一种从白贝中提取具有抗氧化和护肝作用的白贝酸性多糖的方法技术

本发明专利技术公开了一种从白贝中提取具有抗氧化和护肝作用的白贝酸性多糖的方法，以抗氧化或护肝活性为依据，将水提醇沉法和Sevag去蛋白法相结合，首次从白贝中提取得到白贝酸性多糖，本发明专利技术中的提取工艺步骤简单，操作条件温和且要求低，对操作设备无腐蚀，环保，且无副产物产生，生产成本低，制得的白贝多糖具有良好的抗氧化和护肝活性，为制备抗氧化/护肝药物或保健品提供了新的选择。

Method for extracting acidic polysaccharide from white beet with antioxidant and hepatoprotective effect

The invention discloses a method for extracting white shellfish acid polysaccharide from white shellfish, which is based on antioxidant or liver protection activity, combining water extraction and Sevag deproteinized method to extract white shellfish acid polysaccharide for the first time. The extraction process is simple and operating conditions in this invention. Mild and low demand, no corrosion to the operating equipment, environmental protection, no by-products, low production costs, made white beetle sugar has good antioxidant and liver protection activity, for the preparation of antioxidant / liver protection drugs or health products to provide a new choice.

【技术实现步骤摘要】
一种从白贝中提取具有抗氧化和护肝作用的白贝酸性多糖的方法
本专利技术涉及一种贝类多糖的方法，具体涉及一种从白贝中提取具有抗氧化和护肝作用的白贝酸性多糖的方法。
技术介绍
白贝（MonetariamonetaLinnaeus），一种可食用的贝类，广泛存在于我国南海海域。白贝最早记载于《神农本草经》，具有清热明目、利尿退翳等功效，现代科学研究证明，白贝富含多种营养成分，如多糖、蛋白质和微量元素等，其中，多糖具有多方面的保健功能，如抗氧化、抗菌、抗癌等，且白贝的生物功效大多与多糖有关。目前有关白贝的研究报道并不多见，对白贝多糖及其活性的研究更是较为薄弱。先有的科学研究较多集中于采用酸法、碱法或酶解法从贻贝、泥螺等其它贝类中提取多糖，而酶提取技术因酶的专一性易受到限制，提取的技术条件更为严格，分解提取液中易掺入其它非目的产物，后续需要新增其它分离步骤方能得到高纯度的多糖，酸法和碱法不仅容易对操作设备产生腐蚀，增加生产成本，而且容易破坏白贝多糖活性。另外，目前对多糖的活性研究主要方法为先提取纯化粗多糖，进一步分离得到各个组分，再进行活性检测；该方法不确定因素较多，活性多糖成分在分离过程中易丢失，且提取分离得到的贝类多糖不一定活性，导致后续各个组分的分离纯化工作没有导向性，存在物力、人力、财力等资源浪费的问题。基于此，本专利技术以抗氧化或护肝活性为依据，将水提醇沉法与Sevag去蛋白法相结合，以获得一种具有抗氧化和护肝活性的高纯度白贝多糖（简称MMP）。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种从白贝中提取具有抗氧化和护肝作用的白贝酸性多糖的方法，利用水提醇沉法提取活性多糖，工艺简单，无副产物产生，且生产成本低。本专利技术通过以下技术方案实现：一种从白贝中提取具有抗氧化和护肝作用的白贝酸性多糖的方法，包括以下步骤：a、鲜活白贝清洗干净，吐沙过夜，去除外壳，取白贝肉，置于烘箱中烘干后粉碎，得白贝肉粉；b、将步骤a得到的白贝肉粉经无水乙醇脱脂后用沸水提取，过滤，取滤液，反复沸水提取2~3次后，在所得滤液中加入乙醇沉淀，过滤，取沉淀物，用水溶解，冷冻干燥即得白贝粗多糖；c、取步骤b得到的白贝粗多糖，用去离子水溶解充分后，加入Sevag试剂去蛋白，剧烈震荡，静置，离心去蛋白，取清液，重复去蛋白操作2~3次后，将所得的溶液浓缩；d、在步骤c得到的浓缩液中加入无水乙醇，震荡，静置后离心，取沉淀物，所得沉淀物置于烘箱烘干，即得白贝酸性多糖。优选地，步骤a中的烘箱温度为50~60℃。优选地，步骤b中的沸水提取温度为60~65℃，提取时间为2~4h.优选地，步骤c中去离子水与白贝粗多糖的体积比为10:1~15:1,去离子水溶解后的白贝粗多糖与Sevag试剂的物料比为4:1~6:1，剧烈震荡时间为30~40min，静置时间为10~15min，离心速率为4000~5000rpm，离心时间为10~15min。