减少免疫测定法中的干扰的方法技术

本发明专利技术涉及一种免疫测定方法，用于通过将怀疑含有分析物如抗原或抗体的分离样品与多种结合配偶体孵育来检测所述样品中的所述的分析物，所述结合配偶体之一携带可检测标记，其中添加不携带标记但结合所述可检测标记的标记特异性结合配偶体。该方法可应用于大量多样的分析物，并且已证明对于由于病原体感染而存在于样品中的IgG和IgM类分析物抗体特别有用。本发明专利技术进一步涉及用于所述方法的试剂盒，包含至少两种分析物特异性结合配偶体，其中一种携带可检测标记，以及结合所述可检测标记但本身不携带可检测标记的标记特异性结合配偶体。此外，本发明专利技术涵盖在体外诊断测试中不携带可检测标记的标记特异性结合配偶体的用途，用于消除样品中存在的由抗标记抗体引起的干扰。

Methods of reducing interference in immunoassay

The invention relates to an immunoassay method for detecting the analytes in the sample by incubating a separate sample containing an antigen or an antibody, such as an antigen or an antibody, with a variety of combined spouses, and one of the combined spouses carries a detectable marker, in which the label does not carry the marker but is combined with the detectable marker. The marker specificity of the combination of spouses. This method can be applied to a large variety of analytes and has been proved to be particularly useful for the antibodies of IgG and IgM analytes in the samples due to the infection of the pathogens. The invention further relates to a kit for the method described, comprising at least two analyte specific binding spouses, one of which carries a detectable marker, and a marker specific binding mate that combines the detectable marker but does not carry a detectable marker itself. In addition, the present invention covers the use of marker specific binding spouses that do not carry detectable markers in an in vitro diagnostic test, and is used to eliminate interference caused by anti labelled antibodies in the samples.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】减少免疫测定法中的干扰的方法专利
本专利技术涉及用于减少免疫测定法中的干扰的方法，所述干扰是由于结合至可检测标记的干扰因子引起，其中所述可检测标记用于直接或间接检测分析物。更具体地说，本专利技术涉及用于检测分析物的免疫测定方法，在一个实施方案中，所述分析物是分离的样品中的抗体或抗原，通过将所述样品与多种结合配偶体孵育，来检测所述样品中的抗体或抗原，其中一种结合配偶体携带可检测标记，其中添加不携带标记但与所述可检测标记结合的标记特异性结合配偶体。专利技术背景用于消除免疫诊断测定法中的干扰的方法是本领域中公知的并且已经被详细描述。例如参见Park和Kricka(TheImmunoassayHandbookElsevierLtd.2013，第5.3章，第403-415页)。