The invention discloses a method for separating and preparing petunin_3_O_arabinoside, including ethanol extraction and concentration, macroporous resin adsorption, preparation and high-speed countercurrent chromatography purification, and preparation of petunin_3_O_arabinoside monomer from blueberry raw materials with complex anthocyanin composition. The invention first combines the preparation of liquid chromatography and high-speed countercurrent chromatography technology, and by optimizing the process parameters, separates and obtains high-purity petunin_3_O_arabinoside monomer from blueberry, the purity of which is as high as 99%.
【技术实现步骤摘要】
一种分离制备矮牵牛素-3-O-阿拉伯糖苷的方法
本专利技术涉及天然产物的分离纯化领域,具体涉及一种分离制备矮牵牛素-3-O-阿拉伯糖苷的方法。
技术介绍
花色苷是广泛存在于植物中的一种水溶性色素,是由花青素与一个或多个糖基,如葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖等,通过糖苷键结合形成的多酚类化合物。自然界中常见的花青素主要有6种,分别是天竺葵素(Pelargonidin)、矢车菊素(Cyaniain)、飞燕草素(Delphinidin),芍药素(Peonidin),矮牵牛素(Petunidin)和锦葵色素(Malvidin)。近年来,大量的研究证实天然来源的花色苷具有抗氧化、抗肿瘤、预防心血管疾病、缓解糖尿病及控制肥胖等生物活性。随着人们生活水平的不断提高,人们对天然来源且无毒副作用的功能组分的呼声也越来越高,花色苷作为天然来源最具代表性的功能因子,因其良好的着色功能及优良的生物活性受到广大研究者及食品医药企业的青睐。但由于花色苷类化合物结构相似,极性差异较小,导致高纯度花色苷单体的分离纯化极其困难。但目前,已经有报道分离纯化得到高纯度花色苷单体。如公开号为CN106366141A的中国专利文献公开了一种分离制备天竺葵素-3-O-葡萄糖苷单体的方法,以草莓为原料,通过冷冻干燥、醇提浓缩、分级萃取、AB-8大孔树脂纯化制备得到。又如公开号为CN106831911A的中国专利文献公开了一种从蓬蘽中分离纯化天竺葵素-3-O-葡萄糖苷单体的方法,包括醇提浓缩、乙酸乙酯萃取、AB-8大孔树脂及高速逆流色谱。上述技术方案中虽然均制备得到了高纯度的花色苷单体,但主要原因在于草莓和蓬 ...
【技术保护点】
1.一种分离制备矮牵牛素‑3‑O‑阿拉伯糖苷的方法,其特征在于,包括:(1)醇提浓缩:以蓝莓为原料,经醇提浓缩得到蓝莓花色苷粗提液;(2)大孔树脂吸附:将所述蓝莓花色苷粗提液注入大孔树脂,经洗脱及后处理得到蓝莓花色苷提取物冻干粉;(3)制备液相色谱纯化:采用C18色谱柱,经流动相进行梯度洗脱,再经后处理得到矮牵牛素‑3‑O‑阿拉伯糖苷粗品冻干粉;所述流动相:A相为纯甲醇或酸的体积百分浓度为0.1~1.5%的酸‑甲醇体系,B相为甲酸体积百分浓度为1.5~5%的甲酸‑水体系;所述梯度洗脱的程序为:A相的体积百分浓度在0~5min内保持5%不变,在5~30min内从5%上升至60%,收集20~21min的洗脱物;(4)高速逆流色谱分离:以正丁醇‑甲基叔丁基醚‑甲醇‑水‑三氟乙酸为两相溶剂体系,经分离得到矮牵牛素‑3‑O‑阿拉伯糖苷单体;所述正丁醇、甲基叔丁基醚、甲醇、水和三氟乙酸的体积比为2:2:1:5:0.01~0.1。
【技术特征摘要】
1.一种分离制备矮牵牛素-3-O-阿拉伯糖苷的方法,其特征在于,包括:(1)醇提浓缩:以蓝莓为原料,经醇提浓缩得到蓝莓花色苷粗提液;(2)大孔树脂吸附:将所述蓝莓花色苷粗提液注入大孔树脂,经洗脱及后处理得到蓝莓花色苷提取物冻干粉;(3)制备液相色谱纯化:采用C18色谱柱,经流动相进行梯度洗脱,再经后处理得到矮牵牛素-3-O-阿拉伯糖苷粗品冻干粉;所述流动相:A相为纯甲醇或酸的体积百分浓度为0.1~1.5%的酸-甲醇体系,B相为甲酸体积百分浓度为1.5~5%的甲酸-水体系;所述梯度洗脱的程序为:A相的体积百分浓度在0~5min内保持5%不变,在5~30min内从5%上升至60%,收集20~21min的洗脱物;(4)高速逆流色谱分离:以正丁醇-甲基叔丁基醚-甲醇-水-三氟乙酸为两相溶剂体系,经分离得到矮牵牛素-3-O-阿拉伯糖苷单体;所述正丁醇、甲基叔丁基醚、甲醇、水和三氟乙酸的体积比为2:2:1:5:0.01~0.1。2.根据权利要求1所述的分离制备矮牵牛素-3-O-阿拉伯糖苷的方法,其特征在于,步骤(1)中,所述醇提浓缩,具体为:将洗净的蓝莓与酸性乙醇溶液混合,超声提取完全后过滤并收集滤液,滤液在40~50℃下真空旋转蒸发除去乙醇并浓缩,得到蓝莓花色苷粗提液;所述酸性乙醇溶液为酸的体积百分浓度为0.1~1.5%的乙醇溶液;所述蓝莓与酸性乙醇溶液的质量体积比为1:5~12g/mL。3.根据权利要求2所述的分离制备矮牵牛素-3-O-阿拉伯糖苷的方法,其特征在于,所述酸选自盐酸、甲酸、乙酸、草酸中的至少一种;所述乙醇溶液的体积百分浓度为50~95%。4.根据权利要求1所述的分离制备矮牵牛素-3-O-阿拉伯糖苷的方法,其特征在于,步骤(2)中,所述大孔树脂吸附,具体为:将所述蓝莓花色苷提取液注入大孔树脂中,先用去离子水冲洗大孔树脂,再用体积百分浓度为2~22%的酸性醇溶液进行梯度洗脱,收集体积百分浓度为14~18%的酸性醇溶液的洗脱液,40~50℃下真空旋转蒸发除醇后,真空冷冻干燥得到蓝莓花色苷提取物冻干粉;所述大孔树脂的牌号选自AB-8、HPD-100、D101或DM-130;所述酸性醇溶液选自酸的体积百分浓度为0.1~1.5%的醇溶液...
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