优选地，步骤d中浓缩液与无水乙醇的体积比为1:8~1:10，震荡时间为30~40min，静置时间为10~12h，离心速率为4000~5000rpm，离心时间为10~15min，烘箱温度为50~60℃。优选地，白贝酸性多糖中甘露糖、鼠李糖含量大于90%。白贝酸性多糖中，糖单元比大致为甘露糖：鼠李糖=3:1。优选地，白贝酸性多糖分子量为414.4kDa。优选地，白贝酸性多糖制成口服制剂或针剂使用。本专利技术有如下优点：1.本专利技术采用水提取法，首次从白贝中分离得到白贝多糖活性物质，改变了传统工艺中酸液、碱液或酶解的提取方式，步骤简单，操作条件温和且要求低，对操作设备无腐蚀，环保，且无副产物产生。2.本专利技术首次提出以抗氧化和护肝活性为导向的白贝多糖制备方法，增强目标性，避免活性成分的损失，减少无活性组分的分离，降低了生产成本。3.本专利技术制得的白贝多糖活性组分具有较强的护肝活性，与模型组相比，白贝多糖活性组分对AST和ALT有明显的抑制作用，并得出水溶性白贝多糖是白贝发挥护肝活性的物质基础。4.本专利技术首次开发了白贝抗氧化和护肝活性的新功效，扩展了白贝的新用途，且无明显的副作用。附图说明下面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。图1为各标准单糖鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖的气相色谱图图2为白贝多糖的气相色谱图图3位白贝多糖的红外光谱图图4为白贝多糖的清除超氧阴离子能力图图5为白贝多糖的清除ABTS自由基能力图。具体实施方式为使本领域普通技术人员充分理解本专利技术的技术方案和有益效果，以下结合附图及具体实施例进一步说明。此处实施例仅用于解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。实施例1a、鲜活白贝5kg清洗干净，吐沙过夜，去除外壳，取白贝肉，置于50℃烘箱中烘干后粉碎，得白贝肉粉100g；b、将步骤a得到的100g白贝肉粉与1L无水乙醇脱脂混合后，60℃下，水浴3h，并不断搅拌，脱脂后过滤得滤渣80g；将滤渣用800ml60℃沸水提取2h，过滤，取滤液，所得滤渣反复沸水提取2次后，合并得到的滤液并浓缩，在浓缩液中加入2L无水乙醇沉淀，过滤，取沉淀物，用50ml水溶解，冷冻干燥即得白贝粗多糖34.6g；c、取步骤b得到的白贝粗多糖，用350ml倍去离子水溶解充分后，加入Sevag试剂（氯仿：丁醇=5:1）去蛋白，剧烈震荡30min，静置，4000rpm下离心10min去蛋白，取清液，重复去蛋白操作2次后，将所得的溶液浓缩至100ml；d、在步骤c得到的浓缩液中加入800ml无水乙醇，震荡30min，静置10h后4000rpm下离心10min，取沉淀物，所得沉淀物置于60℃烘箱烘干，即得白贝酸性多糖12.4g，硫酸-苯酚法测定总糖含量为91%。实施例2a、鲜活白贝5kg清洗干净，吐沙过夜，去除外壳，取白贝肉，置于55℃烘箱中烘干后粉碎，得白贝肉粉100g；b、将步骤a得到的100g白贝肉粉与1L无水乙醇脱脂混合后，62℃下，水浴3.5h，并不断搅拌，脱脂后过滤得滤渣82g；将滤渣用800ml62℃沸水提取3h，过滤，取滤液，所得滤渣反复沸水提取2次后，合并得到的滤液并浓缩，在浓缩液中加入2L无水乙醇沉淀，过滤，取沉淀物，用50ml水溶解，冷冻干燥即得白贝粗多糖35.2g；c、取步骤b得到的白贝粗多糖，用450ml倍去离子水溶解充分后，加入100mlSevag试剂（氯仿：丁醇=5:1）去蛋白，剧烈震荡35min，静置，4500rpm下离心15min去蛋白，取清液，重复去蛋白操作2次后，将所得的溶液浓缩至100ml；d、在步骤c得到的浓缩液中加入900ml无水乙醇，震荡35min，静置11h后4500rpm下离心15min，取沉淀物，所得沉淀物置于55℃烘箱烘干，即得白贝酸性多糖13.5g，硫酸-苯酚法测定总糖含量为93.8%。实施例3a、鲜活白贝5kg清洗干净，吐沙过夜，去除外壳，取白贝肉，置于60℃烘箱中烘干后粉碎，得白贝肉粉100g；b、将步骤a得到的100g白贝肉粉与1L无水乙醇脱脂混合后，65℃下，水浴4小时，并不断搅拌，脱脂后过滤得滤渣85g；将滤渣用800ml65℃沸水提取4h，过滤，取滤液，所得滤渣反复沸水提取2次后，合并得到的滤液并浓缩，在浓缩液中加入2L无水乙醇沉淀，过滤，取沉淀物，用50ml水溶解，冷冻干燥即得本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从白贝中提取具有抗氧化和护肝作用的白贝酸性多糖的方法，其特征在于包括以下步骤：a、鲜活白贝清洗干净，吐沙过夜，去除外壳，取白贝肉，置于烘箱中烘干后粉碎，得白贝肉粉；b、将步骤a得到的白贝肉粉经无水乙醇脱脂后用沸水提取，过滤，取滤液，反复沸水提取2~3次后，在所得滤液中加入乙醇沉淀，过滤，取沉淀物，用水溶解，冷冻干燥即得白贝粗多糖；c、取步骤b得到的白贝粗多糖，用去离子水溶解充分后，加入Sevag试剂去蛋白，剧烈震荡，静置，离心去蛋白，取清液，重复去蛋白操作2~3次后，将所得的溶液浓缩；d、在步骤c得到的浓缩液中加入无水乙醇，震荡，静置后离心，取沉淀物，所得沉淀物置于烘箱烘干，即得白贝酸性多糖。

