一种利用沼渣、沼液固体发酵生产放线菌肥料的方法，它涉及一种生产放线菌肥料的方法。本发明专利技术是要解决现有肥料用放线菌培养方法原料成本高的问题。本发明专利技术的方法为：一、试管培养种子培养：a、配制试管培养基；b、将放线菌接种于试管培养基中进行培养；二、固体孢子种子培养：a、配制种子培养基；b、将培养的放线菌接种于种子培养基中进行培养；三、发酵培养：a、制备发酵原料；b、向灭菌后的发酵原料接种放线菌的孢子，然后进行发酵，即得到放线菌肥料。本发明专利技术中利用沼气发酵废弃物——沼渣、沼液代替原有人工合成培养基作为发酵底物，降低了培养放线菌的成本。本发明专利技术应用于微生物领域。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种生产放线菌肥料的方法。
技术介绍
放线菌是一类与人类关系极为密切而又具有巨大应用价值的资源微生物，不仅在物质循环中起重要作用，而且以丰富的次生代谢产物产生能力而著称，放线菌可代谢产生抗生索、氨基酸、酶制剂、维生素和除草剂等多种重要的生物活性物质。1929年青霉素的发现标志着抗生素时代的到来，随后Waksman发现的链霉素解决了当时结核病这个社会问题而引起广泛关注，并激发了人类对新抗筛选的兴趣。截止2000年发现的微生物来源的新生理活性物质已达16000种，其中有70%以上是由放线菌产生的。放线菌来源的抗生素在临床疾病治疗中发挥着重要作用，临床上使用的抗生素有2/3来源于放线菌；放线菌产生的 抗生素也是农用抗生素的最主要来源，如阿维链霉菌产生的阿维菌素是重要的杀虫和杀蜗齐U、井冈霉素可用于防治水稻纹枯病等。放线菌中的弗兰克氏菌可与非豆科植物共生，且同一种弗兰克氏菌可以侵染不同种属的宿主植物，为自然界的氮素循环和农林业的氮素供应做出了巨大贡献，并有良好的应用前景。自1947年到1997年的50年间在JA上发表的共约4300种新微生物代谢产物产生菌及活性分布情况。因此，放线菌作为一类重要的微生物资源，研究受到了世界各国学者的极大重视。目前已在放线菌研究方面做了大量工作，其中最有成效的当属放线菌来源的生物活性物质的研究、放线菌分类学研究和放线菌遗传学研究等。放线菌分类学研究不仅可以为放盐碱环境中放线菌多相分类及免培养研究线菌资源的开发利用和有效控制有害放线菌提供理论指导，而且可以为研究放线菌的系统演化关系提供材料和依据，丰富生物多样性研究的内容。因而，放线菌分类研究具有理论和实际双重意义。目前对于放线菌的培养普遍使用人工合成培养基，培养基中富含大量营养物质，但原料成本相对较高，应用于农业肥料用放线菌生产过程中提高了生产成本消耗。
技术实现思路
本专利技术是要解决现有肥料用放线菌培养方法原料成本高的问题，提供了本专利技术，是按以下步骤进行的一、试管培养种子培养a、配制试管培养基按质量份数称取淀粉2 2. 5份、硝酸钾O. I O. 2份、磷酸二氢钾O. 03 O. 05份、硫酸镁O. 001 O. 002份、琼脂2 2. 2份与95 96份水混合均匀，然后进行高温灭菌，即得到试管培养基；b、将放线菌接种于试管培养基中，在培养温度为28 32°C的条件下，斜面静置培养48 96h，然后用ImL无菌水洗脱试管斜面培养物后，得到洗脱液；二、固体孢子种子培养c、配制种子培养基将小米与水按质量比为I : (I 2)的比例混合，浸泡20 24h，然后进行高温灭菌，即得到种子培养基；d、将步骤一中的洗脱液接种于种子培养基中，在培养温度为28 32°C的条件下，摇瓶培养72 120h，得到放线菌孢子菌液；三、发酵培养e、发酵原料的制备按质量份数称取沼渣70 90份、麦麸皮10 30份和CaCO3O. 5 2份混合均匀，即得到发酵原料，用沼液调节发酵原料的含水量为40 45%，然后进行高温灭菌；f、将步骤二中的放线菌孢子菌液按接种量为O. 5 5%接种于灭菌后的发酵原料中，然后在发酵温度为28 32°C、发酵原料厚度为10 20cm的条件下进行发酵70 96h，即得到放线菌肥料。本专利技术利用沼气发酵废弃物一沼渣、沼液代替原有人工合成培养基作为发酵底物，降低了培养放线菌的成本，在培养过程中，通过对放线菌培养，使COD含量极高的沼液得以应用，避免了直接排放对环境造成的污染。具体实施例方式具体实施方式一本实施方式的，是按以下步骤进行的一、试管培养种子培养a、配制试管培养基按质量份数称取淀粉2 2. 5份、硝酸钾O. I O. 2份、磷酸二氢钾O. 03 O. 05份、硫酸镁O. 001 O. 002份、琼脂2 2. 2份与95 96份水混合均匀，然后进行高温灭菌，即得到试管培养基；b、将放线菌接种于试管培养基中，在培养温度为28 32°C的条件下,斜面静置培养48 96h,然后用ImL无菌水洗脱试管斜面培养物后，得到洗脱液；二、固体孢子种子培养c、配制种子培养基将小米与水按质量比为I : (I 2)的比例混合，浸泡20 24h，然后进行高温灭菌，即得到种子培养基；d、将步骤一中的洗脱液接种于种子培养基中，在培养温度为28 32°C的条件下，摇瓶培养72 120h，得到放线菌孢子菌液；三、发酵培养e、发酵原料的制备按质量份数称取沼渣70 90份、麦麸皮10 30份和CaCO3O. 5 2份混合均匀，即得到发酵原料，用沼液调节发酵原料的含水量为40 45%，然后进行高温灭菌；f、将步骤二中的放线菌孢子菌液按接种量为O. 