治疗恶性肿瘤疼痛的微囊肾上腺髓质细胞及其制备方法技术

治疗恶性肿瘤疼痛的微囊肾上腺髓质细胞由ＡＣＡ微囊或ＡＰＡ微囊包埋人或动物的肾上腺髓质细胞形成，微囊截留分子量为６８－９７．４ＫＤ。治疗恶性肿瘤的微囊肾上腺髓质细胞的制备方法包括分离、培养、微囊化、冻存和复温５个步骤，即首先从人或动物的肾上腺体中分离出肾上腺髓质细胞并在培养液中短期培养，然后利用ＡＣＡ或ＡＰＡ微囊肾上腺髓质细胞并利用液氮冻存，移植前在３７℃温度下复温。本发明专利技术中治疗恶性肿瘤疼痛的微囊肾上腺髓质细胞存活率高并保有儿茶酚胺分泌功能，移植到人的珠网膜下腔时有明显的镇痛作用并可产生免疫隔离效果，故特别适用于临床治疗恶性肿瘤疼痛。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种用于临床。大量研究表明，人或动物的肾上腺髓质细胞具有分泌儿茶酚胺和脑腓肽等物质的功能，因此将同种或异种肾上腺髓质细胞移植到人的珠网膜下腔时可产生镇痛作用。但是，无论是同种还是异种肾上腺髓质细胞移植，受体对供体细胞都将发生免疫排斥反应，异种细胞移植尤甚。研究还表明，受体对供体细胞的这种免疫排斥反应可采用免疫隔离的方法即微囊化的方法加以解决。所谓微囊化，即是利用适当的半透膜微囊包埋移植的肾上腺髓质细胞，这种半透膜微囊只允许小分子量物质通过，而大分子量物质则被截留在微囊外。于是，维持微囊内肾上腺髓质细胞存活所需的氧气和葡萄糖等小分子量物质可以通过微囊壁而自由进入微囊内，儿茶酚胺和脑腓肽等囊内细胞的合成代谢产物也可透出囊外而发挥镇痛作用。而受体免疫球蛋白和淋巴细胞等大分子物质则不能进入微囊内，因此可避免受体免疫系统与微囊内的肾上腺髓质细胞发生免疫排斥反应。为了实现上述目的，本专利技术利用海藻酸钠—壳聚糖—海藻酸钠(ACA)微囊或海藻酸钠—聚赖氨酸—海藻酸钠(APA)微囊包埋人或动物的肾上腺髓质细胞，以形成一种ACA或APA徽囊肾上腺髓质细胞。为使氧气和葡萄糖等小分子量物质以及儿茶酚胺和脑腓肽等合成代谢产物能自由通过微囊壁，同时阻止免疫球蛋白和淋巴细胞等大分子物质进入微囊内，微囊截留分子量(即允许通过的最大分子量)应控制为68-97.4KD。上述治疗恶性肿瘤疼痛的微囊肾上腺髓质细胞的制备方法包括分离、培养、微囊化、冻存和复温5个步骤，即首先从人或动物的肾上腺 体中分离出肾上腺髓质细胞并在适当的培养液中短期培养，然后用ACA或APA微囊包埋短期培养后的肾上腺髓质细胞，以形成ACA或APA微囊肾上腺髓质细胞并利用液氮冻存，移植前再在37℃的温度条件下使冻存的微囊肾上腺髓质细胞复苏。实施表明，本专利技术中治疗恶性肿瘤疼痛的徽囊肾上腺髓质细胞的存活率高并且保有分泌儿茶酚胺的功能，将其适量移植到恶性肿瘤疼痛患者的珠网膜下腔时，可有明显的镇痛作用和免疫隔离效果。以下结合具体实施例对本专利技术的技术特征作进一步的详细说明。本专利技术中治疗恶性肿瘤疼痛的微囊肾上腺髓质细胞的制备方法主要包括分离、培养、微囊化、冻存和复温等5个步骤。(1)分离首先在无菌条件下切取人或动物的肾上腺体，然后利用浓度为0.5-3.0mg/ml的胶原酶溶液消化并分离出肾上腺髓质细胞。(2)培养将分离出的肾上腺髓质细胞在MEM培养液中培养24-72小时，肾上腺髓质细胞的存活率应在95％以上。(3)微囊化利用ACA微囊或APA微囊包埋经过培养的肾上腺髓质细胞以获得ACA或APA微囊肾上腺髓质细胞，并控制其微囊直径为250-500μm，包囊量为(1-8)×102，气微囊壁厚为33.1±3.5μm，微囊网孔直径为0.75±0.62μm。具体的包埋操作工艺系现有技术，在申请号为02116987.X的中国专利申请中已有公开，在此不再赘述。(4)冻存以二甲亚砜(DMSD)为保护剂将微囊化后的ACA或APA微囊肾上腺髓质细胞置于液氮中冻存，冻存液由室温降至液氮温度的降温过程应循序缓慢进行。(5)复温移植前，将冻存的微囊肾上腺髓质细胞在37℃的温度下复苏。试验表明，上述ACA或APA微囊肾上腺髓质细胞的存活率高并保有儿茶酚胺分泌功能。临床移植表明，上述ACA或APA微囊肾上腺髓质细胞对晚期恶性肿瘤疼痛有明显的镇痛作用。治疗34例晚期恶性肿瘤疼痛患者的VAS评分，移植前为8.86±0.94，移植后三天为2.36±1.81；移植后有13人停用吗啡类药物(占38％)，16人吗啡类药物用量减少(占47％)，5人吗啡类药物用量无明显变化(占15％)；移植后3个月仍生存的16名患者中，8人吗啡类药物用量仍处于减少状态，另8人无需应用吗啡类药物，移植后5个月仍生存的1名患者仍未使用吗啡类药物。综上所述可知，本专利技术治疗恶性肿瘤疼痛的微囊肾上腺髓质细胞存活率高且保有儿茶酚胺分泌功能，移植到晚期恶性肿瘤疼痛患者的珠网膜下腔时有明显的镇痛作用和免疫隔离效果。因此，本专利技术治疗恶性肿瘤疼痛的微囊肾上腺髓质细胞特别适用于临床治疗晚期恶性肿瘤疼痛。权利要求1.一种治疗恶性肿瘤疼痛的微囊肾上腺髓质细胞，其特征在于由ACA或APA微囊包埋人或动物的肾上腺髓质细胞形成，其微囊截留分子量为68-97.4KD。2.根据权利要求1所述的治疗恶性肿瘤的微囊肾上腺髓质细胞，其特征在于所述微囊直径为250-500μm，包囊量为(1-8)×102，微囊壁厚为33.1±3.5μm，微囊网孔直径为0.75±0.62μm。3.一种权利要求1所述的治疗恶性肿瘤的微囊肾上腺髓质细胞的制备方法，其特征在于包括分离、培养、微囊化、冻存和复温5个步骤，即首先从人或动物的肾上腺体中分离出肾上腺髓质细胞并在培养液中短期培养，然后用ACA微囊或APA微囊包埋形成ACA或APA微囊肾上腺髓质细胞并利用液氮冻存，移植前在37℃的温度下使冻存的微囊肾上腺髓质细胞复苏。4.根据权利要求3所述的治疗恶性肿瘤疼痛的微囊肾上腺髓质细胞的制备方法，其特征在于所述分离步骤中利用浓度为0.5-3.0mg/ml的胶原酶溶液消化并分离人或动物的肾上腺体中的肾上腺髓质细胞。5.根据权利要求3所述的治疗恶性肿瘤疼痛的微囊肾上腺髓质细胞的制备方法，其特征在于所述培养步骤中以MEM为培养液，培养时间为24-72小时。6.根据权利要求3所述的治疗恶性肿瘤疼痛的微囊肾上腺髓质细胞的制备方法，其特征在于所述冻存步骤中以DMSO作为冻存液保护剂，冻存液由室温循序缓慢地降至液氮温度。全文摘要治疗恶性肿瘤疼痛的微囊肾上腺髓质细胞由ACA微囊或APA微囊包埋人或动物的肾上腺髓质细胞形成，微囊截留分子量为68－97.4KD。治疗恶性肿瘤的微囊肾上腺髓质细胞的制备方法包括分离、培养、微囊化、冻存和复温5个步骤，即首先从人或动物的肾上腺体中分离出肾上腺髓质细胞并在培养液中短期培养，然后利用ACA或APA微囊肾上腺髓质细胞并利用液氮冻存，移植前在37℃温度下复温。本专利技术中治疗恶性肿瘤疼痛的微囊肾上腺髓质细胞存活率高并保有儿茶酚胺分泌功能，移植到人的珠网膜下腔时有明显的镇痛作用并可产生免疫隔离效果，故特别适用于临床治疗恶性肿瘤疼痛。文档编号A61P35/00GK1408437SQ0212969公开日2003年4月9日 申请日期2002年9月16日 优先权日2002年9月16日专利技术者李涛, 杜智, 宋继昌, 方淑昌, 周道标, 孙以鲁, 孙绵方 申请人:天津市第三中心医院本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗恶性肿瘤疼痛的微囊肾上腺髓质细胞，其特征在于由ＡＣＡ或ＡＰＡ微囊包埋人或动物的肾上腺髓质细胞形成，其微囊截留分子量为６８－９７．４ＫＤ。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

【专利技术属性】
技术研发人员：李涛，杜智，宋继昌，方淑昌，周道标，孙以鲁，孙绵方，
申请(专利权)人：天津市第三中心医院，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]