本发明专利技术涉及一种ABO/RhD血型定型检测试剂卡及其制备，其特征在于，检测试剂卡上具有8个微柱凝胶管，其中，一个凝胶管中含有凝胶和IgM性质的抗A单克隆抗体、一个凝胶管中含有凝胶和IgM性质的抗B单克隆抗体、一个凝胶管中含有凝胶和IgM性质的RhD血型的抗D单克隆抗体，其余5个凝胶管中含凝胶悬浮介质缓冲液和凝胶。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种血型定型检测卡及其制备方法，具体是指采用微柱凝胶技术检测人血红细胞表面的血型抗原,血清或血浆中的血型抗体,涉及检测卡的组成、制备及其应用。
技术介绍
、人红细胞血型是最早发现的人类血型，为人类的一种遗传标记，对人类遗传学、输血、组织配型、器官移植和新生儿免疫具有重要意义。自1900年Landsteinor发现ABO血型以来，1907年Hoktoen首先提出血型鉴定对输血治疗的重要性，而1908年Ottenberg进一步提出了供受体血液交叉配血的概念,更进一步强调血型鉴定对临床输血的深远意义。输血是临床抢救病人生命的重要医疗手段之一，正确鉴定人ABO血型是安全输血的首要步骤，ABO血型不符在临床输血中会导致严重的继发性溶血性输血反应，危及人类生命。因此ABO血型的准确定性至关重要，是安全输血的基础和保障。RhD血型系统是仅次于ABO血型系统的的重要血型系统，是人红细胞血型系统中最为复杂的一个系统。国际输血协会(ISBT)已确认RhD血型系统主要抗原有5种,分别为 D、C、c、E、e，其中D抗原最强。人红细胞表面含有D抗原的为RhD阳性，反之为阴性，中国汉族人群中RhD阳性的比例约占99. 7%。RhD阴性人群接受RhD阳性血液后，会对D抗原发生免疫应答，并在第二次接触该抗原后发生溶血反应；另外，RhD阴性妊娠妇女的胎儿为阳性时，在分娩或流产时，胎儿红细胞可能会通过胎盘进入母体，导致母体对D抗原发生免疫应答，当再次妊娠时，可能造成新生儿溶血。卫生部卫医法(2000) 184号文件规定,每位供血及受血的个体均要进行ABO、RhD 血型定型检测。在国外、已有戴安娜、达亚美、强生等厂家生产用于ABO血型系统和RhD血型系统血型检测的检测卡，但其均采用葡聚糖凝胶或微玻璃珠，葡聚糖凝胶颗粒为70nm以上， 颗粒较大、凝胶之间缝隙较大，易使血型检测卡的灵敏度降低，而玻璃微珠之间容易产生静电，对检测过程存在不同程度影响，此外，国外已有的血型检测卡仅进行ABO正定型检测， 无ABO反定型检测，降低血型定性试剂的准确性，易导致ABO血型系统结果的错误报告。在国内，也已经有长春博迅、江阴力博等企业也有类似的血型检测卡生产，但相对于国外试剂质量，存在一定的差异。中国专利申请(申请公布号CN 101718794A)公开了一种ABO/RhD血型定型检测试剂卡的制备方法选用30-60nm的聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶作为凝胶介质，每个空白卡上含有6个微柱管，形成6个微柱凝胶管的检测卡，6个微柱管分别为抗A、抗B、抗D、阴性对照各一管，反定型检测2管。该卡基本上满足检测需求，但其在反定型检测管项目中缺少 O细胞检测对照和自身凝集素管检测对照，在部分特殊病例，如自身冷凝激素或不规则抗体存在条件下，易造成ABO血型的误判；聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶的选择、制备易受生产操作及环境的影响，容易对对试剂灵敏度造成影响，使试剂质量不稳定。