一种延长白菜小孢子胚状体再生植株继代间隔时间的方法技术

本发明专利技术提供了一种延长白菜小孢子胚状体再生植株继代间隔时间的方法，本方法使用的继代培养基为含有绵白糖20～30g/L，6‑BA 0.15～0.25mg/L，琼脂粉8～10g/L，NAA 0.35～0.45mg/L，卡那霉素(Kan)0.1～0.2mg/L，pH值为5.5～6.5的MS培养基，培养基分装量为每100mL三角瓶装入70～80mL，将再生植株接入培养基中，在20±2℃，光照强度2000～3000lx，光周期12h/12h的条件下培养7～10d后，移入2～8℃冷藏箱中放置，待培养基含量下降至10～20mL时取出，进行下一次的继代操作。以此方法可使继代间隔时间达到70～90d，是常规培养继代间隔时间的2～3.5倍，可以大大减少继代转接的工作量。

A method for prolonging the interval between regenerated plants of Microspore Embryoid of Chinese Cabbage

The present invention provides a method for prolonging the interval time of the regeneration plant of Chinese cabbage Microspore Embryoid. The subculture medium used in this method is a MS culture medium containing 20 ~ 30g/L of white sugar, 6 BA, 0.15 ~ 0.25mg/L, agar powder 8 ~ 10g/L, NAA 0.35 to 0.45mg/L, kanamycin (Kan) 0.1 ~ 0.2mg/L, and pH value 5.5 to 6.5. The content of the culture medium was 70 ~ 80mL in each 100mL triangle bottle, and the regenerated plants were inserted into the culture medium, at 20 + 2 C, the light intensity was 2000 ~ 3000lx, and the photoperiod 12h/12h was incubated for 7 to 10d and placed in the 2~8 centigrade refrigerator, then the content of the medium was dropped to 10 ~ 20mL, and the next subculture operation was carried out. With this method, the interval between subcultures can reach 70 to 90d, which is 2 to 3.5 times of the interval between routine culture and subculture, which can greatly reduce the workload of successive generations.