特别是基于固相的免疫测定法，即所谓的异质测定法，会受到各种干扰，这些干扰可导致假阳性或假阴性测定结果、高背景信号、降低的测定敏感性和动力学、缺乏试剂稳定性以及这些试剂缩短的贮存期限。非特异性干扰通常由测定组分与独立于分析物存在的固相材料的非特异性结合而引起。另一个干扰源是类风湿因子、抗IgM抗体或抗动物抗体(嗜异性抗体)如人抗小鼠抗体(HAMA)的存在。另一个常见的干扰源是免疫测定中使用的信号发生组分。已知的产生信号的化合物例如是基于荧光、比色、化学发光或电化学发光原理发光的酶或标记。特别是对于电化学发光化合物，现有技术中已经描述了由于与信号发生化合物的非特异性结合引起的干扰(Ando等人，InternMed2007，46(15)：1225-1229；Sapin等人，ClinChemLabMed2007；45(3)：416-418)。为了避免基于信号发生组分的干扰，常常将过量的与所述信号发生组分连接的载体蛋白添加到免疫测定混合物中。结果，干扰化合物或因子结合到与游离载体蛋白质连接的所述信号发生组分。在这种措施不足以消除干扰的情况下，也可以将物质添加到免疫测定混合物中，所述物质在结构上与真实信号发生组分相似但自身不提供任何信号。结果，样品中存在的干扰因子以定量的方式与过量的类似化合物结合并且不与真正的靶标即信号发生化合物结合。因此可以抑制干扰。例如在美国专利号5888745和其等同的DE19519973中已经描述了这种操作。在这些文献中公开了一种确定分析物的方法，其中分析物特异性结合的物质附着于能够提供发光信号的含金属络合物上。在所述方法中，将与第一含金属络合物结构相关但不结合分析物的第二含金属络合物添加到待研究的样品中。该第二含金属络合物有助于减少第一含金属络合物信号的猝灭。然而，虽然可获得用于消除干扰的措施，但免疫测定法趋向于显示干扰，这种干扰不能通过简单地向测定混合物中添加与信号发生化合物相似的额外量的竞争性化合物来消除。因此可见待解决的问题是，增加基于发射可检测信号的免疫测定法的特异性。当将一种化合物添加到免疫测定法中，这种化合物与导致问题的标记本身结合时，干扰就会减少。这是令人吃惊的，因为我们的预期是标记本身将被遮蔽和屏蔽，从而屏蔽的标记不再可以生成可检测光信号或者只有不足够的可检测光信号可以生成。专利技术概述本专利技术基于这样的发现，即通过添加标记特异性结合配偶体将信号发生化合物或可检测标记，特别是附着于结合配偶体的光发生标记从其环境遮蔽和屏蔽。本专利技术涉及用于检测分析物的免疫测定方法，在一个实施方案中，通过将被怀疑含有抗原或抗体的分离样品与多种结合配偶体孵育来检测所述样品中的所述分析物，其中一种结合配偶体携带可检测标记，其中添加不携带标记但结合所述可检测标记的标记特异性结合配偶体。该方法适用于各种各样的分析物，并且已证明对于由于病原体感染而存在于样品中的IgG和IgM类分析物抗体特别有用。本专利技术进一步涉及用于所述方法的试剂盒，包含多种结合配偶体，其中至少一种结合配偶体与分析物结合，其中一种结合配偶体携带可检测标记并且其中一种结合配偶体是结合所述可检测标记但本身不带有可检测标记的标记特异性结合配偶体。此外，本专利技术涵盖不携带可检测标记的标记特异性结合配偶体的用途，用于在体外诊断测试中消除样品中存在的抗标记抗体引起的干扰。附图简述图1示出了实施例2和3中所述的刚地弓形体(Toxoplasmagondii)IgM免疫测定法的结果。图2示出了具有不同浓度的标记特异性结合配偶体作为抗干扰组分的弓形体(Toxoplasma)IgM免疫测定法的结果(参见实施例3)。图3示出了具有优化浓度的标记特异性结合配偶体作为抗干扰组分的抗乙型肝炎核心免疫测定法的结果。细节参阅实施例4。图4示出了非竞争性测定原理的示意图。在此形式中，检测到的信号与分析物的量直接成比例，即小浓度的分析物导致低测量信号，而高浓度分析物导致增加的信号。如果不存在分析物，则不能检测到高于预定背景或截止值的信号。a)用于检测特定种类的抗体的形式，在一个实施方案中，所述抗体是IgM抗体(μ捕获)；第一结合配偶体是携带可检测标记的分析物特异性抗原；b)与a)一样，但第一结合配偶体通过添加结合第一结合配偶体的额外的标记的结合配偶体而间接标记；c)用于检测抗体的双抗原夹心形式(DAGS)；第一和第二结合配偶体都结合分析物。第一结合配偶体本身携带可检测标记，或者也可以通过添加额外的结合配偶体进行间接标记，该额外的结合配偶体携带标记并与第一结合配偶体结合，如b)所示。