中国专利申请(申请公布号CN 101701961A)公开了一种ABO血型定型检测试剂卡的制备方法选用30-60nm的聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶作为凝胶介质，每个空白卡上含有6 个微柱管，形成6个微柱凝胶管的检测卡，6个微柱管分别为抗A、抗B、阴性对照各一管， 反定型检测3管。该卡基本上满足检测需求，但其在反定型检测管项目中缺少RhD血型检测和自身凝集素管检测对照，在部分特殊病例，如自身冷凝激素存在条件下，易造成ABO血型的误判，且无法同时检测RhD血型中D抗原；聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶的选择、制备易受生产操作及环境的影响，使颗粒之间的间隙不够均匀，容易对对试剂灵敏度造成影响，使试剂质量不稳定。
技术实现思路
本专利技术的内容旨在克服以上不足，提供一种高灵敏度、高特异性、质量稳定，能同时进行正反定型和RhD血型定型检测，并能在一定程度上排出标本干扰的一种检测试剂卡的制备方法。·为实现上述目的，本专利技术以以下设计方案进行ABO/RhD血型定型检测试剂卡上具有8个微柱凝胶管，分别为一管含有IgM性质的抗A单克隆抗体、一管含有IgM性质的抗B单克隆抗体、一管含有IgM性质的RhD血型的抗D单克隆抗体，其余5管为含凝胶缓冲液的空白凝胶卡，用途分别为一管用于阴性对照、 三管用于ABO反定型检测，一管用于自身对照检测。制备方法及工艺过程一、凝胶悬浮介质缓冲液的配制凝胶悬浮介质缓冲液的配方如下磷酸二氢钾0.21-0.24g/L磷酸氢二钠0.46-0.48g/L氣化钠1.7-1.8g/L牛血清白蛋白 2-4%PEG0.05%叠氮钠0.1%以上试剂用纯化水溶解，调整pH值为6. 6-6. 8。二、凝胶制备选用交联葡聚糖，如进口商品化的交联葡聚糖G50 (Sephadex G50)、交联葡聚糖 G75 (Sephadex G75)或交联葡聚糖GlOO (Sephadex G100)的一种或几种，用上述配制的凝胶悬浮介质缓冲液充分溶胀交联葡聚糖，然后用悬浮介质洗涤5次，去除凝胶碎片及不完全溶胀的凝胶，收集已得到充分溶胀的凝胶。三、抗体的选择选择IgM性质的抗A单克隆抗体，效价同比检测不低于抗A国家参考品检测结果。选择IgM性质的抗B单克隆抗体，效价同比检测不低于抗B国家参考品检测结果。选择IgM性质的RhD血型抗D单克隆抗体，效价> 1:64，与Dvi抗原反应为阴性。四、凝胶配制将第二项中制备的凝胶与第三项中的各项抗体混合，混合比例为2:广4:1 (w:w), 分别配制成含有IgM性质的抗A单克隆抗体的特异性凝胶，含有IgM性质的抗B单克隆抗体的特异性凝胶，含有IgM性质的RhD血型抗D单克隆抗体的特异性凝胶；将将第二项中制备的凝胶与第一项中的凝胶介质缓冲液充分混合，混合比例为2:广4:1 (w:w)，配制成中性凝胶。五、分装按照每管25-30ul的量，将第四步中配制的各种凝胶分别加入到含有8个微柱管的空白微柱凝胶卡中，制备成具有8个微柱凝胶管的ABO/RhD血型定型检测试剂卡。六、封口用铝箔纸通过压膜方式将微柱凝胶卡上口密封，贴相标识后保存于2_25°C。 