用于诊断和治疗脑炎或癫痫的方法技术

本发明专利技术提供了诊断或确定对象中的自身免疫性脑炎或癫痫的病因和诊断对象中的肿瘤的方法，其包括测试对象的生物学样品中针对GABAB受体的抗体的步骤。本发明专利技术还提供了治疗自身免疫性脑炎或癫痫的方法，其包括检测针对GABAB受体的抗体和治疗与所述疾病相关的肿瘤的步骤。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于在对象中诊断和治疗自身免疫性脑炎或癫痫的方法，其使用针对抑制性Y -氨基丁酸-B (GABAb)受体的抗体。
技术介绍
突触可塑性是神经元的基本特性，其构成记忆、学习和认知机制的基础。可塑性依赖于离子通道和突触受体间复杂的相互作用，所述受体包括兴奋性谷氨酸N-甲基-D-天冬 氨酸受体(NMDAR)和α -氨基-3-羟基-5-甲基_4_异恶唑丙酸受体(AMPAR)。这些受体被药物学或遗传学阻断的动物模型产生严重改变的记忆、学习、行为和癫痫发作。因此，可预期针对这些受体的胞外结构域的免疫应答将导致相似的症状。事实上，最近鉴定的两种与NMDAR的NRl亚基和AMPAR的GluRl/2亚基的胞外表位的抗体相关的疾病导致了表现出突出的精神、行为和记忆问题的脑炎，其通常伴有癫痫发作。在这两种突触自身免疫中，每一抗体均在培养的神经元中引起靶受体水平剧烈和特异的降低，表明它们是致病性的。此夕卜，神经系统综合征通常响应治疗，并且在某些患者中免疫应答作为表达靶受体的肿瘤的副肿瘤表现而发生，其在许多方面与神经肌肉突触的自身免疫性疾病(如，兰伯特-伊顿(Lambert-Eaton)综合征和重症肌无力)类似。这些发现以及某些疾病(如，抗NMDAR脑炎)显著的特异性和高频率的抗体综合征已经引起对其它记忆和行为受损和频繁发生癫痫发作的综合征的注意。在某些此类综合征中，经验性免疫疗法的临床疗效、表明边缘叶脑炎的脑脊液(CSF)磁共振成像(MRI)结果或针对仍未知的神经元胞外抗原的抗体的检出提示了免疫介导的发病机理。对多种抗原功能的更好的理解可以帮助改进治疗策略。然而，对目前面临这些患者的临床医生，影响神经系统疗效的最好的机会取决于(I)对疾病的快速诊断，(2)肿瘤的早期发现和治疗，和(3)免疫疗法的使用。因此，存在对改进的诊断和治疗自身免疫性脑炎或癫痫发作的方法的需要。专利技术概述在一个实施方案中，本专利技术提供了用于诊断对象中的脑炎的方法，其包括步骤从所述对象获得生物学样品；和测试所述生物学样品以确定针对GABAb受体的抗体的存在，其中在所述生物学样品中存在所述抗体代表自身免疫性脑炎，从而确定所述对象中脑炎的病因。在示例性的实施方案中，所述抗体结合GABAb受体的BI亚基。在另一个实施方案中，本专利技术提供了用于诊断对象中与自身免疫性脑炎相关的隐匿性肿瘤的方法，其包括步骤从所述对象获得生物学样品；和测试所述生物学样品以确定针对GABAb受体的抗体的存在，其中在所述生物学样品中存在所述抗体代表在所述对象中存在所述隐匿性肿瘤，并且该肿瘤是所述自身免疫性脑炎的病因。在另一个实施方案中，本专利技术提供了用于诊断对象中的癫痫的方法，其包括步骤从所述对象获得生物学样品；和测试所述生物学样品以确定针对GABAb受体的抗体的存在，其中在所述生物学样品中存在所述抗体代表在所述对象中存在肿瘤，并且所述肿瘤是所述癫痫的病因，从而诊断所述对象中的所述癫痫。在另一个实施方案中，本专利技术提供了用于诊断患有癫痫的对象中的肿瘤的方法，其包括步骤从所述对象获得生物学样品；和测试所述生物学样品以确定针对GABAb受体的抗体的存在，其中在所述生物学样品中存在所述抗体代表在所述对象中存在肿瘤，从而诊断所述患有癫痫的对象中的所述肿瘤。在另一个实施方案中，本专利技术提供了用于治疗对象中的自身免疫性脑炎的方法，其包括步骤通过测试来自所述对象的体液中的针对GABAb受体的抗体来检测与所述自身免疫性脑炎相关的肿瘤，其中在所述体液中存在所述抗体代表在所述对象中存在所述肿瘤，并且所述肿瘤是所述自身免疫性脑炎的病因；和治疗所述肿瘤。