The invention provides a distant hybridization method between heading cabbage and Brassica napus, which belongs to the field of biotechnology breeding. The method comprises the following steps: 1) selecting the heading cabbage cytoplasmic male sterile line as the female parent, taking the restorer line as the male parent, and isolating the restorer line after artificial pollination; Ovary disinfection; 3) exfoliate ovules from sterilized ovaries and induce them to germinate; 4) differentiate the germinated ovules into F1 seedlings; 5) isolate lateral buds of F1 seedlings and inoculate them on rooting medium to obtain complete hybrid seedlings. The invention overcomes the problem that immature embryo abortion is easy to occur in distant hybridization between heading cabbage and Brassica napus cultivars and hybrid plants can not be obtained by using embryo rescue technology, and transfers the excellent restoring gene into the heading cabbage cytoplasmic male sterility cultivars to restore the fertility of the cabbage, which is an innovation of the germplasm resources of the cabbage. Application provides technical basis.
【技术实现步骤摘要】
一种结球甘蓝与甘蓝型油菜的远缘杂交方法
本专利技术属于生物技术育种领域,具体涉及一种结球甘蓝与甘蓝型油菜的远缘杂交方法。
技术介绍
结球甘蓝(BrassicaoleraceaL.var.capitataL.,2n=18)简称甘蓝,属十字花科芸薹属甘蓝种,是我国重要的蔬菜作物,在全国各地均有栽培,年栽培面积达到9×105hm2左右。甘蓝的杂种优势比较明显。Ogura细胞质雄性不育系的材料表现为母体遗传、花粉败育和雌蕊正常,容易被恢复系材料的显性核恢复基因恢复育性,但无法进行正常的自交分离和进一步种质资源的创新。结球甘蓝和甘蓝型油菜都是十字花科中的重要栽培作物,该油菜材料又为恢复系材料,结球甘蓝和甘蓝型油菜远缘杂交,大大促进两种作物间的优异基因交流,将油菜的恢复系基因转到结球甘蓝雄性不育系材料上,恢复甘蓝的育性,为甘蓝的遗传育种与种质资源的创新奠定了基础。但两者由于受精后杂种胚、胚乳和子房之间缺乏协调性,导致幼胚不发育或中途停止发育,是远缘杂交育种工作的瓶颈。在十字花科蔬菜育种过程中胚挽救技术虽有一些报道。例如:Diederichsen.采用远缘杂交结合胚挽救技术获得了西兰花与大白菜杂交的F1代,连续回交之后将A基因组CR基因转移到C基因组中。Snowdon等将抗黑胫病基因从白芥转移到了甘蓝型油菜;胡大为等以黑芥为母本、诸葛菜为父本的正交组合获得了1株真杂种;李俊等以白菜和芥蓝进行正反杂交,研究结果显示,白菜×芥蓝的平均杂种获得率(2.32%);但到目前为止,国内外几乎没有利用幼胚挽救离体培养技术实现亲缘关系相对较远的十字花科结球甘蓝与甘蓝型油菜种间杂交并获得 ...
【技术保护点】
1.一种结球甘蓝与甘蓝型油菜的远缘杂交方法,包括以下步骤:1)选择结球甘蓝胞质雄性不育系栽培种为母本,以甘蓝型油菜恢复系栽培种为父本,人工授粉后进行隔离;2)剪取步骤1)所述人工授粉后15~18d的子房,消毒后得消毒子房;3)剥离步骤2)所述消毒子房的胚珠接种于诱导培养基上诱导培养8~12d,得萌发的胚珠;所述诱导培养基以MS为基本培养基,还包括0.1~0.5mg/L的GA、0.1~0.5mg/L的NAA、25~35g/L的蔗糖、6~10g/L的琼脂、0.2~1%的活性炭和最终质量浓度为0.3~1.2%的水解酪蛋白,pH值为5.5~6.5;4)将步骤3)所述萌发的胚珠接种于分化培养基上分化培养7~14d,得F1代幼苗;所述分化培养基以MS为基本培养基,还包括0.2~0.8mg/L的6‑BA、20~35g/L的蔗糖和6~10g/L的琼脂,pH值为5.8;5)分离步骤4)所述F1代幼苗的侧芽,接种于生根培养基上生根培养6~14d,得完整杂交苗;所述生根培养基以MS为基本培养基,还包括0.05~0.15mg/L的NAA、20~35g/L的蔗糖和6~8g/L的琼脂,pH值为5.8。
【技术特征摘要】
1.一种结球甘蓝与甘蓝型油菜的远缘杂交方法,包括以下步骤:1)选择结球甘蓝胞质雄性不育系栽培种为母本,以甘蓝型油菜恢复系栽培种为父本,人工授粉后进行隔离;2)剪取步骤1)所述人工授粉后15~18d的子房,消毒后得消毒子房;3)剥离步骤2)所述消毒子房的胚珠接种于诱导培养基上诱导培养8~12d,得萌发的胚珠;所述诱导培养基以MS为基本培养基,还包括0.1~0.5mg/L的GA、0.1~0.5mg/L的NAA、25~35g/L的蔗糖、6~10g/L的琼脂、0.2~1%的活性炭和最终质量浓度为0.3~1.2%的水解酪蛋白,pH值为5.5~6.5;4)将步骤3)所述萌发的胚珠接种于分化培养基上分化培养7~14d,得F1代幼苗;所述分化培养基以MS为基本培养基,还包括0.2~0.8mg/L的6-BA、20~35g/L的蔗糖和6~10g/L的琼脂,pH值为5.8;5)分离步骤4)所述F1代幼苗的侧芽,接种于生根培养基上生根培养6~14d,得完整杂交苗;所述生根培养基以MS为基本培养基,还包括0.05~0.15mg/L的NAA、20~35g/L的蔗糖和6~8g/L的琼脂,pH值为5.8。2.根据权利要求1所述的远缘杂交方法,其特征在于,步骤1)所述母本为秦甘58,父本为RFO-46。3.根据权利要求1...
【专利技术属性】
技术研发人员:许忠民,王杏利,张恩慧,姜娇,李升娟,郭佳,马青山,石汶汶,吴晓凤,董艺,
申请(专利权)人:西北农林科技大学,
类型:发明
国别省市:陕西,61
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