本发明专利技术公开了一种猫人参提取物，其总皂苷的质量百分含量为40％～75％，有效成分主要包括科罗索酸、2α，3β，24-三羟基乌苏烷-12-烯-28-酸、2α，3α，24-三羟基乌苏烷-12-烯-28-酸和2α，3α，19α，24-四羟基乌苏烷-12-烯-28-酸。本发明专利技术还提供了该猫人参提取物的制备方法，该制备方法包括提取、脱色剂除杂脱色、葡聚糖凝胶纯化等工序。经药理实验表明，本发明专利技术猫人参提取物具有较好的抗肿瘤作用，因而可将其用于制备抗肿瘤的药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种中药猫人參提取物，以及该猫人參提取物的制备方法和医药用途。
技术介绍
目前，包括肝癌在内的恶性肿瘤作为常见病、多发病，严重危害人类的健康。世界卫生组织(WHO)和美国临床肿瘤学会(ASCO)统计数据表明，1990年全世界肿瘤所致死亡数占总死亡数的12. 3%，预计2015年将达到14.6%。据美国国立癌症研究院(NationalCancer Institute)数据1998 2002年恶性肿瘤发病率为469. 7/10万，家庭、国家及社会为此付出的代价沉重。在恶性肿瘤的多种治疗方法中，化疗在临床上发挥着重要的作用。目前，从中药、天然药物中开发抗肿瘤药物已经成为抗肿瘤药物研发的重要方向。 中药猫人參为称猴桃科植物对萼称猴桃(Actinidia valvata Dunn)的根和老莖，主要分布于浙江、江西、江苏等华东地区，临床用于治疗恶性肿瘤，为华东地区常用抗肿瘤中药。目前，仅见少量关于猫人參化学成分、药理作用方面的研究报道。目前，未见有葡聚糖凝胶柱色谱技术用于制备总皂苷含量高的猫人參提取物的研究报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供ー种总皂苷含量高的猫人參提取物，并提出其制备方法和医药用途。对于中药提取物的制备而言，简便、快速、高效的脱色、除杂、纯化方法至关重要，也是中药提取物制备エ艺中的瓶颈问题。本专利技术人长期从事中药化学、制备エ艺以及抗肿瘤中药新药等方面的研究工作，在猫人參提取物的制备过程中，曾尝试采用多种除杂脱色エ艺路线，结果表明不仅エ艺步骤繁琐，而且效果也不尽理想。最終经反复筛选优化，采用活性炭和活性白土混合脱色剂对粗提物进行除杂脱色，再用葡聚糖凝胶色谱对脱色后产物进行纯化，取得了很好的效果，非常便于生产应用。本专利技术猫人參提取物的有效组分主要为三萜皂苷类成分，包括科罗索酸、2 α，3 β，24-三羟基乌苏烷-12-烯-28-酸、2 α，3 α，24-三羟基乌苏烷-12-烯-28-酸和2 α，3α ,19α ,24-四羟基乌苏烷_12_烯_28_酸等，总皂苷占提取物的质量百分含量为40% 75%。本专利技术提供的猫人參提取物的制备方法，主要包括药材提取、除杂脱色、分离纯化エ序，具体说明如下(I)药材提取将干燥、粉碎后的中药猫人參药材，以体积浓度为50% 95%こ醇或甲醇水溶液，用回流或渗漉方法进行提取，提取液合井，回收浓缩至无醇味，得浓缩液；将上述浓缩液放冷，离心，分取沉淀；本步骤还可选用体积浓度为70% 95%こ醇或甲醇水溶液进行，优选体积浓度为80%こ醇或甲醇水溶液。考虑到可能的有机溶剂残留、生产中的安全因素以及成本因素，こ醇水溶液为首选。(2)除杂脱色将步骤(I)制得的沉淀以体积浓度为50% 100%こ醇或甲醇水溶液溶解，加入脱色剂除杂脱色，脱色液浓缩至近干，得除杂脱色后产物。本步骤溶解沉淀还可选用体积浓度为70% 100%こ醇或甲醇水溶液，优选体积浓度为100%こ醇或甲醇水溶液。本步骤脱色剂可选用活性碳，或活性白土，或两者的混合物。优选活性炭与活性 白土之比为10 : I I : 20(重量比)的混合脱色剤，最优选活性炭与活性白土之比为I 10 (重量比)的混合脱色剤。本步骤脱色剂的用量脱色剂与药材重量比为25% 200%，优选25% 100%，最优选50 %。(3)分离纯化将(2)中制得的除杂脱色后产物用体积浓度为50% 95%こ醇或甲醇水溶液溶解，上葡聚糖凝胶色谱柱，先用体积浓度为5% 25%こ醇或甲醇水溶液洗脱至近无色，再用体积浓度为70% 100%こ醇或甲醇水溶液洗脱皂苷类成分，收集洗脱液，浓缩，干燥，粉碎，即得猫人參提取物。本步骤溶解除杂脱色后产物还可选用体积浓度为70% 95%こ醇或甲醇水溶液，优选体积浓度为80%こ醇或甲醇水溶液。