一种垂花蕙兰的组培快繁方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种垂花蕙兰的组培快繁方法。该方法包括如下步骤，（1）垂花蕙兰原球茎的诱导形成：培养基质为40%松树皮+60%培养基，培养基为1/2MS基本培养基；（2）垂花蕙兰原球茎的增殖培养：培养基质为40%松树皮+60%培养基，培养基为1/2MS+6-BA1.0～2.0mg/L+NAA0.3～0.8mg/L+KT0.3～0.8mg/L+50g/L?CW；（3）垂花蕙兰原球茎分化和壮苗生根：培养基质为40%松树皮+60%培养基，培养基为1/2MS+6-BA0.5～1.2mg/L+NAA0.1～0.3mg/L+100g/L?PJ；（4）垂花蕙兰试管苗的驯化和移栽。本发明专利技术建立了一个低廉高效的垂花蕙兰组培快繁体系。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体涉及。
技术介绍
兰花的经济价值很高，其中多数种是著名观赏花卉和名贵药用植物；垂花蕙兰在国内面世后，更显王者气象，连续多年在广州花王评选中当选为花王。目前国内外除育种研究外，大多数商业化兰花繁殖均采用组织培养的方法进行。兰花的组织培养自20世纪60年代发展至今，已得到了长足的发展，建立了较为完善的技术体系，但较高的培养基成本和较长的组培周期极大地影响了兰花组培苗的利润空间。树皮是加工木材时产生的有机废弃物，来源广泛，成本较低。目前国内外一些兰花如大花蕙兰和铁皮石斛等的栽培主要以松树皮为基质,树皮基质的特点是重量轻、有机质含量高、保水性较好、透气性强和具有较高的阳离子交换量，树皮还可提供植物生长所需的微量元素。陈卿然等(2013)报道发酵处理后的松树皮更有利于大花蕙兰的栽培，因为新鲜的松树皮中有较多的酚类物质和较高的C/N比。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供，以建立一个低廉高效的垂花蕙兰组培快繁技术体系。本专利技术解决所述技术问题的方案是:，包括如下步骤，(1)垂花蕙兰原球茎的诱导形成:培养基质为40%松树皮+60%培养基；其中培养基为1/2MS基本培养基，白糖30g/L，琼脂5~8g/L，pH5.6 ;培养基质在121°C、1.1 kg/cm2下灭菌ISmin ;剖开消毒好的蒴果，把种子撒到无菌水中，摇匀，然后接种至培养基质上；培养温度为25±2°C，光照强度为1500~2000Lx，光暗周期比为12h:12h ；(2)垂花蕙兰原球茎的增殖培养:培养基质为40%松树皮+60%培养基；培养基为 1/2MS+6-BA1.0 ~2.0mg/L+NAA0.3 ~0.8mg/L+KT0.3 ~0.8mg/L+50g/L CW (椰乳)；1/2MS为基本培养基，白糖20g/L，琼脂5~8g/L，pH5.6 ;培养基质在121°C、1.1 kg/cm2下灭菌ISmin ;取已诱导出的原球茎，接种于增殖培养基上；培养温度为25±2°C，光照强度为1500~2000Lx，光暗周期比为12h:12h ；(3)垂花蕙兰原球茎分化和壮苗生根:培养基质为40%松树皮+60%培养基；培养基为 1/2MS+6-BA0.5 ~1.2mg/L+NAA0.1 ~0.3mg/L+100g/L PJ (马铃薯汁)；1/2MS 为基本培养基，白糖20g/L，琼脂5~8g/L，pH5.6 ;培养基质在121°C、1.1 kg/cm2下灭菌18min ；将增殖培养的原球茎接种于分化和壮苗生根培养基上；培养温度为25±2°C，光照强度为1500~2000Lx，光暗周期比为12h:12h ；(4)垂花蕙兰试管苗的驯化和移栽:将垂花蕙兰生根试管苗从培养室移至塑料大棚放置3~5d后，去瓶盖炼苗3~5d，然后从瓶内取出垂花蕙兰幼苗，用水轻轻洗去培养基，将待栽的垂花蕙兰幼苗根部用0.1%多菌灵处理IOs后，将幼苗移栽入穴盘中的栽培基质内，覆膜保湿5~7d，其间每天通风透气5~15min两次，视光照强度适当加盖遮阳网，一周后完全揭除塑料薄膜小拱棚，喷施1000倍液的甲基托布津，此后进行正常的栽培管理。