝固酶阳性葡萄球菌(Staphylococci)的培养基，其包含金黄色葡萄球菌培养基和用于α-葡萄糖苷酶活性表达的至少1种酶底物。该文献中，作为用于α-葡萄糖苷酶活性表达的至少1种酶底物，记载了吲哚氧基系化合物。专利文献1和专利文献2中所公开的培养基通常以使用琼脂之类的凝胶化剂在灭菌培养皿中形成的平板固体培养基的形态来使用。在这种实施方式的情况下，有时在平板固体培养基的制备、试样的分注和微生物的培养等操作中需要高技术。专利文献3记载了一种微生物培养片，其是具有基材片、在上述基材片上形成的培养层、以及覆盖上述培养层的盖板的微生物培养片，上述培养层是使培养液进行图案形成而得到的，该培养液包含聚乙烯吡咯烷酮以及选自由凝胶化剂、营养成分、显色指示剂、选择剂和底物组成的组中的至少一种。该文献中记载了使用者可利用上述微生物培养片简便且稳定地对食品或饮料品等实施细菌菌数检查等。现有技术文献专利文献专利文献1：日本特表平9-508279号公报专利文献2：日本特表2004-524041号公报专利文献3：国际公开第2011/007802号
技术实现思路
专利技术所要解决的课题迄今为止，已知有几种用于检测金黄色葡萄球菌的手段。但是，这些公知的手段存在改良的余地。例如，在将专利文献1或2所记载的培养基应用于特定的实施方式的情况下，有时金黄色葡萄球菌以外的葡萄球菌会成为假阳性。因此，本专利技术的目的在于提供能够高精度地鉴定出金黄色葡萄球菌的检测手段。用于解决课题的手段本专利技术人对用于解决上述课题的手段进行了各种研究。本专利技术人发现，通过在培养基中添加对于在金黄色葡萄球菌中表达的两种酶具有特异性的显色底物和高浓度的选择剂，能够以在该培养基上形成的菌落的颜色为指标高精度地检测出金黄色葡萄球菌。本专利技术人基于上述见解完成了本专利技术。即，本专利技术的要点如下。(1)一种用于检测金黄色葡萄球菌的培养基，其包含1种以上的营养成分、在α-葡萄糖苷酶的存在下显色的显色剂、在磷酸酶的存在下显色的显色剂、以及0.5mg/cm3以上的粘菌素甲磺酸钠。(2)如上述(1)所述的培养基，其中，在α-葡萄糖苷酶的存在下显色的显色剂为6-氯-3-吲哚氧基-α-D-葡萄糖苷，在磷酸酶的存在下显色的显色剂为5-溴-3-吲哚氧基磷酸酯。(3)如上述(1)所述的培养基，其中，在α-葡萄糖苷酶的存在下显色的显色剂为5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-α-D-葡萄糖苷，在磷酸酶的存在下显色的显色剂为5-溴-6-氯-3-吲哚氧基磷酸酯。(4)如上述(1)～(3)中任一项所述的培养基，其中，包含0.5～4.1mg/cm3的范围的粘菌素甲磺酸钠。(5)如上述(4)所述的培养基，其中，包含0.5～2.8mg/cm3的范围的粘菌素甲磺酸钠。(6)如上述(5)所述的培养基，其中，包含2.3～2.8mg/cm3的范围的粘菌素甲磺酸钠。(7)一种微生物培养基材，其为具有基材以及配置在上述基材的上表面的培养层的、用于检测金黄色葡萄球菌的微生物培养基材，上述培养层包含上述(1)～(6)中任一项所述的培养基。(8)如上述(7)所述的微生物培养基材，其中，进一步具有片形状的基材以及覆盖上述培养层的盖板，上述培养层进一步包含聚乙烯吡咯烷酮以及1种以上的凝胶化剂。(9)一种对金黄色葡萄球菌进行检测的方法，其包括下述步骤：试样添加步骤，向上述(1)～(6)中任一项所述的培养基或者上述(7)或(8)所述的微生物培养基材的培养层中添加包含微生物的试样；菌落形成步骤，对添加有试样的培养基或微生物培养基材进行温育，形成微生物的菌落；以及菌株鉴定步骤，基于所形成的微生物菌落的颜色对金黄色葡萄球菌进行鉴定。