金黄壳色三角帆蚌的培育方法技术

本发明专利技术涉及一种金黄壳色三角帆蚌的培育方法，特征是，包括以下步骤：（1）选择4～6三角帆蚌龄亲蚌；（2）取亲蚌的外套膜边缘组织，提取总RNA、合成单链cDNA，采用引物组合进行SRAP扩增，扩增产物电泳后选出具有金黄壳色特异条带序列的雌雄个体；（3）将选出的雌雄亲蚌建立家系，于流水池中培育；（4）定期检查母本的怀幼情况，发现有成熟钩介幼虫，将成熟的母本选出进行采苗，得到幼蚌；将幼蚌流水池进行培育至壳长1～2cm移入网箱中，网箱吊养于池塘中进行第二阶段幼蚌培育至壳长5～8cm；（5）剔除后代非金黄壳的家系亲蚌，将剩余的亲蚌建立金黄壳色核心繁育种群。本发明专利技术培育后代中金黄壳色的比例可达到99.0%以上，壳色遗传稳定、术后成活率高。

【技术实现步骤摘要】
【专利摘要】本专利技术涉及一种，特征是，包括以下步骤：（1）选择4～6三角帆蚌龄亲蚌；（2）取亲蚌的外套膜边缘组织，提取总RNA、合成单链cDNA，采用引物组合进行SRAP扩增，扩增产物电泳后选出具有金黄壳色特异条带序列的雌雄个体；（3）将选出的雌雄亲蚌建立家系，于流水池中培育；（4）定期检查母本的怀幼情况，发现有成熟钩介幼虫，将成熟的母本选出进行采苗，得到幼蚌；将幼蚌流水池进行培育至壳长1～2cm移入网箱中，网箱吊养于池塘中进行第二阶段幼蚌培育至壳长5～8cm；（5）剔除后代非金黄壳的家系亲蚌，将剩余的亲蚌建立金黄壳色核心繁育种群。本专利技术培育后代中金黄壳色的比例可达到99.0%以上，壳色遗传稳定、术后成活率高。【专利说明】
本专利技术涉及一种金黄壳色三角帆蛘的培育方法，属于水产育种
。
技术介绍
三角帆蛘iHyriopsis cumingii (Lea))隶属于蛘科（Unionidae)珠蛘亚科(Unioninae )帆蛘属iHyriopsi5·),是我国特有种。主要分布于长江流域、淮河流域的湖泊、支流等有微流水的大、中型水体中，在鄱阳湖、洞庭湖、太湖、巢湖和洪泽湖五大淡水湖资源尤为丰富。20世纪70年代，我国三角帆蛘人工繁育取得成功。在随后的几年，三角帆蛘以优良的育珠性能替代裙纹冠蛘(Cristaria plica ia )、背角无齿蛘(Anodon ta woodiana 等，用于淡水珍珠培育，成为我国主要的淡水优质育珠蛘品种，极大地推动了我国淡水珍珠养殖业的发展。目前，世界70%以上的淡水珍珠由我国的三角帆蛘培育而成。三角帆蛘在育珠生产上的大规模应用为我国成为世界淡水珍珠养殖和出口第一大国奠定了坚实的基础。我国淡水珍珠养殖业经过40多年的快速发展，也逐渐暴露出一系列的问题：由于在三角帆蛘苗种繁育过程中，普遍不注重亲蛘的选育，长期多代近亲交配，造成苗种种质退化和混杂，加以高密度的养殖、环境污染等问题使得大规模流行病害频发，珍珠品质下降，造成的直接和间接经济损失巨大，严重阻碍了我国淡水珍珠养殖业的健康可持续发展。目前，我国淡水珍珠生产上无三角帆蛘良种可用。培育出三角帆蛘新品种(系)，提高良种覆盖率和养殖效益是我国淡水珍珠养殖业中迫切需要解决的产业关键技术。国内学者利用多种分子生物学方法，包括RAPD、IST-I、细胞色素酶、微卫星、16SrRNA序列等对三角帆蛘的遗传背景进行分析，为开展三角帆蛘的遗传育种奠定了坚实的基础。近年来应用杂交、群体选育的方法获得了一些有益的结果，但由于三角帆蛘的性成熟周期长，杂交选育进展缓慢。