作为改进，所述步骤(1)中蒴果的消毒方法为:取未开裂的垂花蕙兰蒴果，先用70%~75%乙醇处理I~1.5min后，再蘸95%乙醇在酒精灯火焰上灼烧2~3次。作为改进，所述步骤(4)中栽培基质由松树皮和珍珠岩按体积比1:1配制而成。本专利技术在垂花蕙兰原球茎的诱导形成、原球茎增殖、原球茎分化和生根壮苗阶段的培养基中添加了 40%松树皮，而现有研究中松树皮一般只在组培苗的驯化移栽过程中使用；培养基质经高温高压灭菌、冷凝后，松树皮沉于底部，培养基位于上部，大大节约了培养基的用量，而且实验发现培养效果优于普通的培养基；原球茎增殖后使用一次性成苗技术进行原球茎分化和壮苗生根，简化了生产程序，缩短了成苗时间；驯化移栽阶段利用50%松树皮+50%珍珠岩为基质对垂花蕙兰组培苗进行假植炼苗，移栽成活率高达98%，建立了低廉高效的垂花蕙兰组培快繁技术体系。该体系与常规兰花组培方法相比，可缩短周期时长25%，节约成本35%，适用于工厂化生产。【具体实施方式】实施例1，包括如下步骤:(I)垂花蕙兰原球莖的诱导形成:培养基质为40%松树皮+60%培养基；培养基为1/2MS基本培养基，白糖30g/L，琼脂5~8g/L，pH5.6 ;培养基质在121。。、1.1kg/cm2下灭菌18min。取未开裂的垂花蕙兰蒴果,先用70%~75%乙醇处理I~1.5min后,再蘸95%乙醇在酒精灯火焰上灼烧2~3次；剖开消毒好的蒴果，把种子撒到无菌水中，摇匀，再接种至培养基质上；培养温度为25±2°C，光照强度为1500~2000Lx，光暗周期比为12h:12h。培养40d后，即可诱导形成绿色的原球茎。(2)垂花蕙兰原球茎的增殖培养:培养基质为40%松树皮+60%培养基；培养基为1/2MS+6-BA1.0 ~2.0mg/L+NAA0.3 ~0.8mg/L+KT0.3 ~0.8mg/L+50g/L CW (椰乳)；1/2MS为基本培养基，白糖20g/L，琼脂5~8g/L，pH5.6 ;培养基质在121°C、1.1kg/cm2下灭菌18min。取已诱导出的原球莖,接种于增殖培养基上培养；培养温度为25±2°C,光照强度为1500~2000Lx，光暗周期比为12h:12h。40d后，增殖系数可达12以上。(3)垂花蕙兰原球茎分化和壮苗生根:培养基质为40%松树皮+60%培养基；培养基为 1/2MS+6-BA0.5 ~1.2mg/L+NAA0.1 ~0.3mg/L+100g/L PJ(马铃薯汁)；1/2MS 为基本培养基，白糖20g/L，琼脂5~8g/L，pH5.6 ;培养基质在121。。、1.1kg/cm2下灭菌18min。将增殖培养的原球茎接种于分化和壮苗生根培养基上；培养温度为25±2°C，光照强度为1500~2000Lx，光暗周期比为12h:12h。60d后，95%原球茎已分化出芽，芽基部长出根，SP可长成完整植株，达到移栽标准。(4)垂花蕙兰试管苗的驯化和移栽:将垂花蕙兰生根试管苗从培养室移至塑料大棚放置3~5d后，去瓶盖炼苗3~5d，然后从瓶内取出垂花蕙兰幼苗，用水轻轻洗去培养基，将待栽的垂花蕙兰幼苗根部用0.1%多菌灵处理IOs后，将幼苗移栽入穴盘中的栽培基\质内，栽培基质由松树皮和珍珠岩按体积比1:1配制而成，覆膜保湿5~7d，其间每天通风透气5~15min两次，视光照强度适当加盖遮阳网，一周后完全揭除塑料薄膜小拱棚，喷施1000倍液的甲基托布津，此后进行正常的栽培管理。30d后，垂花蕙兰试管苗的移栽成活率达 98%。组培苗是垂花蕙兰规模化栽培的主要种苗来源。本专利技术通过不断的探索实验，形成了一套价廉而高效的垂花蕙兰组织培养繁殖技术体系。