一种精制鹿衔草多糖的方法技术

本发明专利技术涉及一种精制鹿衔草多糖的方法，可有效解决从鹿衔草中提取鹿衔草多糖，并对鹿衔草多糖进行纯化的问题，方法是，将鹿衔草药材粉与水混合均匀成鹿衔草药材粉水溶液，浸泡，加入活化果胶酶，调pH3.5～4.5，水浴酶解，调pH至中性，水浴提取，滤液浓缩，再加乙醇至含醇量为85%，冷藏静置，离心，弃去上清液，对沉淀物依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤，干燥，得鹿衔草粗多糖，鹿衔草粗多糖加水，上样于HPD-600型大孔吸附树脂柱，以水洗脱，合并洗脱液，浓缩，加乙醇至含醇量达到85%，静置，离心得多糖沉淀，干燥，本发明专利技术方法采用酶法提取和树脂法纯化、精制，脱色脱蛋白效率较高、树脂经再生可以重复利用、工艺简单可行等优点，易于进行工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药领域，特别是中药活性成分的多糖以及对多糖脱蛋白、脱色纯化的。
技术介绍
多糖是一类广泛存在于药材中的有效成分，多项研究证实:该类成分对于调节机体各项生理指标都有无可替代的作用，尤其在提高机体免疫力、抗衰老、抗病毒、抗辐射、抗肿瘤、抗氧化方面具有显著效果，近年来，多糖各种药用的报道不断，可见其对于药材活性的重要性。鹿衔草系鹿蹄草科植物鹿蹄草calUantha H.如i/ms)或普通鹿蹄草iPyrola decorate H.Andres)的干燥全草,始出于《滇南本草》，目前,对于中药鹿衔草的研究仍局限于其中黄酮类、萘醌类、鞣质类成分等，而对于其所含丰富的多糖类成分的各项研究均鲜见报道，本实验组实验结果表明，鹿衔草多糖类成分具有很好的增强机体免疫力的作用，可显著促进免疫抑制小鼠溶血素和溶血空斑的形成，显著提高免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬指数和吞噬百分率。但如何对鹿衔草多糖提取、纯化，获得精制鹿衔草多糖，以提高和开拓鹿衔草的应用价值，至今未见有公开报导。
技术实现思路
针对上述情况，为克服现有技术之不足，本专利技术之目的就是提供，可有效解决从鹿衔草中提取鹿衔草多糖，并实现鹿衔草多糖进行纯化，达到精制，提高鹿衔草多糖的应用价值问题。本专利技术解决的技术方案是，包括以下步骤: (1)将鹿衔草粉碎，过二号药典筛成鹿衔草药材粉，将鹿衔草药材粉与水混合均匀成鹿衔草药材粉水溶液，鹿衔草药材粉与水的重量比为1: 10 30，25 50°C浸泡半小时，冷却至室温，加入鹿衔草药材粉重量1% 5%的活化果胶酶，并用盐酸或氢氧化钠调节鹿衔草药材粉水溶液至PH3.5 4.5，在30 60°C水浴酶解I 4h，用盐酸或氢氧化钠调节溶液pH至中性，在70 100°C水浴提取I 3次，每次I 3h，过滤，合并滤液；所述的活化果胶酶是将果胶酶加水溶解，在40°C水浴中放置lOmin，得活化果胶酶； (2)将滤液浓缩至料液比为1:1 2 (原料质量:溶液体积)的多糖浓缩液；多糖浓缩液边搅拌边缓慢加入体积浓度为95%的乙醇，至多糖浓缩液含醇量为体积浓度85%后密封，于4°C冷藏静置12 24h后，离心，弃去上清液，得沉淀物； (3)对所得沉淀物依次用沉淀物重量50 100倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤I 3次，达到除去部分杂质的效果，洗涤后的沉淀物经干燥，得粉末状浅灰色的鹿衔草粗多糖； (4)将每0.2 