斑马鱼用于测试安全物质的安全性的用途和方法技术

本发明专利技术涉及一种斑马鱼用于测试安全物质的安全性的用途和方法。其特征在于方法包含如下步骤：配制胚胎培养液，然后向胚胎培养液中加入待测安全物质，待测安全物质的加入量使得待测物质在培养液中的浓度呈梯次分布，用加入了待测安全物质的胚胎培养液培养斑马鱼胚胎，然后在4-72小时观察记录斑马鱼胚胎发育的畸形率和死亡率，来判断待测安全物质对斑马鱼胚胎发育的毒性。其中胚胎培养液用pH为6.7-8.5的弱碱性水直接配制，胚胎培养液中含有5mM?NaCl、0.17mM?KCl、0.43mM?CaCl2和0.33mM?MgSO4。本发明专利技术使用弱碱性水配制的胚胎培养液使得斑马鱼胚胎能够快速测试待测安全物质的综合毒性，缩短了检测周期。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及毒性检测领域，具体涉及一种斑。
技术介绍
随着自然生产方式的减少，工业化比重逐渐增加，食品原料在生产、贮存、运输、力口工等过程中自觉或不自觉地会引入一些化学物质，这给食品安全带来越来越多的不安全因素。化学物质在食品中的使用历史悠久，在现代食品的生产、加工、贮运和食用等过程中都有化学物质相伴，也正是这些化学物质在食品中的广泛使用，才使得食品工业成为朝阳产业。但是化学物质的使用也给食品的安全性带来了不可忽视的影响，其中包括药物残·留、重金属、食品中的天然毒物质、食品加工、包装、储存对食品安全性的影响。尤其是食品添加剂，为了达到食品满足某些方面的指标，加入了对生物体以及人体安全无法明确定性的物质，这些物质如果在生物体中测试，则测试周期会比较长，加上人体对不安全物质的耐受程度，短期内无法看出某种食品添加剂是否对人体具有隐形的危害。本专利技术通过实验发现，斑马鱼能够对未知安全的物质给出相对准确的安全预期。特别是，本专利技术通过使用特殊的胚胎培养液培养斑马鱼，在培养液中加入待测安全物质后，能够使胚胎对待测安全物质的不良反应在较短的时间内表现出来，大大缩短了检测周期。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种。具体地，本专利技术提供了一种斑马鱼用于测试安全物质的安全性的方法，其特征在于该方法包含如下步骤配制胚胎培养液，然后向胚胎培养液中加入待测安全物质，待测安全物质的加入量使得待测物质在培养液中的浓度呈梯次分布，用加入了待测安全物质的胚胎培养液培养斑马鱼胚胎，然后在4-72小时观察记录斑马鱼胚胎发育的畸形率和死亡率，来判断待测安全物质对斑马鱼胚胎发育的毒性。其中胚胎培养液用PH为6. 7-8. 5的弱碱性水直接配制，胚胎培养液中含有 5mM NaCl、O. 17mM KCl、O. 43mM CaCl2 和 O. 33mM MgSO4。上述方法中，斑马鱼胚胎通过如下方法选择采卵前一天将性成熟的斑马鱼，按雌雄为I : 2的比例放入配缸内并隔开，次日上午9:00自然交配并收集受精卵，用胚胎培养液清洗两次收集得到的受精卵，并去除杂质和坏卵，之后后置于胚胎培养液中，29. 3°C进行控光培养；当2hpf时，在显微镜下挑选来自同一亲本、正常发育比率达85%以上且发育时期一致的斑马鱼胚胎。上述方法中，培养斑马鱼胚胎的方法如下将斑马鱼胚胎用胚胎培养液清洗两次，然后移入24孔板的样孔中，每孔20枚，每孔滴加加入了待测安全物质的胚胎培养液，每孔4ml,随后加盖封闭,置于培养箱中,在29. 3°C培养斑马鱼胚胎。上述方法中，观察记录的时间是培养后第4、12、24、48、72小时，记录畸形率和死亡率。上述方法中，pH为7. 0-7. 8，优选地，pH为7. 2。畸形是指斑马鱼体型与正常的相同培养时间单用胚胎培养液培养的斑马鱼体型 有差异。死亡是指用搅拌棒触碰斑马鱼尾部时斑马鱼没有任何反应。上述方法中，所述的待测安全物质为需要验证其对生物安全性的任何物质，包括有机物或无机物，无论安全物质在水中的溶解度如何，都可以作为本专利技术的上述方法测量的待测安全物质。对于水中溶解度高的物质，直接将其按照浓度梯度溶解于胚胎培养液中，对于水中溶解度低的固体物质，将其粉碎到500-1000目后加入到胚胎培养液中高速搅拌制成悬浮液。对于水中溶解度低的液体物质，将加入到胚胎培养液中高速搅拌制成悬乳液。优选地，安全物质包括认为对人体有毒的物质和一般认为对生物无毒却可能有毒的安全物质。尤其优选地，安全物质例如为谷氨酸钠、三聚氰胺、酒石黄、苯甲酸钠、亚硝酸钠等食品添加剂。