`贝类的壳色是由外套膜组织分泌形成。由于大多数海洋贝类具有丰富多彩的壳色，从二十世纪60年代起，壳色的多态研究受到海洋生物学家普遍关注。近50年的相关研究表明：贝类的壳色作为一个可遗传的质量性状，不仅与它们的生态和行为有关，还与其生长、存活等表型性状有关。不同壳色家系自交、杂交研究结果表明：贝类的壳色表型主要受到单个基因或少数基因控制，并能稳定遗传给下一代。因此，以壳色为辅助选育手段或最终目标的贝类新品种选育受到了众多育种专家的青睐，并取得了丰硕的成果。Wada对日本珍珠蛘贝壳棱柱层颜色选育，大幅度提高了白色选育系产白色珍珠的比例。国内，通过对壳色的选育已经成功选育出了多个贝类新品种（品系)，如生长快、抗病力强的“玛瑙鲍”、高产的“中科红”海湾扇贝、“中国红”皱纹盘鲍品系及“南科珍珠红”马氏珠母等。壳色选育已经成为我国海洋贝类新品种选育最为有效的技术手段之一。相比之下，淡水双壳类的壳色表型简单，往往被忽视，目前相关研究几乎仍为空白。通过壳色定向选育研究可以加快三角帆蛘良种选育进程，促进我国淡水珍珠养殖业的健康可持续发展。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术中存在的不足，提供一种金黄壳色三角帆蛘的培育方法，使该品系的壳色遗传稳定、术后成活率高及培育珍珠光泽好。按照本专利技术提供的技术方案，一种金黄壳色三角帆蛘的培育方法，特征是，包括以下步骤： (1)选择喷水有力、腹部边缘柔软、贝壳完整的三角帆蛘4~6龄亲蛘，并鉴别雌雄； (2)取雌雄亲蛘的外套膜边缘组织50mg，采用柱式动物组织总RNA抽提纯化试剂盒提取总RNA ;采用AMV第一链cDNA合成试剂盒合成单链cDNA ;采用特定引物组合进行SRAP扩增，扩增产物经琼脂糖电泳后在紫外灯下观察，选出具有金黄壳色特异条带序列的雌雄个体，作为金黄壳色三角帆蛘品系繁育亲蛘；所述特定引物的基因序列为：正向引物为gactgcgtacgaattcga,反向引物为 tgagtccaaaccggtcc ； (3)将经步骤（2)选出的雌雄亲蛘建立I雌I雄或I雄多雌的家系，每组家系分别置于相互隔离的流水池中进行培育，流水池面积为I~2 m%水位为15~25 cm,水流流速2~3 m/min ； (4)定期检查各个家系中母本外鳃丝的怀幼情况，发现有成熟钩介幼虫，立即将成熟的母本选出，采用常规方法进行采苗，获得幼蛘；将每个家系的幼蛘分别置于相互隔离的流水池进行培育，水流流速I~4 m/min,幼蛘培育至壳长I~2cm移入网眼直径为2. 5~3cm的网箱中，放养密度为200~300只/网箱，网箱底部铺设一层塑料薄膜，在网箱底部放置2~3cm厚黄泥，网箱吊养于池塘中进行第二阶段幼蛘培育，培育至壳长5~8cm，观察各个家系F1代幼蛘壳色表型，随 机检查1000只F1代幼蛘壳色，若金黄壳色比例大于99%，表明亲蛘壳色基因型选择正确； (5)剔除后代非金黄壳的家 系亲蛘，将通过步骤（4)验证的亲蛘建立金黄壳色核心繁育群体，作为金黄壳色三角帆蛘繁育的亲蛘，采用步骤（4)的方式进行繁育，得到金黄壳色三角帆蛘。所述步骤（2)中，SRAP扩增的体系包括：合成得到的单链cDNA 3μ?、浓度为2. 5mmol/L的脱氧核糖核苷三磷酸（dNTP)l. 5PL、10XTaq DNA聚合酶缓冲液2. 5 μ?