本发明专利技术涉及用于治疗变态反应的核酸。更具体而言，本发明专利技术提供用于治疗变态反应的DNA疫苗。所述疫苗包含一种或多种变应原性表位、优选衍生所述表位的变应原性蛋白质的完整蛋白质序列的编码序列，所述编码序列与溶酶体相关膜蛋白(LAMP)的腔内域和LAMP的靶向序列框内融合。所述疫苗使得能递呈正确构型的三维表位供产生免疫应答。所述疫苗可为多价分子，并且/或者可作为含有两种或更多种DNA构建体的多价疫苗的一部分提供。
【技术实现步骤摘要】
用于治疗变态反应的核酸本申请为国际申请日2012年6月15日、国际申请号PCT/US2012/042552于2015年2月6日进入中国国家阶段、申请号201280075163.5、专利技术名称“用于治疗变态反应的核酸”的分案申请。相关专利申请的交叉引用本专利申请依赖于2011年6月14提交的美国临时专利申请No.61/496,866的公开内容并且要求该临时专利申请的权益，特此将该临时专利申请的整个公开内容以引用的方式并入本文。
本专利技术涉及分子生物学和医学领域。更具体地讲，本专利技术涉及用作DNA疫苗的核酸以及将其用于治疗遭受变态反应或易受变态反应影响的受试者的方法。
技术介绍
变态反应是表征为产生对抗变应原(或引起变态反应的分子)的IgE抗体的超敏反应性疾病。变态反应影响超过25％的人口。变态反应可通过许多途径(包括呼吸道、皮肤接触、摄食、昆虫叮咬或药物注入)进入人体。变态反应疾病管理包括诊断和治疗。变态反应学家使用多种技术，如皮肤点刺测试、基于放射变应原吸附的技术、ELISA或激发测试来证明变应原特异性IgE以及来鉴定变应原来源而诊断变态反应。变态反应的治疗最通常分为两类：回避和施与抗组胺剂。第三种替代方法即变态反应免疫疗法，其要求患者每周接受由小量攻击性变应原组成的注射剂以帮助免疫系统重新训练(reeducate)其对变应原的应答。变应原融合蛋白的使用和产生是本领域所熟知的。例如，美国专利No.7,566,456教导了具有IgE和IgG结合域以及编码变应原的融合蛋白。另外，WO97/07218教导了供在变态反应免疫疗法中使用的变应原-抗CD32融合蛋白。然而，这两篇文献均没有教导它们各自的融合蛋白如何通过抗原递呈而与T细胞相互作用来诱导或改变Th1应答。此外，在引导含抗CD32的疫苗至树突细胞到实现Th1细胞的正诱导之间没有理论联系。这两篇文献均教导了一种组合物，该组合物在治疗上引入一种变应原，使得该变应原可作为变应原融合蛋白存在于血清中。已经由Toda等人(2002)确定，可将变应原的T细胞表位(在本例中是位于氨基酸247-258处的CryJ2表位)附接至融合蛋白并且可用于进行变态反应特异性免疫疗法。Toda等人(2002)描述的特异性组合物是DNA疫苗的使用，该DNA疫苗编码与II类相关恒定链肽(CLIP)附接的CryJ2的主要CD4T细胞表位(位于氨基酸247-258)。CLIP含有溶酶体/内体运输序列并且含有结合至MHCII的肽结合槽的域。Toda等人(2002)显示，用CryJ2肽/CLIPDNA疫苗免疫导致使小鼠启动主要的Th1应答，该应答表征为较高的IFN-γ和IgG2a产生。然而，Toda等人没有教导可用于进行变态反应特异性免疫疗法的变应原的整个蛋白质编码序列的细胞内靶向。美国专利No.6,982,326和美国专利No.6,090,386描述了编码日本柳杉(Cryptomeriajaponica)主要花粉变应原CryJ1、CryJ2、JunsI和JunvI的核酸序列以及其片段或肽。该专利技术还提供了在用编码CryJ1、CryJ2、JunsI和JunvI或其至少一种片段、以及CryJ1、CryJ2、JunsI或JunvI的片段或者其至少一种片段的核酸序列转化的宿主细胞中产生的纯化的CryJ1、CryJ2、JunsI和JunvI以及其至少一种片段，以及合成制备的CryJ1、CryJ2、JunsI或JunvI的片段。CryJ1、CryJ2、JunsI和JunvI以及其片段被公开可用于诊断、治疗和预防日本柳杉花粉症。该专利技术还提供CryJ1和CryJ2的分离的肽。在该专利技术范围内的肽包含CryJ1或CryJ2的至少一个T细胞表位，或者优选至少两个T细胞表位。该专利技术还涉及经修饰的肽，该肽具有与对应的天然存在的变应原或其部分相似的或增强的治疗特性但具有减少的副作用。还提供了治疗或诊断个体中对日本柳杉花粉敏感的方法以及包含一种或多种该专利技术的肽的治疗组合物和多重肽制剂(multipeptideformulation)。该专利技术没有教导如何将表位或变应原合并进具有免疫刺激特性的DNA疫苗中。