整体可视化人肺腺癌H1650裸鼠模型及其建立与应用制造技术
【技术实现步骤摘要】
整体可视化人肺腺癌H1650裸鼠模型及其建立与应用
本专利技术属于裸鼠模型及其建立与应用领域，特别涉及一种整体可视化人肺腺癌H1650裸鼠模型及其建立与应用。
技术介绍
肺癌是威胁我国人民健康的头号杀手。据卫生部发布的《2010年中国卫生统计年鉴》，我国2009年恶性肿瘤在所有疾病死亡原因中居首位，统计资料显示死亡率排名前十位的恶性肿瘤中，肺癌居首位，为我国的社会发展带来严重的经济负担。近年来，肺癌的治疗和基础研究取得了较大发展，但目前肺癌药物的基础和临床前研究尚欠缺一种能更方便的评估药物疗效的可靠的体内、体外研究平台，这严重制约了肺癌的基础和临床前研究。肺癌动物模型是肺癌研究的重要手段,移植性肺癌模型是目前临床前药物实验最常用的模型。移植型肺癌模型是将人肺癌细胞移植到动物体内传代生长，移植的肿瘤细胞形态学特征、染色体数量、同工酶水平等将保持不变，对临床抗癌药物敏感性也大致相同，移植型肺癌模型建立的常用方法是皮将肺癌细胞或组织块接种于裸鼠或其他免疫缺陷小鼠的皮下（腋部、背部、后肢等）建立肺癌模型。此模型建模简单易行，成瘤率高，易监视肿瘤生长情况，所以常用来作抗癌药...
【技术保护点】
一种整体可视化人肺腺癌H1650裸鼠模型，其特征在于：所述裸鼠模型通过采用基因重组技术和慢病毒感染将萤火虫荧光素酶基因引入人肺腺癌H1650细胞株中，通过亚克隆筛选获得稳定表达荧光素酶的肿瘤克隆细胞株，然后采用重组的H1650细胞接种于免疫缺陷裸鼠构建而成。
【技术特征摘要】
1.一种整体可视化人肺腺癌H1650细胞系的建立方法，包括：(1)设计萤火虫荧光素酶基因特异性引物；使用该特异性引物PCR扩增萤火虫荧光素酶基因并克隆至PCR-Blunt克隆载体中并转化大肠杆菌感受态细胞，质粒抽提后运用基因重组方法将荧光素酶目的基因片段插入慢病毒真核表达载体PRRL-CMV空质粒中并转化大肠杆菌感受态细胞，质粒抽提后进行双酶切和测序证实构建的表达载体的正确性；其中，特异性引物为：上游引物：CCTTCTAGAATGGAAGATGCCAAAAACATTAAG；下游引物：CCTGTCGACTTACACGGCGATCTTGCCGCCCTTC；(2)大肠杆菌扩增荧光素酶慢病毒载体和慢病毒包装质粒，并纯化测定浓度；将荧光素酶慢病毒表达载体与慢病毒包装质粒混合后，用转染试剂共转染293T细胞，以产生含有萤火虫荧光素酶慢病毒颗粒的上清，确定慢病毒颗粒的滴度；以人肺腺癌H1650为母细胞，用上述病毒上清进行感染；进行细胞亚克隆筛选，检测单克隆细胞内的荧光表达情况，筛选出稳定表达荧光素酶报告基因的重组细胞株并进行...
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