1.5g鹿衔草粗多糖加水，配置成25ml溶液，得多糖样品溶液； (5)每25ml多糖样品溶液上样于HPD-600型大孔吸附树脂柱，并以200 600ml水洗脱，流速为0.3 1.5ml/min，合并洗脱液，浓缩至原体积的1/2-2/3 ;再加体积浓度为95%的乙醇至含醇量达到85%，静置12 24h，离心得多糖沉淀，该沉淀干燥后即为灰白色、粉末状的鹿衔草精制多糖，得率为19.18% 22.43%，经苯酚-硫酸法(常规测定方法，是公知技术)测定多糖质量含量为72.36% 78.24%。本专利技术方法采用酶法提取和树脂法纯化、精制，具有实验条件温和，脱色脱蛋白效率较高、树脂经再生可以重复利用、工艺简单可行等优点，易于进行工业化生产。具体实施例方式以下结合实施例对本专利技术的具体实施方式作详细说明。实施例1 本专利技术在具体实施中，是由以下步骤实现: (1)将IOg鹿衔草粉碎，过二号药典筛成鹿衔草药材粉，将鹿衔草药材粉与水混合均匀成鹿衔草药材粉水溶液，鹿衔草药材粉与水的重量比为1: 30，50°C浸泡半小时，冷却至室温，加入0.2g活化 果胶酶，并用盐酸或氢氧化钠调节鹿衔草药材粉水溶液至pH4.5，在50°C水浴酶解3h，用盐酸 或氢氧化钠调节溶液pH至中性，在100°C水浴提取3h，过滤，合并滤液； (2)将滤液浓缩至料液比为1: 2的多糖浓缩液；多糖浓缩液边搅拌边缓慢加入体积浓度为95%的乙醇，至多糖浓缩液含醇量为体积浓度85%后密封，于4°C冷藏静置12h后，离心，弃去上清液，得沉淀物； (3)对所得沉淀物依次用沉淀物重量50倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤2次，达到除去部分杂质的效果，洗涤后的沉淀物经干燥，得粉末状浅灰色的鹿衔草粗多糖； (4)将每0.4g鹿衔草粗多糖加水，配置成25ml溶液，得多糖样品溶液； (5)每25ml多糖样品溶液上样于HPD-600型大孔吸附树脂柱，并以500ml水洗脱，流速为1.5ml/min，合并洗脱液，浓缩至原体积的1/2 ;再加体积浓度为95%的乙醇至含醇量达到85%，静置12h，离心得多糖沉淀，该沉淀干燥后即为灰白色、粉末状的鹿衔草精制多糖。实施例2 本专利技术在具体实施中，也可由以下步骤实现: (1)将IOg鹿衔草粉碎，过二号药典筛成鹿衔草药材粉，将鹿衔草药材粉与水混合均匀成鹿衔草药材粉水溶液，鹿衔草药材粉与水的重量比为1: 20，30°C浸泡半小时，冷却至室温，加入0.4g活化果胶酶，并用盐酸或氢氧化钠调节鹿衔草药材粉水溶液至PH为4，在30 V水浴酶解4h，用盐酸或氢氧化钠调节溶液pH至中性，在70 V水浴提取3次，每次2h，过滤，合并滤液； (2)将滤液浓缩至料液比为1:1的多糖浓缩液；多糖浓缩液边搅拌边缓慢加入体积浓度为95%的乙醇，至多糖浓缩液含醇量为体积浓度85%后密封，于4°C冷藏静置15h后，离心，弃去上清液，得沉淀物； (3)对所得沉淀物依次用沉淀物重量80倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤3次，达到除去部分杂质的效果，洗涤后的沉淀物经干燥，得粉末状浅灰色的鹿衔草粗多糖； (4)将每0.2g鹿衔草粗多糖加水，配置成25ml溶液，得多糖样品溶液； (5)每25ml多糖样品溶液上样于HPD-600型大孔吸附树脂柱，并以300ml水洗脱，流速为0.5ml/min，合并洗脱液，浓缩至原体积的2/3 ;再加体积浓度为95%的乙醇至含醇量达到85%，静置20h，离心得多糖沉淀，该沉淀干燥后即为灰白色、粉末状的鹿衔草精制多糖。