本步骤优选Sephadex LH-20葡聚糖凝胶色谱柱进行分离纯化,先选用体积浓度为10% 25%こ醇或甲醇水溶液洗脱至近无色，优选20%こ醇或甲醇水溶液；选用体积浓度为70% 100%こ醇或甲醇水溶液洗脱皂苷类成分，优选100%こ醇或甲醇。考虑到可能的有机溶剂残留、生产中的安全因素以及成本因素，こ醇水溶液为首选。本步骤应用葡聚糖凝胶脱色对于猫人參提取物的制备至关重要，若不采用葡聚糖凝胶纯化，尽管提取物的得率得以提高，但是提取物的总皂苷含量将会大大降低，以至于总皂苷含量降低到50%以下，大大降低了提取物的品质(详见实施例7)，根据SFDA颁布的《药品注册管理办法》，总皂苷含量降低到50%以下吋，就不能作为有效部位申报新药。这正是本专利技术提取物制备エ艺中采用葡聚糖凝胶纯化步骤的创造性意义。本专利技术采用紫外-可见分光光度法对猫人參提取物的总皂苷含量进行測定，提取物中単体成分的鉴定采用1Hnmr^3Cnmr进行分析，根据所得数据进行结构确认。随后的实施例将证明，采用本专利技术前述制备エ艺，最終可得到总皂苷质量百分含量为60% 75%的猫人參提取物，其有效组分主要为三萜皂苷类成分，主要包括科罗索酸、2 α，3 β , 24- ニ轻基乌苏烧-12-稀-28-酸、2 α，3 α，24- ニ轻基乌苏烧-12-稀-28-酸和2 α，3 α，19 α，24-四羟基乌苏烷-12-烯-28-酸等。本专利技术猫人參提取物的制备方法具有エ艺简便，成本低廉，安全有效，无有机溶剂残留等优点，经药理实验证明具有较强的抗肿瘤作用，因而可用于制备抗肿瘤药物。鉴于现代社会中恶性肿瘤发病率的急剧上升，从中药、天然药物中开发抗肿瘤药物已经成为抗肿瘤新药研发的重要方向，本专利技术提取物具有广阔的应用前景。附图说明图I为猫人參提取物的高效液相色谱(HPLC)图。图2为猫人參提取物的体外抗肿瘤实验量效关系曲线图。具体实施例方式下面结合附图和具体实施例，进ー步阐述本专利技术。这些实施例应理解为仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的保护范围。在阅读了本专利技术记载的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些等效变化和修饰同样落入本专利技术权利要求所限定的范围。本专利技术以下实施例中，こ醇、甲醇的浓度均为体积浓度。 实施例I (制备猫人參提取物)猫人參药材粗粉1kg，以80%こ醇水溶液，10倍、8倍、8倍，2小吋、I. 5小吋、I. 5小时，回流提取，提取液趁热过滤，合并提取液，减压回收溶剂至无醇味，蒸馏水调节浓度为Ig (生药)/ml,5000rpm,离心15分钟，分取沉淀，以适量无水こ醇溶解,补加至10000ml。加入混合脱色剂(活性炭活性白土= I 10)500g除杂脱色，加热至70°C，保持恒温I小吋，滤过，滤过液减压浓缩至近干，用80%こ醇溶解样品，毎次取40ml上S印hadex LH-20葡聚糖凝胶柱，20%こ醇水溶液洗脱至近无色，用100%こ醇水溶液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得提取物6. 43g，外观极淡黄色。按照參考文献(何正有，张艺，张旭，等.分光光度法測定藏药翼首草中总皂苷的含量.华西药学杂志，2002，17 (I) 43-45)方法进行总皂苷含量測定，提取物总皂苷含量以熊果酸计74. 05%。对提取物进行HPLC分析，HPLC色谱图见图I。分析条件岛沣LC-20AD高效液相色谱仪(四元低压梯度洗脱系统，ELSD检测器)，色谱柱Shim-packCL本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种猫人参提取物，其特征在于：该提取物中总皂苷的含量为40％～75％；有效成分包括科罗索酸、2α，3β，24？三羟基乌苏烷？12？烯？28？酸、2α，3α，24？三羟基乌苏烷？12？烯？28？酸和2α，3α，19α，24？四羟基乌苏烷？12？烯？28？酸。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：辛海量，凌昌全，苏永华，曲丽萍，盛佳钰，杨延龙，张慧卿，王丽娜，李同明，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：
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