5 5%接种于灭菌后的发酵原料中，然后在发酵温度为28 32°C、发酵原料厚度为10 20cm的条件下进行发酵70 96h，即得到放线菌肥料。本实施方式中的接种量是指移入种子液的体积和接种后培养液体积的比例。本实施方式利用沼气发酵废弃物——沼渣、沼液代替原有人工合成培养基作为发酵底物，降低了培养放线菌的成本,在培养过程中，通过对放线菌培养,使COD含量极高的沼液得以应用，避免了直接排放对环境造成的污染。具体实施方式二 本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤一中所述的按质量份数称取淀粉2. 2份、硝酸钾O. 15份、磷酸二氢钾O. 04份、硫酸镁O. 0015份、琼脂2. I份与95. 5份水混合均匀。其他步骤和参数与具体实施方式一相同。具体实施方式三本实施方式与具体实施方式一或二不同的是步骤一中所述的高温灭菌为在温度为120°C的条件下灭菌30min。其他步骤和参数与具体实施方式一或二相同。具体实施方式四本实施方式与具体实施方式一至三之一不同的是步骤二中所述的将小米与水按质量比为I : I. 5的比例混合，浸泡24h。其他步骤和参数与具体实施例方式一至三之一相同。具体实施方式五本实施方式与具体实施方式一至四之一不同的是步骤二中所述的高温灭菌为在温度为120°C的条件下灭菌20min。其他步骤和参数与具体实施方式一至四之一相同。具体实施方式六本实施方式与具体实施方式一至五之一不同的是步骤三中所述的沼渣和沼液的制备方法为高温沼气发酵法，具体方法为按质量份数称取新鲜牛粪40份、水60份混合均匀，厌氧54°C培养14天，培养剩余物即为沼渣和沼液。其他步骤和参数与具体实施方式一至五之一相同。具体实施方式七本实施方式与具体实施方式一至六之一不同的是步骤三中所述的高温灭菌为在温度为120°C的条件下灭菌40min。其他步骤和参数与具体实施方式一至六之一相同。具体实施方式八本实施方式与具体实施方式一至七之一不同的是步骤三中所述的按质量份数称取沼渣80份、麦麸皮20份和CaCO3L 5份混合均匀，即得到发酵原料。其他步骤和参数与具体实施方式一至七之一相同。具体实施方式九本实施方式与具体实施方式一至八之一不同的是步骤三中所述的发酵温度为30°C。其他步骤和参数与具体实施方式一至八之一相同。具体实施方式十本实施方式与具体实施方式一至九之一不同的是步骤三中所述的发酵原料厚度为15cm。其他步骤和参数与具体实施方式一至九之一相同。通过以下试验验证本专利技术的有益效果试验I :本试验，是按以下步骤进行的一、试管培养种子培养a、配制试管培养本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种利用沼渣、沼液固体发酵生产放线菌肥料的方法，其特征在于利用沼渣、沼液固体发酵生产放线菌肥料的方法是按以下步骤进行的：一、试管培养种子培养：a、配制试管培养基：按质量份数称取淀粉2～2.5份、硝酸钾0.1～0.2份、磷酸二氢钾0.03～0.05份、硫酸镁0.001～0.002份、琼脂2～2.2份与95～96份水混合均匀，然后进行高温灭菌，即得到试管培养基；b、将放线菌接种于试管培养基中，在培养温度为28～32℃的条件下，斜面静置培养48～96h，然后用1mL无菌水洗脱试管斜面培养物后，得到洗脱液；二、固体孢子种子培养：c、配制种子培养基：将小米与水按质量比为1∶(1～2)的比例混合，浸泡20～24h，然后进行高温灭菌，即得到种子培养基；d、将步骤一中的洗脱液接种于种子培养基中，在培养温度为28～32℃的条件下，摇瓶培养72～120h，得到放线菌孢子菌液；三、发酵培养：e、发酵原料的制备：按质量份数称取沼渣70～90份、麦麸皮10～30份和CaCO30.5～2份混合均匀，即得到发酵原料，用沼液调节发酵原料的含水量为40～45％，然后进行高温灭菌；f、将步骤二中的放线菌孢子菌液按接种量为0.5～5％接种于灭菌后的发酵原料中，然后在发酵温度为28～32℃、发酵原料厚度为10～20cm的条件下进行发酵70～96h，即得到放线菌肥料。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：谷军，张介驰，原韬，张晓彦，于德水，
申请(专利权)人：黑龙江省科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：
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