【技术特征摘要】
1.一种从白贝中提取具有抗氧化和护肝作用的白贝酸性多糖的方法，其特征在于包括以下步骤：a、鲜活白贝清洗干净，吐沙过夜，去除外壳，取白贝肉，置于烘箱中烘干后粉碎，得白贝肉粉；b、将步骤a得到的白贝肉粉经无水乙醇脱脂后用沸水提取，过滤，取滤液，反复沸水提取2~3次后，在所得滤液中加入乙醇沉淀，过滤，取沉淀物，用水溶解，冷冻干燥即得白贝粗多糖；c、取步骤b得到的白贝粗多糖，用去离子水溶解充分后，加入Sevag试剂去蛋白，剧烈震荡，静置，离心去蛋白，取清液，重复去蛋白操作2~3次后，将所得的溶液浓缩；d、在步骤c得到的浓缩液中加入无水乙醇，震荡，静置后离心，取沉淀物，所得沉淀物置于烘箱烘干，即得白贝酸性多糖。2.根据权利要求1所述的一种从白贝中提取具有抗氧化和护肝作用的白贝酸性多糖的方法，其特征在于：步骤a中的烘箱温度为50~60℃。3.根据权利要求1所述的一种从白贝中提取具有抗氧化和护肝作用的白贝酸性多糖的方法，其特征在于：步骤b中的沸水提取温度为60~65℃，提取时间为2~4h。4.根据权利要求1所述的一种从白贝中提...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁君，徐婷婷，陈星，熊清平，景怡，许莹，王丽萍，施徐，陶伟莉，
申请(专利权)人：淮阴工学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32