通过在离体培养基中使用成本较低的有机废弃物松树皮，克服了现有植物组培快繁中，由于使用较多的培养基而使组培苗价格居高不下的问题；专利技术中使用的一次性成苗技术简化了生产程序，缩短了成苗时间，提高了生产效率，进一步降低了垂花蕙兰组培苗成本。本专利技术在原球茎的诱导形成、原球茎增殖、原球茎分化和生根壮苗的培养基中使本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种垂花蕙兰的组培快繁方法，其特征在于：包括如下步骤，（1）垂花蕙兰原球茎的诱导形成：培养基质为40%松树皮+60%培养基；其中培养基为1/2MS基本培养基，白糖30g/L，琼脂5～8g/L，pH5.6；培养基质在121℃、1.1kg/cm2下灭菌18min；剖开消毒好的蒴果，把种子撒到无菌水中，摇匀，然后接种至培养基质上；培养温度为25±2℃，光照强度为1500～2000Lx，光暗周期比为12h:12h；（2）垂花蕙兰原球茎的增殖培养：培养基质为40%松树皮+60%培养基；培养基为1/2MS+6?BA1.0～2.0mg/L+NAA0.3～0.8mg/L+KT0.3～0.8mg/L+50g/L?CW(椰乳)；1/2MS为基本培养基，白糖20g/L，琼脂5～8g/L，pH5.6；培养基质在121℃、1.1kg/cm2下灭菌18min；取已诱导出的原球茎，接种于增殖培养基上；培养温度为25±2℃，光照强度为1500～2000Lx，光暗周期比为12h:12h；（3）垂花蕙兰原球茎分化和壮苗生根：培养基质为40%松树皮+60%培养基；培养基为1/2MS+6?BA0.5～1.2mg/L+NAA0.1～0.3mg/L+100g/L?PJ(马铃薯汁)；1/2MS为基本培养基，白糖20g/L，琼脂5～8g/L，pH5.6；培养基质在121℃、1.1kg/cm2下灭菌18min；将增殖培养的原球茎接种于分化和壮苗生根培养基上；培养温度为25±2℃，光照强度为1500～2000Lx，光暗周期比为12h:12h；（4）垂花蕙兰试管苗的驯化和移栽：将垂花蕙兰生根试管苗从培养室移至塑料大棚放置3～5d后，去瓶盖炼苗3～5d，然后从瓶内取出垂花蕙兰幼苗，用水轻轻洗去培养基，将待栽的垂花蕙兰幼苗根 部用0.1%多菌灵处理10s后，将幼苗移栽入穴盘中的栽培基质内，覆膜保湿5～7d，其间每天通风透气5～15min两次，视光照强度适当加盖遮阳网，一周后完全揭除塑料薄膜小拱棚，喷施1000倍液的甲基托布津，此后进行正常的栽培管理。...

【技术特征摘要】
1.一种垂花蕙兰的组培快繁方法，其特征在于:包括如下步骤， (1)垂花蕙兰原球茎的诱导形成:培养基质为40%松树皮+60%培养基；其中培养基为1/2MS基本培养基，白糖30g/L，琼脂5~8g/L，pH5.6 ;培养基质在121。。、1.1 kg/cm2下灭菌ISmin ;剖开消毒好的蒴果，把种子撒到无菌水中，摇匀，然后接种至培养基质上；培养温度为25±2°C，光照强度为1500~2000Lx，光暗周期比为12h:12h ； (2)垂花蕙兰原球茎的增殖培养:培养基质为40%松树皮+60%培养基；培养基为1/2MS+6-BA1.0 ~2.0mg/L+NAA0.3 ~0.8mg/L+KT0.3 ~0.8mg/L+50g/L CW (椰乳)；1/2MS为基本培养基，白糖20g/L，琼脂5~8g/L，pH5.6 ;培养基质在121°C、1.1 kg/cm2下灭菌ISmin ;取已诱导出的原球茎，接种于增殖培养基上；培养温度为25±2°C，光照强度为1500~2000Lx，光暗周期比为12h:12h ； (3)垂花蕙兰原球茎分化和壮苗生根:培养基质为40%松树皮+60%培养基；培养基为1/2MS+6-BA0.5 ~1.2mg/L+NAA0.1 ~0.3m...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈建中，孙庆俊，张海洋，李百健，
申请(专利权)人：陈建中，
类型：发明
国别省市：