在另一个实施方案中，本专利技术提供了用于检测针对GABAb受体的抗体的方法，其中 所述抗体的检出导致用免疫疗法来治疗癫痫或脑炎。通过以下详细描述的实施例和附图，本专利技术其它的特点和优势将显而易见。然而，应理解详细的说明书和具体的实施例在表明本专利技术优选的实施方案的同时仅以说明性的方式给出，因为根据本详细说明书在本专利技术的精神和范围内的各种改变和修改对本领域技术人员将是显而易见的。附图概述本专利或申请文件包含至少一幅彩色形式附图。在提出要求并支付必要的费用后，将提供含有彩色附图的本专利或专利申请出版物的拷贝。图I显示了具有针对GABAb受体的抗体并患有边缘叶脑炎的患者的MRI。在初诊(presentation)时(A)拍摄的来自病例I的轴位FLAIR脑MRI,在内侧颞叶(箭头)显示了增强的信号，在左侧更显著。I个月后的重复研究(B)显示了改善。在初诊后的3个月和9个月后的重复研究(C，D)是稳定的。图2显示了用患者的抗体免疫标记的大鼠脑。用患有边缘叶脑炎的患者的CSF抗体免疫染色的大鼠脑矢状切面。在海马、丘脑、小脑和大脑皮质的神经毡中观察到广泛的染色。图3显示了患者的抗体与胞外表位反应并沉淀GABAb受体的BI和B2亚基。将大鼠海马神经元培养物(活的，非透化处理的)与患有LE的患者的CSF孵育。深色的点样反应代表患者的抗体与细胞表面抗原(A);标尺=10 μ mo使用患者的抗体沉淀的这些抗原示于用EZBlue可视化蛋白质的凝胶中(B)。患者的抗体(P)沉淀了 2条在 105_90kDa的蛋白质条带；使用来自对照个体(N)的CSF的沉淀中见不到这些条带。使用质谱分析对所有条带进行测序，确定了 GABAb受体的BI和B2亚基。其它较小的条带为蛋白降解片段和患者的免疫球蛋白G(IgG)。随后将凝胶转移至硝酸纤维素膜并用特异性针对每一 GABAb亚基的单克隆抗体进行免疫印迹，确定了患者的抗体可沉淀BI和B2亚基(D)。图4显示了患者的抗体在神经元突触中特异性地识别GABAb受体。用患者抗体(绿色)、针对GABAbi受体胞内表位的豚鼠多克隆抗体(红色)和突触前标记物巴松管蛋白(basson)(蓝色)三重标记的培养的大鼠胚胎海马神经元的共聚焦图像(a)。来自同一神经元的树突区域显示了患者的抗体染色(b)、豚鼠多克隆GABAbi受体抗体染色(C)、患者和豚鼠抗体染色(d)和三重染色(e)。24个神经元树突的共定位标记定量示于(f)。图5显示了使用基于HEK293细胞的测定检测针对GABAbi亚基的抗体。用GABAb受体BI和B2亚基转染的HEK293细胞显示了对来自患有边缘叶脑炎的患者的CSF (a)和针对GABAb受体BI亚基的多克隆抗体(b)的反应性；两种反应性整合在(c)中。同样的细胞不与来自对照个体(d)的CSF反应；反应性整合在(f)中。免疫荧光法；X400倍。图6显示了小细胞肺癌的GABAb受体表达。用针对GABAbi受体的多克隆抗体和生物素标记的来自具有针对GABAbi受体的抗体的患者的IgG免疫染色两个SCLC (a, c)的连续切面。两种抗体显示了混合的免疫染色，表明在两个SCLC中都表达GABAbi受体。抗生物素蛋白-生物素过氧化物酶方法；用苏木精轻度复染的切面；X400倍。图7显示了使用基于HEK293细胞的测定检测GABABR_ab。转染HEK293细胞使其表达GABAB1/B2受体并且与患者活的非透化处理的CSF孵育。之后，固定细胞并且与针对GABAb 受体BI亚基的胞内表位的多克隆抗体孵育。注意到患者的CSF将特异性表达GABAb受体的细胞的细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·达尔莫，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚大学理事会，
类型：发明
国别省市：