本专利技术还提供了斑马鱼用于测试待测安全物质毒性的用途，其特征在于向胚胎培养液中加入待测安全物质，待测安全物质的加入量使得待测物质在培养液中的浓度呈梯次分布，用加入了待测安全物质的胚胎培养液培养斑马鱼胚胎，然后在4-72小时观察记录斑马鱼胚胎发育的畸形率和死亡率，来判断待测安全物质对斑马鱼胚胎发育的毒性。其中胚胎培养液用PH为6. 7-8. 5的弱碱性水直接配制，胚胎培养液中含有5mM NaCUO. 17mMKCl、0· 43mM CaCl2 和 0. 33mMMgS04。本专利技术配制胚胎培养液所用的氯化钠、氯化钾、氯化钙、硫酸镁以及弱碱性水等均为市购，其中无机盐均为AR级；需要特别说明的是，弱碱性水可以采用任何通过光电催化电解水获得的弱碱性水，该弱碱性水的PH为6. 7-8. 5，可以通过市场上的弱碱性水制备装置制备，也可以自行通过电解的方式制备，需要注意的是本专利技术的弱碱性水并不是通过在水中加入化学物质制备得到的弱碱性水，任何通过加入化学物质到水中制备的弱碱性水不是本专利技术所说的弱碱性水。弱碱性水的PH可以在制备中调节，而不是通过加入化学物质调节pH。本专利技术的有益效果本专利技术使用弱碱性水配制的胚胎培养液来作为测试待测安全物质毒性的培养液，其不仅因为培养液中的水为弱碱性水，还因为培养液中的无机盐的特定组成，使得斑马鱼胚胎能够快速测试待测安全物质的综合毒性，缩短了检测周期。具体实施例方式为了理解本专利技术，下面以实施例进一步说明本专利技术，但本专利技术并不限制于此。实施例I最佳胚胎培养液的筛选I. I不同配方的胚胎培养液的配制及培养斑马鱼的效果A用普通水配制包含以下浓度无机盐的胚胎培养液，调节pH为7. 2，培养斑马鱼胚胎72小时，观察斑马鱼的透明度和存活率。具体结果见表I :表I普通水配制的胚胎培养液对斑马鱼胚胎的影响权利要求1.一种斑马鱼用于测试安全物质的安全性的方法，其特征在于包含如下步骤 配制胚胎培养液，然后向胚胎培养液中加入待测安全物质，待测安全物质的加入量使得待测物质在培养液中的浓度呈梯次分布，用加入了待测安全物质的胚胎培养液培养斑马鱼胚胎，然后在4-72小时观察记录斑马鱼胚胎发育的畸形率和死亡率，来判断待测安全物质对斑马鱼胚胎发育的毒性，其中胚胎培养液用pH为6. 7-8. 5的弱碱性水直接配制，胚胎培养液中含有 5mM NaCl、O. 17mM KCl、O. 43mM CaCl 2 和 O. 33mM MgSO4。2.根据权利要求I所述的方法，其中斑马鱼胚胎通过如下方法选择 采卵前一天将性成熟的斑马鱼，按雌雄为I : 2的比例放入配缸内并隔开，次日上午9:00自然交配并收集受精卵,用胚胎培养液清洗两次收集得到的受精卵，并去除杂质和坏卵，之后后置于胚胎培养液中，29. 3°C进行控光培养；当2hpf时,在显微镜下挑选来自同一亲本、正常发育比率达85%以上且发育时期一致的斑马鱼胚胎。3.根据权利要求I或2所述的方法，其中培养斑马鱼胚胎的方法如下将斑马鱼胚胎用胚胎培养液清洗两次，然后移入24孔板的样孔中，每孔20枚，每孔滴加加入了待测安全物质的胚胎培养液，每孔4ml，随后加盖封闭，置于培养箱中，在29. 3°C培养斑马鱼胚胎。4.根据权利要求I所述的方法，其中观察记录的时间是培养后第4、12、24、48、72小时，记录畸形率和死亡率。5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中pH为7.0-7. 8。6.根据权利要求5所述的方法，其中pH为7.2。7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其中所述的待测安全物质为谷氨酸钠、三聚氰胺、酒石黄、苯甲酸钠或亚硝酸钠。8.一种斑马鱼用于测试待测安全物质毒性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种斑马鱼用于测试安全物质的安全性的方法，其特征在于包含如下步骤：配制胚胎培养液，然后向胚胎培养液中加入待测安全物质，待测安全物质的加入量使得待测物质在培养液中的浓度呈梯次分布，用加入了待测安全物质的胚胎培养液培养斑马鱼胚胎，然后在4？72小时观察记录斑马鱼胚胎发育的畸形率和死亡率，来判断待测安全物质对斑马鱼胚胎发育的毒性，其中胚胎培养液用pH为6.7？8.5的弱碱性水直接配制，胚胎培养液中含有5mM？NaCl、0.17mM？KCl、0.43mM？CaCl？2和0.33mM？MgSO4。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈峰，
申请(专利权)人：中国医学科学院药用植物研究所，陈峰，
类型：发明
国别省市：