【技术实现步骤摘要】
一种延长白菜小孢子胚状体再生植株继代间隔时间的方法
本专利技术涉及属于生物
，尤其涉及一种延长白菜小孢子胚状体再生植株继代间隔时间的方法。技术背景白菜是我国人民生活中主要的食用蔬菜之一，长期以来深受广大群众喜爱。为培育新的种质资源，育成优质白菜品种，常规方法需要经过杂交、回交和自交分离，选育出理想的材料常常需要好几个世代，而利用小孢子培养技术，不仅可快速得到双单倍体纯系，还可大大缩短育种年限，随着国内外利用游离小孢子培养技术在芸薹属作物育种的研究中相继取得突破，也为此技术在实际中应用提供了基础。利用小孢子培养技术能缩短育种年限，但在具体操作中却存在要对胚状体再生植株进行多次继代转接再培养以保持其活性从而满足现实躲过炎热夏季入土栽培时间的问题，继代转接要耗费大量的人力和时间，所以建立一种延长继代间隔时间的方法就非常重要，而延长继代间隔时间则主要通过延缓植株在培养基中生长速度及培养基干枯时间来实现。通过研究发现，培养基的成分含量、培养温度、光照强度及光周期等因素均可对植株生长速度及培养基干枯时间产生影响，本专利技术通过对以上因素进行优化，进而实现延长继代间隔时间的目的。
技术实现思路
一种延长白菜小孢子胚状体再生植株继代间隔时间的方法，所使用的继代培养基为：含有绵白糖20～30g/L，6-BA0.15～0.25mg/L，NAA0.35～0.45mg/L，琼脂粉8～10g/L，卡那霉素(Kan)0.1～0.2mg/L，pH值为5.5～6.5的MS培养基；培养基分装量为每100mL三角瓶装入70～80mL。进一步地，具体操作步骤为：(1)将由胚状体形成的再生植株转接入含有上述培养基的三角瓶中。(2)在20±2℃，光照强度2000～3000lx，光周期12h/12h的条件下培养7～10d。(3)将第(2)步接种再生植株后的三角瓶移入2～8℃冷藏箱中放置，待培养基含量下降至10～20mL时取出，继而进行下一次的继代转接操作。进一步地，可使继代间隔时间达到70～90d，是常规培养继代间隔时间的2～3.5倍。附图说明图1为白菜胚状体再生植株继代间隔时间对照表。图2为白菜胚状体再生植株继代间隔时间对照表。具体实施方式选取白菜小孢子不同基因型胚状体再生植株，在四个成分含量不同的继代培养基中培养，培养基分别为：1号：含有绵白糖20～30g/L，6-BA0.15～0.25mg/L，NAA0.35～0.45mg/L，琼脂粉8～10g/L，卡那霉素(Kan)0.1mg/L，pH值为5.5～6.5的MS培养基；2号：含有绵白糖30～40g/L，6-BA0.25～0.35mg/L，NAA0.35～0.45mg/L，琼脂粉8～10g/L，卡那霉素(Kan)0.1mg/L，pH值为5.5～6.5的MS培养基；3号：含有绵白糖20～30g/L，6-BA0.15～0.25mg/L，NAA0.25～0.35mg/L，琼脂粉6.5～7.5g/L，卡那霉素(Kan)0.2mg/LpH值为5.5～6.5的MS培养基；4号：含有绵白糖30～40g/L，6-BA0.25～0.35mg/L，NAA0.25～0.35mg/L，琼脂粉6.5～7.5g/L，卡那霉素(Kan)0.1mg/L，pH值为5.5～6.5的MS培养基；培养基分装量为每100mL三角瓶装入70～80mL，将再生植株转入培养基后，在20±2℃，光照强度2000～3000lx，光周期12h/12h的条件下培养7d～10d后，移入2～8℃冷藏箱中放置，待培养基含量下降至10～20mL时取出(如出现培养基干裂严重要提前取出)。统计从再生植株转接入培养基至从冰箱中取出的时间，结果见表1，选取白菜小孢子不同基因型胚状体再生植株，选用继代培养基为含有绵白糖20～30g/L，6-BA0.15～0.25mg/L，NAA0.35～0.45mg/L，琼脂粉8～10g/L，卡那霉素(Kan)0.1mg/L，pH值为5.5～6.5的MS培养基，分别在三个不同培养条件下进行培养，条件分别为：A.温度20±2℃，光照强度2000～3000lx，光周期12h/12h，培养7d～10d移入2～8℃冷藏箱中放置，待培养基含量下降至10～20mL时取出。B.温度25±3℃，光照强度3000～4000lx，光周期16h/8h，培养7d～10d移入2～8℃冷藏箱中放置，待培养基含量下降至10～20mL时取出。C.温度25±3℃，光照强度3000～4000lx，光周期16h/8h，培养7d～10d后放置在室温条件下，待培养基含量下降至10～20mL时停止培养。统计从再生植株转接入培养基至从冰箱中取出或室温条件下停止培养的时间，参考附图2可见培养条件A对继代间隔时间的延长效果最好，间隔时间可达到70～90d，是培养条件C继代间隔时间的2～3.5倍。利用本专利技术所述的技术方案，或本领域的技术人员在本专利技术技术方案的启发下，设计出类似的技术方案，而达到上述技术效果的，均是落入本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种延长白菜小孢子胚状体再生植株继代间隔时间的方法，其特征在于：所使用的继代培养基为：含有绵白糖20～30g/L，6‑BA0.15～0.25mg/L，琼脂粉8～10g/L，NAA0.35～0.45mg/L，卡那霉素(Kan)0.1～0.2mg/L，pH值为5.5～6.5的MS培养基；培养基分装量为每100mL三角瓶装入70mL～80mL。

【技术特征摘要】
1.一种延长白菜小孢子胚状体再生植株继代间隔时间的方法，其特征在于：所使用的继代培养基为：含有绵白糖20～30g/L，6-BA0.15～0.25mg/L，琼脂粉8～10g/L，NAA0.35～0.45mg/L，卡那霉素(Kan)0.1～0.2mg/L，pH值为5.5～6.5的MS培养基；培养基分装量为每100mL三角瓶装入70mL～80mL。2.根据权利要求1所述的一种延长白菜小孢子胚状体再生植株继代间隔时间的方法，其特征在于：具体操作步骤如下，(1)...

【专利技术属性】
技术研发人员：戴速航，
申请(专利权)人：沈阳静冶生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁,21