实施例3 本专利技术在具体实施中，还可由以下步骤实现: (1)将IOg鹿衔草粉碎，过二号药典筛成鹿衔草药材粉，将鹿衔草药材粉与水混合均匀成鹿衔草药材粉水溶液，鹿衔草药材粉与水的重量比为1: 10，40°c浸泡半小时，冷却至室温，加入0.5g活化果胶酶，并用盐酸或氢氧化钠调节鹿衔草药材粉水溶液至pH3.5，在60°C水浴酶解lh，用盐酸或氢氧化钠调节溶液pH至中性，在90°C水浴提取2次，每次2h，过滤，合并滤液； (2)将滤液浓缩至料液比为1:1的多糖浓缩液；多糖浓缩液边搅拌边缓慢加入体积浓度为95%的乙醇，至多糖浓缩液含醇量为体积浓度85%后密封，于4°C冷藏静置20h后，离心，弃去上清液，得沉淀物； (3)对所得沉淀物依次用沉淀物重量100倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤I次，达到除去部分杂质的效果，洗涤后的沉淀物经干燥，得粉末状浅灰色的鹿衔草粗多糖； (4)将每1.5g鹿衔草粗多糖加水，配置成25ml溶液，得多糖样品溶液； (5)每25ml多糖样品溶液上样于HPD-600型大孔吸附树脂柱，并以600ml水洗脱，流速为1.0ml/min，合并洗脱液，浓缩至原体积的1/2 ;再加体积浓度为95%的乙醇至含醇量达到85%，静本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种精制鹿衔草多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将鹿衔草粉碎，过二号药典筛成鹿衔草药材粉，将鹿衔草药材粉与水混合均匀成鹿衔草药材粉水溶液，鹿衔草药材粉与水的重量比为1︰10～30，25～50℃浸泡半小时，冷却至室温，加入鹿衔草药材粉重量1%～5%的活化果胶酶，并用盐酸或氢氧化钠调节鹿衔草药材粉水溶液至pH3.5～4.5，在30～60℃水浴酶解1～4h，用盐酸或氢氧化钠调节溶液pH至中性，在70～100℃水浴提取1～3次，每次1～3h，过滤，合并滤液；所述的活化果胶酶是将果胶酶加水溶解，在40℃水浴中放置10min，得活化果胶酶；（2）将滤液浓缩至料液比为1︰1～2的多糖浓缩液；多糖浓缩液边搅拌边缓慢加入体积浓度为95%的乙醇，至多糖浓缩液含醇量为体积浓度85%后密封，于4℃冷藏静置12～24h后，离心，弃去上清液，得沉淀物；（3）对所得沉淀物依次用沉淀物重量50～100倍的无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤1～3次，达到除去部分杂质的效果，洗涤后的沉淀物经干燥，得粉末状浅灰色的鹿衔草粗多糖；（4）将每0.2～1.5g鹿衔草粗多糖加水，配置成25ml溶液，得多糖样品溶液；（5）每25ml多糖样品溶液上样于HPD?600型大孔吸附树脂柱，并以200～600ml水洗脱，流速为0.3～1.5ml/min，合并洗脱液，浓缩至原体积的1/2?2/3；再加体积浓度为95％的乙醇至含醇量达到85%，静置12～24h，离心得多糖沉淀，该沉淀干燥后即为灰白色、粉末状的鹿衔草精制多糖。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：杨云，雷雪，张华锋，陈依，刘炯，张杰，
申请(专利权)人：河南中医学院，
类型：发明
国别省市：