美国专利No.7,547,440和美国专利No.7,112,329通过用涵盖日本扁柏(hinoki)花粉变应原一级结构的重叠肽对建立自遭受日本扁柏花粉变态反应的患者的T细胞系进行刺激，鉴定了日本扁柏花粉变应原分子上的T细胞表位位点。该肽可用于针对患有春天树木花粉症的患者(包括与日本扁柏花粉有交叉反应性的日本扁柏花粉症患者)的基于肽的免疫疗法。该肽还可用于诊断春天树木花粉症。该专利技术局限于诊断学和表位的多肽递送。DNA疫苗已发展为传统的全细胞或全病毒疫苗的替代形式。一般而言，DNA疫苗是经工程改造的核酸，其包含编码一种或多种表位的序列。将该核酸递送至细胞，通常是抗原递呈细胞(APC)，使该核酸表达，所表达的蛋白质上存在的表位在内体/溶酶体区室中加工，并最终递呈在细胞的表面上。授予August等人的美国专利No.5,633,234公开并表征了溶酶体相关膜蛋白(LAMP)的内体/溶酶体靶向序列。该专利鉴定了该蛋白质C端区域中的关键残基，该关键残基对该蛋白质靶向至内体/溶酶体区室是必要的。该专利公开了，抗原肽与C端LAMP靶向序列融合可为免疫应答的产生提供增强的表位加工和递呈。此外，授予Harris等人的美国专利申请公开No.2004/0157307公开了LAMP腔内域(lumenaldomain)作为“运输域”来引导由DNA疫苗表达的嵌合蛋白穿过一个或多个细胞区室/细胞器如穿过溶酶体囊泡途径的用途。该嵌合蛋白包括LAMP多肽的腔内域、包含此前从抗原蛋白质鉴定和选择的肽表位序列的抗原域、跨膜域和内体/溶酶体靶向序列。已提出将DNA疫苗作为变应性疾病的治疗方法(Raz等人，1996；Hartl等人，2004；Hsu等人，1996；Crameri2007；Weiss等人，2006)。基本原理是，由DNA疫苗编码的变应原蛋白质将优先激活变应原特异性Th1细胞应答，伴随着由APC、自然杀伤细胞(NK)和T细胞产生干扰素，而不是激活特征性的Th2型应答，如IL-4、IL-5和IL-13的分泌，以及由B淋巴细胞形成IgE和在晚期反应中嗜酸性粒细胞的成熟和募集。然而，Th1和Th2T细胞表型的差异性诱导的根本机制看起来涉及大量的因素，例如疫苗制剂的细菌DNA的独特性质(如未甲基化的和CpGDNA残基)、由先天免疫引起的细胞因子环境和变应原的细胞运输特性(Chen等人，2001；Kaech等人，2002)。尚没有专利技术或方法成功地解决通过递送编码变应原的核酸所进行的变态反应治疗的不确定性。因而，至今尚未实现这样一种变态反应治疗方法。此外，施用DNA疫苗用于治疗变应性疾病已导致变应原肽分泌进细胞外环境，从而有可能导致通过激活IgE而意外地诱导变应性应答。
技术实现思路
本专利技术提供编码变应原性蛋白质、变应原性多肽和变应原性肽的核酸(本文也称为“构建体”)。该核酸设计用于递送至免疫细胞以及在那些细胞中产生变应原性蛋白质、多肽和肽。所编码的蛋白质、多肽和肽具有靶向序列，用于将该蛋白质靶向至MHC-II区室供一种或多种表位的加工和展示，从而导致对所述表位的免本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种编码嵌合蛋白的核酸分子，其中所述嵌合蛋白由与SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:9具有至少80％同一性的氨基酸序列构成。
【技术特征摘要】
1.一种编码嵌合蛋白的核酸分子，其中所述嵌合蛋白由与SEQIDNO:5、SEQIDNO:3和SEQIDNO:9具有至少80％同一性的氨基酸序列构成。2.根据权利要求1所述的核酸分子，其中所述嵌合蛋白由与SEQIDNO:5具有至少80％同一性的氨基酸序列构成。3.根据权利要求1所述的核酸分子，其中所述嵌合蛋白由与SEQIDNO:3具有至少80％同一性的氨基酸序列构成。4.根据权利要求1所述的核酸分子，其中所述嵌合蛋白由与SEQIDNO:9具有至少80％同一性的氨基酸序列构成。5.根据权利要求2或3所述的核酸分子，其中所述核酸分子包含DNA。6.一种表达载体，其包含根据权利要求5所述的核酸分子。7.一种药物组合物，其包含根据权利要求6所述的表达载体。8.根据权利要求7所述的药物组合物，其还包含药学上可接受的载体。9.根据权利要求6所述的表...
【专利技术属性】
技术研发人员：威廉·赫尔，特瑞·海兰，
申请(专利权)人：免疫治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：美国,US
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