、浓度为25mmol/L的MgCl2 2.5 KL、正向引物和反向引物各O. 5PL、Taq DNA聚合酶O. 2 KL、无菌重蒸水14. 3 μ? ;扩增过程为：将体系在94°C变性5 min ;然后94°C变性45 s、38°C退火45 S、72°C延伸I min,进行5次循环；再94<€变性I min、50°C退火I min、72°C延伸I min,进行30次循环；最后72°C延伸7 min。所述步骤（2)中琼脂糖电泳的电泳胶配制过程：每100ml琼脂糖凝胶加入3 μ I浓度为10mg/ml的溴化乙锭溶液；电泳条件：120~150V，时间为15~25min。所述步骤（4)中，幼蛘壳长小于2mm时,水流流速为I~2 m/min ;幼蛘壳长大于2mm时，水流流速为2~4 m/min。所述金黄壳色特异条带序列为：TGAGTCCAAACCGGAGCACGTCGTAGTTTGGCATACAACATCGTAGTGTAGGCATACTACTTCTTAGTACGTATACCACATCTTAGTGTAGACATAGCACATTGTAGTGAAATTCGAGCATACGGCAGTATAATCATAGTACTTCGTAGTGTAGGCATAGCACACCGT本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种金黄壳色三角帆蚌的培育方法，其特征是，包括以下步骤：（1）选择喷水有力、腹部边缘柔软、贝壳完整的三角帆蚌4～6龄亲蚌，并鉴别雌雄；（2）取雌雄亲蚌的外套膜边缘组织50mg，采用柱式动物组织总RNA抽提纯化试剂盒提取总RNA；采用AMV第一链cDNA合成试剂盒合成单链cDNA；采用特定引物组合进行SRAP扩增，扩增产物经琼脂糖电泳后在紫外灯下观察，选出具有金黄壳色特异条带序列的雌雄个体，作为金黄壳色三角帆蚌品系繁育亲蚌；所述特定引物的基因序列为：正向引物为gactgcgtacgaattcga，反向引物为tgagtccaaaccggtcc；（3）将经步骤（2）选出的雌雄亲蚌建立1雌1雄或1雄多雌的家系，每组家系分别置于相互隔离的流水池中进行培育，流水池面积为1～2㎡，水位为15～25?cm，水流流速2～3?m/min；（4）定期检查各个家系中母本外鳃丝的怀幼情况，发现有成熟钩介幼虫，立即将成熟的母本选出，采用常规方法进行采苗，获得幼蚌；将每个家系的幼蚌分别置于相互隔离的流水池进行培育，水流流速1～4?m/min，幼蚌培育至壳长1～2cm移入网眼直径为2.5～3cm的网箱中，放养密度为200～300只/网箱，网箱底部铺设一层塑料薄膜，在网箱底部放置2～3cm厚黄泥，网箱吊养于池塘中进行第二阶段幼蚌培育，培育至壳长5～8cm，观察各个家系F1代幼蚌壳色表型，随机检查1000只F1代幼蚌壳色，若金黄壳色比例大于99%，表明亲蚌壳色基因型选择正确；（5）剔除后代非金黄壳的家系亲蚌，将通过步骤（4）验证的亲蚌建立金黄壳色核心繁育群体，作为金黄壳色三角帆蚌繁育的亲蚌，采用步骤（4）的方式进行繁育，得到金黄壳色三角帆蚌。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：闻海波，顾若波，曹哲明，华丹，徐跑，金武，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院淡水渔业研究中心，
类型：发明
国别省市：