(10)如上述(9)所述的方法，其中，在试样添加步骤中，向上述(7)或(8)所述的微生物培养基材的培养层中添加包含微生物的试样，该微生物培养基材的培养层包含相对于包含微生物的试样的总体积为0.2mg/ml以上的粘菌素甲磺酸钠。专利技术的效果利用本专利技术能够提供可高精度地鉴定金黄色葡萄球菌的检测手段。附图说明图1是示出本专利技术的一个方式的用于检测金黄色葡萄球菌的微生物培养基材的一个实施方式的图。图1(a)是本专利技术的一个方式的微生物培养基材的俯视图，图1(b)是沿图1(a)中的I-I’的垂直截面示意图，图1(c)是示出将盖板弯折来覆盖培养层的状态的垂直截面示意图。图2是示出本专利技术的一个方式的用于检测金黄色葡萄球菌的微生物培养基材的另一实施方式的图。图2(a)是本专利技术的一个方式的微生物培养基材的俯视图，图2(b)是沿着图2(a)中的II-II’的垂直截面示意图，图2(c)是示出将盖板弯折来覆盖培养层的状态的垂直截面示意图。图3是示出本专利技术的一个方式的用于检测金黄色葡萄球菌的微生物培养基材的另一实施方式的垂直截面示意图。图4是示出本专利技术的一个方式的用于检测金黄色葡萄球菌的微生物培养基材的另一实施方式的垂直截面示意图。图5是示出本专利技术的一个方式的用于检测金黄色葡萄球菌的微生物培养基材的一个实施方式的外观立体图。图6是示出本专利技术的一个方式的用于检测金黄色葡萄球菌的微生物培养基材的另一实施方式的外观立体图。图7是示出实验5中显色后的各菌株菌落的形成状态和颜色的照片。图7(a)：金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)ATCC25923菌株、图7(b)：金黄色葡萄球菌NBRC100910菌株、图7(c)：金黄色葡萄球菌NBRC12732菌株、图7(d)：中间型葡萄球菌(Staphylococcusintermedius)、图7(e)：猪葡萄球菌(Staphylococcushy本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于检测金黄色葡萄球菌的培养基，其包含1种以上的营养成分、在α‑葡萄糖苷酶的存在下显色的显色剂、在磷酸酶的存在下显色的显色剂、以及0.5mg/cm3以上的粘菌素甲磺酸钠。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.01.29 JP 2016-016378;2016.06.07 JP 2016-113271.一种用于检测金黄色葡萄球菌的培养基，其包含1种以上的营养成分、在α-葡萄糖苷酶的存在下显色的显色剂、在磷酸酶的存在下显色的显色剂、以及0.5mg/cm3以上的粘菌素甲磺酸钠。2.如权利要求1所述的培养基，其中，在α-葡萄糖苷酶的存在下显色的显色剂为6-氯-3-吲哚氧基-α-D-葡萄糖苷，在磷酸酶的存在下显色的显色剂为5-溴-3-吲哚氧基磷酸酯。3.如权利要求1所述的培养基，其中，在α-葡萄糖苷酶的存在下显色的显色剂为5-溴-4-氯-3-吲哚氧基-α-D-葡萄糖苷，在磷酸酶的存在下显色的显色剂为5-溴-6-氯-3-吲哚氧基磷酸酯。4.如权利要求1～3中任一项所述的培养基，其中，包含0.5mg/cm3～4.1mg/cm3的范围的粘菌素甲磺酸钠。5.如权利要求4所述的培养基，其中，包含0.5mg/cm3～2.8mg/cm3的范围的粘菌素甲磺酸钠。6....
【专利技术属性】
技术研发人员：风间圭佑，斋藤累，
申请(专利权)人：大日本印刷株式会社，
类型：发明
国别省市：日本,JP
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。