图5(实施方案a))示出了竞争性测定形式的示意图。在竞争性形式中，检测信号和分析物存在之间的关系是相反的，即对于实施方案a)，在不存在分析物时，指示剂(specifier)能够结合分析物特异性结合配偶体并提供可测量的信号。另一方面，在分析物存在时，由于与分析物的竞争，指示剂与分析物特异性结合配偶体的结合被抑制。而且如果分析物存在，第二结合配偶体与分析物特异性结合配偶体的结合也会降低。结果，没有或者更低的信号显示分析物存在于被研究的样品中。图6示出了根据本专利技术的竞争性测定形式的另外两个实施方案b)和c)。在此，检测信号与分析物存在之间的关系也是相反的，即在不存在分析物时标记发出的可检测信号高，即高于在分析物存在(其中可测量信号减少)时。b)在该实施方案中，第一结合配偶体携带标记并且不使用指示剂。第二结合配偶体与分析物竞争与标记的第一结合配偶体的结合。c)在该实施方案中，第一结合配偶体不携带标记并且能够结合固相。不用第二结合配偶体来将免疫复合物附着到固相上。指示剂携带标记。分析物与指示剂竞争与第一结合配偶体的结合。在实施方案b)和c)中，添加第三结合配偶体，其结合第一结合配偶体携带的标记(b)或指示剂(specifier)携带的标记(c)。图7示出了通过在用于检测甲状腺激素TSH的免疫测定法(非竞争性夹心形式)中添加标记特异性结合配偶体来消除干扰。细节在实施例5中描述。专利技术详述本专利技术涉及一种免疫测定方法，用于通过将怀疑含有分析物的分离样品与多种结合配偶体孵育来检测所述分析物，所述多种结合配偶体之一携带可检测标记，其中添加本身不携带标记但结合所述可检测标记的标记特异性结合配偶体。免疫测定法是通过使用包含氨基酸的结合配偶体来检测存在于生物流体中的生物分子的存在和/或量的生物化学测试；这些结合配偶体衍生自抗体和/或抗原。本领域广泛已知免疫测定法本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于检测分离的样品中的分析物的免疫测定方法，其中所述分离的样品疑似含有所述分析物，所述方法通过将所述样品与多种结合配偶体孵育来实施检测，所述结合配偶体之一携带可检测标记，其中添加不携带标记但结合所述可检测标记的标记特异性结合配偶体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.12.01 EP 15197192.61.用于检测分离的样品中的分析物的免疫测定方法，其中所述分离的样品疑似含有所述分析物，所述方法通过将所述样品与多种结合配偶体孵育来实施检测，所述结合配偶体之一携带可检测标记，其中添加不携带标记但结合所述可检测标记的标记特异性结合配偶体。2.根据权利要求1所述的免疫测定方法，包括a.将所述样品与以下孵育i.结合分析物并携带可检测标记的第一结合配偶体ii.能够结合到固相并结合分析物的第二结合配偶体iii.结合所述第一结合配偶体的所述可检测标记的第三结合配偶体，其中所述第三结合配偶体不携带标记b.将所述样品与所述第一、第二和第三结合配偶体混合形成免疫反应混合物c.将所述免疫反应混合物保持足够的时间期间以允许体液样品中如果存在的所述分析物与所述第一和第二结合配偶体发生免疫反应以形成免疫反应产物；并允许所述第三结合配偶体与所述第一结合配偶体的所述可检测标记发生免疫反应d.检测任何所述免疫反应产物的存在和/或浓度。3.根据权利要求1所述的免疫测定方法，包括a.将所述样品与以下孵育i.结合分析物且不携带可检测标记的第一结合配偶体ii.结合第一结合配偶体并与分析物竞争结合第一结合配偶体的指示剂，其中所述指示剂携带可检测标记iii.能够与固相结合并结合所述第一结合配偶体，并与所述分析物和所述指示剂竞争结合所述第一结合配偶体的第二结合配偶体iv.与所述指示剂的所述可检测标记结合的第三结合配偶体，其中所述第三结合配偶体不携带标记b.将所述样品与所述第一、第二和第三结合配偶体以及所述指示剂混合而形成免疫反应混合物c.将所述免疫反应混合物维持足够的时间期间，以允许所述体液样品中如果存在的所述分析物与所述指示剂和第二结合配偶体竞争结合所述第一结合配偶体，并允许所述第三结合...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·乌普迈尔，T·扎恩特，D·勒斯勒尔，J·波尔兹，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH