一种续归胶囊治疗骨折的实验方法技术

本发明专利技术公开了一种续归胶囊治疗骨折的实验方法，包括如下步骤：选取雄性大鼠饲养，用0.3％的戊巴比妥钠麻醉大鼠,先采用石膏固定,再用骨折造模支架制造骨折模型；在挠骨中段造骨折模型后,随机分为四组:正常对照组,模型组,骨折挫伤胶囊组,续归胶囊组；灌胃给药并测定各实验分组组数据：给每组样品每天灌胃给药1次，连续治疗4周后，进行X‑线拍照观察；在实验28d时,麻醉大鼠,腹主动脉取血,检测血中谷丙转氨酶、磷酸肌酸激酶、尿素氮的含量；大鼠于28d脱臼处死后,将挠骨皮肉剥离,保留挠骨，将标本处理后切片，采用HE染色方法进行病理形态学染色处理，采用常规SP法进行免疫组织化学染色处理；采用统计学方法进行数据处理。

An experimental method for the treatment of fracture with the capsule of Hui GUI

The invention discloses a method to add experimental capsule in the treatment of fracture, which comprises the following steps: selecting male rats fed with 0.3% pentobarbital anesthetized rats, then fixed with plaster, and then the fracture model bracket fracture model; making the fracture model in middle radius, were randomly divided into four groups: the normal control group, model group, Guzhecuoshang capsules group, Xugui capsule group; intragastric administration and test the data packet group: give each sample daily by gavage 1 times, after 4 weeks of continuous treatment, X line camera observation; in experiment 28d, anesthetized rats abdominal aorta blood determination of blood alanine aminotransferase, creatine kinase, urea nitrogen; rats in 28d were sacrificed by dislocation, radial bone skin peeling, keep scratching bone specimens were treated slices by HE staining method in pathological morphology of dyeing processing, mining Immunohistochemical staining was performed by routine SP method, and data were processed by statistical method.

【技术实现步骤摘要】
一种续归胶囊治疗骨折的实验方法
本专利技术涉及骨折治疗实验
，具体为一种续归胶囊治疗骨折的实验方法。
技术介绍
骨折是临床中一种常见的多发病,其愈合是一个复杂的生理过程,如何促进骨折愈合一直是骨科研究领域一个热点,近年来,有研究表明,参与骨折愈合的各种修复性细胞因子的增殖主要在早期约14d以内完成,相当于中医学对骨折愈合三期分法的早期。此期治疗以活血化瘀为主。中医用于骨折的治疗,在我国具有悠久的历史,并且积累了丰富的经验,清·陈士铎《辨证录·接骨门》指出:“人有跌伤骨折,…内治之法,必须以活血祛瘀为先,血不活则瘀不能去,瘀不去则骨不能接也”。因此,近代把“瘀去﹑新生﹑骨合”作为理论指导进行用药。因此,研究活血化瘀方药对骨折早期修复性因子的增殖和调控作用,对探讨中药骨折愈合的机制有着非常重要的意义。基于上述原因,笔者建立了大鼠挠骨骨折动物模型。研究续归胶囊在治疗骨折愈合过程中的作用,为临床治疗骨折提供了新的的理论依据。
技术实现思路
为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种续归胶囊治疗骨折的实验方法，包括如下步骤：S100、建立右侧挠骨骨折模型：选取雄性大鼠饲养，用0.3％的戊巴比妥钠麻醉大鼠,先采用石膏固定,再用骨折造模支架制造骨折模型；S200、实验分组：在挠骨中段造骨折模型后,随机分为四组:正常对照组,模型组,骨折挫伤胶囊组,续归胶囊组；S300、灌胃给药并测定各实验分组组数据：给每组样品每天灌胃给药1次，连续4周，并在第1天、第14天、第28天进行X线拍照观察；在实验28d时,用浓度为0.3％的戊巴比妥纳麻醉大鼠,腹主动脉取血,检测血中谷丙转氨酶、磷酸肌酸激酶、尿素氮的含量；S400、病理形态学与免疫组织化学染色：大鼠于28d脱臼处死后,将挠骨皮肉剥离,保留挠骨，将标本处理后切片，采用HE染色方法进行病理形态学染色处理，采用常规SP法进行免疫组织化学染色处理；S500、采用统计学方法进行数据处理：数据采用方差分析,以均数±标准差(x±s)表示。作为本专利技术一种优选的技术方案，所述步骤S100中选取雄性大鼠40只,适应性饲养1周,室温18～24℃。作为本专利技术一种优选的技术方案，所述步骤S300中骨折挫伤胶囊和续归胶囊浓度分别为0.32g/ml和0.38g/ml,模型组用蒸馏水代替。作为本专利技术一种优选的技术方案，所述步骤S400中标本用10％中性甲醛固定,5％乙二胺四乙酸(EDTA-2Na)脱钙5周后,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,取骨痂最大直径处,石蜡包埋后,5μm连续切片,每个标本切片3张。作为本专利技术一种优选的技术方案，所述步骤S400的方法具体为：在室温下,以30mg/LH2O25～10min灭活内源性酶，正常山羊血清封闭,采用常规SP法进行免疫组织化学染色，VEGF多克隆抗体于37℃孵1h生物素化二抗及SP复合物依次作用30min,各步骤间采用TBS漂洗,二氨基联苯胺法显色,阳性为棕色,阴性对照以TBS代替一抗。作为本专利技术一种优选的技术方案，所述步骤S400中采用免疫组织化学观察方法:显微镜下放大20倍随即选取5个视野,计算每个视野内阳性标记数。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术的试验方法有效地反映了续归胶囊治疗骨折对骨折早期,具有活血化瘀,抗炎,消肿,镇痛并无不良反应；提高骨痂愈合程度和质量,促进骨折愈合。附图说明图1为本专利技术流程示意图；图2至图7为本专利技术续归胶囊对大鼠骨折愈合的影像学观察示意图；图8至图11为本专利技术续归胶囊对大鼠骨折愈合促进作用的病理形态学观察示意图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1如图1所示，本专利技术提供一种技术方案：一种续归胶囊治疗骨折的实验方法，包括如下步骤：步骤S100、建立右侧挠骨骨折模型：选取雄性大鼠40只,适应性饲养1周,室温18～24℃。用0.3％的戊巴比妥钠麻醉大鼠,为防止骨折断段移位,先采用石膏固定,再用骨折造模支架制造骨折模型；步骤S200、实验分组：在挠骨中段造骨折模型后,随机分为四组:正常对照组,模型组,骨折挫伤胶囊组,续归胶囊组；步骤S300、灌胃给药并测定各实验分组组数据：给每组样品每天灌胃给药1次,连续4周,骨折挫伤胶囊和续归胶囊浓度分别为0.32g/ml和0.38g/ml,模型组用蒸馏水代替。并在第1天、第14天、第28天进行X-线拍照观察。在实验28d时,用浓度为0.3％的戊巴比妥纳麻醉大鼠,腹主动脉取血,检测血中谷丙转氨酶、磷酸肌酸激酶、尿素氮的含量；步骤S400、病理形态学与免疫组织化学染色：大鼠于28d脱臼处死后,将挠骨皮肉剥离,保留挠骨。标本用10％中性甲醛固定,5％乙二胺四乙酸(EDTA-2Na)脱钙5周后,梯度乙醇脱水,二甲苯透明,取骨痂最大直径处,石蜡包埋后,5μm连续切片,每个标本切片3张。HE染色,常规苏木精-伊红染色；免疫组织化学染色:石蜡切片常规脱蜡至水。在室温下,以30mg/LH2O25～10min灭活内源性酶。正常山羊血清封闭,采用常规SP法进行免疫组织化学染色。VEGF多克隆抗体于37℃孵1h生物素化二抗及SP复合物依次作用30min(室温下),各步骤间采用TBS漂洗,二氨基联苯胺法显色,阳性为棕色,阴性对照以TBS代替一抗。免疫组织化学观察方法:显微镜下放大20倍随即选取5个视野,计算每个视野内阳性标记数；步骤S500、采用统计学方法进行数据处理：数据采用方差分析,以均数±标准差(x±s)表示。结果：如图2至图7，续归胶囊对大鼠骨折愈合的影像学观察:X-线影像结果显示:在治疗第14天,模型组骨折线清晰可见,断端周围有少量梭形骨痂形成；骨折挫伤胶囊组与续归胶囊组断端骨折线模糊,周围可见大量梭形骨痂；骨折线模糊,断端周围有大量梭形骨痂形成。第28天,模型组骨折线模糊,断端周围可见梭形骨痂；骨折挫伤胶囊组骨折线隐约可见,断端周围有大量梭形骨痂形成；续归胶囊组骨折线消失,可见大量骨痂,骨皮质连续。续归胶囊对骨折动物模型血生化的影响:实验结果表明:续归胶囊在治疗大鼠骨折28d后,续归胶囊组谷丙转氨酶、磷酸肌酸激酶及尿素氮的含量与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05),研究显示续归胶囊在治疗期间对动物肝、肾均无不良反应。表1续归胶囊对骨折动物模型血生化的影响(mmol/L,n＝10,x±s)注:与模型组比较:①P>0.05表2续归胶囊在骨折愈合中对VEGF的表达的影响(n＝10,x±s)注:与模型组比较:①P<0.05续归胶囊对VEGF表达的影响:研究结果显示:骨折挫伤胶囊组与续归胶囊组的VEGF的表达水平在骨折愈合14d时与模型组比较,差异有统计学意义﹙P<0.05)；骨折挫伤胶囊组与续归胶囊组的VEGF的表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)；而骨折愈合第28天时VEGF的表达水平各组之间比较未见明显差异,提示给药组在治疗第14天时可能促进VEGF的合成和分泌,并有促进软骨细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种续归胶囊治疗骨折的实验方法，其特征在于：包括如下步骤：S100、建立右侧挠骨骨折模型：选取雄性大鼠饲养，用0.3％的戊巴比妥钠麻醉大鼠,先采用石膏固定,再用骨折造模支架制造骨折模型；S200、实验分组：在挠骨中段造骨折模型后,随机分为四组:正常对照组,模型组,骨折挫伤胶囊组,续归胶囊组；S300、灌胃给药并测定各实验分组组数据：给每组样品每天灌胃给药1次，连续4周，并在第1天、第14天、第28天进行X‑线拍照观察；在实验28d时,用浓度为0.3％的戊巴比妥纳麻醉大鼠,腹主动脉取血,检测血中谷丙转氨酶、磷酸肌酸激酶、尿素氮的含量；S400、病理形态学与免疫组织化学染色：大鼠于28d脱臼处死后,将挠骨皮肉剥离,保留挠骨，将标本处理后切片，采用HE染色方法进行病理形态学染色处理，采用常规SP法进行免疫组织化学染色处理；S500、采用统计学方法进行数据处理：数据采用方差分析,以均数±标准差(x±s)表示。

【技术特征摘要】
1.一种续归胶囊治疗骨折的实验方法，其特征在于：包括如下步骤：S100、建立右侧挠骨骨折模型：选取雄性大鼠饲养，用0.3％的戊巴比妥钠麻醉大鼠,先采用石膏固定,再用骨折造模支架制造骨折模型；S200、实验分组：在挠骨中段造骨折模型后,随机分为四组:正常对照组,模型组,骨折挫伤胶囊组,续归胶囊组；S300、灌胃给药并测定各实验分组组数据：给每组样品每天灌胃给药1次，连续4周，并在第1天、第14天、第28天进行X-线拍照观察；在实验28d时,用浓度为0.3％的戊巴比妥纳麻醉大鼠,腹主动脉取血,检测血中谷丙转氨酶、磷酸肌酸激酶、尿素氮的含量；S400、病理形态学与免疫组织化学染色：大鼠于28d脱臼处死后,将挠骨皮肉剥离,保留挠骨，将标本处理后切片，采用HE染色方法进行病理形态学染色处理，采用常规SP法进行免疫组织化学染色处理；S500、采用统计学方法进行数据处理：数据采用方差分析,以均数±标准差(x±s)表示。2.根据权利要求1所述的一种续归胶囊治疗骨折的实验方法，其特征在于：所述步骤S100中选取雄性大鼠40只,适应性饲养1周,室温18～24℃。3.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：周庆伟，
申请(专利权)人：周庆伟，
类型：发明
国别省市：吉林,22