七、产品技术参数ABO/RhD血型定型检测试剂卡2_25°C室温条件下保存，有效期为一年，在有效期内，ABO/RhD血型定型检测试剂卡具有如下技术标准I、外观AB0/RhD血型定型检测试剂卡中抗A特异性凝胶呈均匀蓝色或淡蓝色， ABO/RhD血型定型检测试剂卡中抗B特异性凝胶呈均匀黄色或淡黄色，ABO/RhD血型定型检测试剂卡中抗D特异性凝胶呈均匀乳白色，ABO/RhD血型定型检测试剂卡中中性凝胶呈均匀乳白色，胶面上端有1_5_澄清透明液体，凝胶之间无气泡或其他异物。2、灵敏度含相应抗体的特异性凝胶管中，与具有相应抗原的红细胞产生> 3+的凝集，凝集的红细胞集中出现在凝胶上层表面，并呈现直线型。3、特异性含相应抗体的特异性凝胶管中，与具有相应抗原的红细胞产生凝集反应，及凝集的红细胞集中出现在凝胶上层表面，并呈现直线型，与不含有相应抗原的红细胞产生非凝集的阴性反应，红细胞可全部通过凝胶达到微管底部，沉积在微管底部；中型凝胶中直接加入红细胞试剂，则红细胞可全部通过凝胶达到微管底部，沉积在微管底部，呈阴性反应。八、产品的使用方法K ABO/RhD血型定型检测试剂卡具有8个凝胶管，本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.ABO/RhD血型定型检测试剂卡，其特征在于，检测试剂卡上具有8个微柱凝胶管，其中，一个凝胶管中含有凝胶和IgM性质的抗A单克隆抗体、一个凝胶管中含有凝胶和IgM性质的抗B单克隆抗体、一个凝胶管中含有凝胶和IgM性质的RhD血型的抗D单克隆抗体，其余5个凝胶管中含凝胶悬浮介质缓冲液和凝胶。2.根据权利要求I的检测试剂卡，其特征在于，所述凝胶是用交联葡聚糖制备的。3.根据权利要求I的检测试剂卡，其特征在于，所述凝胶的制备是将交联葡聚糖G50、 交联葡聚糖G75或交联葡聚糖GlOO的一种或几种用凝胶悬浮介质缓冲液充分溶胀制成的。4.根据权利要求I的检测试剂卡，其特征在于，所述凝胶悬浮介质缓冲液，其组成如下磷酸二氢钾0.21-0.24g/L磷酸氢二钠0.46-0.48g/L氯化钠1.7-1.8g/L牛血清白蛋白 2-4%PEG0.05%叠氮钠0.1%以上试剂用纯化水溶解，调整PH值为6. 6-6. 8。5.根据权利要求I的检测试剂卡，其特征在于，所述凝胶的制备，方法如下选用交联葡聚糖G50、交联葡聚糖G75或交联葡聚糖GlOO的一种或几种，用凝胶悬浮介质缓冲液充分溶胀交联葡聚糖，然后用悬浮介质洗涤5次，去除凝胶碎片及不完全溶胀的凝胶，得到凝胶。6.根据权利要求I的检测试剂卡，其特征在于，其中，所述一个凝胶管中含有凝胶和 IgM性质的抗A单克隆抗体、一个凝胶管中含有凝胶和IgM性质的抗B单克隆抗体、一个凝胶管中含有凝胶和IgM性质的RhD血型的抗D单克隆抗体，是每个凝胶管中含有凝胶和相应的单克隆抗体，两者相互混合，混合比例为2:广4:1 (w:w)07.根据权利要求I的检测试剂卡，其特征在于，其中，所述5个凝胶管中含凝胶悬浮介质缓冲液和凝胶是每个凝胶管中含有凝胶介质缓冲液和凝胶，两者相互混合，混合比例为 2:1 4:1 (w:w)08.根据权利要求I的检测试剂卡，其特征在于，其中，每管内容物的装量为25-30ul。9.根据权利要求I的检测试剂卡，其特征在于，检测试剂卡上具有8个微柱凝胶管，其中，一个凝...
【专利技术属性】
技术研发人员：李艳召，戈军，张志，曹建荣，
申请(专利权)人：北京金豪制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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