The invention discloses a primer composition for rapid detection of pomegranate dry rot pathogen LAMP and its application. The primer composition of the invention is composed of the following primers: F3, B3, BIP and FIP. The primer composition is used for rapid detection of the LAMP of pomegranate dry rot fungus, which has high specificity and high sensitivity. Therefore, the primer composition described in the present invention can be used in detection and / or identification of pomegranate dry rot fungus. It provides a simple, fast and low cost detection technique for scientific research and production practice, and it is also a stone. Early warning and rational drug use of dry rot fungus of pomegranate have provided theoretical basis and technical guidance, which have practical and far-reaching significance for increasing ecological and economic benefits.
【技术实现步骤摘要】
一种用于石榴干腐病菌LAMP快速检测的引物组合物及其应用
本专利技术涉及农作物病害检测鉴定技术和分子生物学
,具体涉及一种用于石榴干腐病菌LAMP快速检测的引物组合物及其应用。
技术介绍
石榴干腐病病原菌属于半知菌亚门,鲜壳孢菌属真菌。分生孢子器球形或扁球形,分生孢子菱形,深黄色,常与黏液粘在一起。僵果上的菌丝在翌年4月中旬前后产生新的孢子器,成为此病的传播源。在我国多个省份均有发生,严重影响我国石榴生产和粮食安全。为了阻止石榴干腐病传播范围的不断扩大,对其进行快速、准确地检测鉴定尤为重要。近年来随着分子生物学相关技术的发展,基于PCR的方法已经成功用于检测石榴干腐病菌,尽管以PCR为基础的分子鉴定方法一定程度上克服了传统形态鉴定上的缺陷,但由于检测需要PCR仪、凝胶电泳和成像系统仪等昂贵的专业仪器设备,同时需要操作人员具有一定的分子生物学专业技能,并且只能在实验室条件下完成,需要较长的时间,检测过程复杂,不能满足快速检测的需求,限制了PCR检测方法在生产中的推广应用。环介导等温扩增技术(Loop‐mediatedisothermalamplification,LAMP)是Notomi等开发的一种恒温扩增方法,该方法针对靶基因的6个位点设计出4条引物,利用一种具有链式置换活性的DNA聚合酶(BstDNApolymerase),在恒温条件下(60℃左右)保温30-90分钟,即可完成扩增反应。由于该反应过程中产生焦磷酸镁沉淀物,出现浑浊沉淀,因此用肉眼就判定扩增结果,也可通过向其扩增产物中添加荧光染料通过颜色变化来判断,因此不需要专业的仪器设备,在普通水 ...
【技术保护点】
1.一种用于石榴干腐病菌LAMP快速检测的引物组合物,其特征在于,由F3、B3、FIP和BIP四条引物组成,所述引物F3、B3、FIP和BIP的核苷酸序列分别如下所示:F3:5’‑GGTCACCGTGACTTCATCAA‑3’;B3:5’‑CCTTCCACTCAGCAGTGTC‑3’;FIP:5’‑CACCAGTACCGGAGGCAATGATCATGATCACTGGTACCTCGC‑3’;BIP:5’‑GCTGGTATCTCCAAGGATGGCCACGATGAGCTGCTTGACAC‑3’。
【技术特征摘要】
1.一种用于石榴干腐病菌LAMP快速检测的引物组合物,其特征在于,由F3、B3、FIP和BIP四条引物组成,所述引物F3、B3、FIP和BIP的核苷酸序列分别如下所示:F3:5’-GGTCACCGTGACTTCATCAA-3’;B3:5’-CCTTCCACTCAGCAGTGTC-3’;FIP:5’-CACCAGTACCGGAGGCAATGATCATGATCACTGGTACCTCGC-3’;BIP:5’-GCTGGTATCTCCAAGGATGGCCACGATGAGCTGCTTGACAC-3’。2.权利要求1所述的LAMP引物组合物在制备石榴干腐病菌检测试剂中的应用。3.权利要求1所述的LAMP引物组合物在检测和/或鉴定石榴干腐病菌中的应用。4.一种用于检测石榴干腐病菌的试剂,其特征在于包含权利要求1所述的引物组合物。5.一种石榴干腐病菌LAMP快速检测方法,其特征在于包括以下步骤:(1)提取待检样品DNA,采用CTAB法提取待检样...
【专利技术属性】
技术研发人员:杨雪,陈雨,谷春艳,臧昊昱,
申请(专利权)人:安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所,
类型:发明
国别省市:安徽,34
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