本发明专利技术公开了一氧化碳分子在皮肤移植后抑制急性排斥反应中的应用，发明专利技术人经过大量的细胞试验发现，将所说的一氧化碳释放分子溶解在DMSO溶剂中，然后将其置于生物体内，可以持续性释放CO，故可作为一种外源性CO供体，并以ICR小鼠和BALB/C小鼠皮肤作为供体和受体建立同种异基因急性排斥反应模型，小鼠尾静脉注射外源性CO，进行早期干预，进行试验，发现一氧化碳释放分子对皮肤移植后急性排斥反应有抑制作用。采用所述的一氧化碳释放分子抑制皮肤移植后急性排斥反应，其浓度控制相对容易且正确，长期使用时追加方便，可以作为一种特异性强、低毒、高效的免疫抑制剂。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术专利涉及ー氧化碳释放分子在免疫抑制方面的新用途，具体的说，涉及一种早期应用ー氧化碳释放分子治疗皮肤移植后抑制急性排斥反应的方法。
技术介绍
同种异基因移植(Allotranspantation)是目前治疗器官衰竭终末期的主要途径。同种异基因皮肤移植作为ー种简便的器官移植手段，不仅在抗移植排斥的研究中应用广泛，而且在临床上，一定程度解决了自体皮肤的缺乏以及异种皮肤移植带来的伦理学问题。但是接受了同种异基因组织器官移植的个体，移植物MHC抗原被自身免疫系统识别，产生排斥。早在18世纪，人类就开始了异体皮肤移植的探索。最初的尝试都因为无法迈过最初的急性排斥反应而最終宣告失败。到了近代，免疫学有了突破进展，伴随着免疫抑制剂的出现和免疫耐受诱导概念的提出，使突破这些障碍成为可能。目前的免疫抑制剂虽然在疗效取得一定的突破，但因为缺乏特异性而带来严重的副作用使之仍然无法令人满意，研制高效低毒特异性强的免疫抑制剂仍然是今后艰巨的任务。由于皮肤的特殊结构，血液循环的建立较之行血管吻合的实质器官晚，其致敏的发生场主要在引流淋巴结，且皮下组织内含有大量的郎罕氏巨细胞(LC)，作为ー种专职APC，使同种异基因皮肤移植发生的急性排斥反应尤其剧烈。正因为这样的特性，加上皮肤移植的直观性便于连续观察排斥状况，使其成为研究排斥反应及相应抗排斥手段的最常用模型。目前发现的具有免疫抑制作用的药物主要有以下5类化学制剂类、激素类、真菌代谢产物类、中药及其有效成分、多克隆和单克隆抗淋巴细胞抗体。环磷酰胺，是最早用于临床的烷化剂类免疫抑制剂，作用強大，破坏DNA的结构功能，抑制细胞分裂増殖，从而起到杀伤免疫细胞的作用，但副作用极大，多用于自身免疫性疾病的研究和治疗，对于在皮肤移植研究中的应用尚无特别报道。环孢素A(CsA)，为11个氨基酸组成的环状多肽，最早是从真菌代谢产物中提取，可人工合成，选择性抑制Th细胞产生的细胞因子，特别是对IL-2及其受体的表达，从而一起对IL-2不能反应；对体液免疫及炎症反应也有一定作用。他克莫司(FK506)，为新一代真菌肽类免疫抑制剂，作用机理类似CsA，但效能更強大，主要抑制IL-2、IL-3、IFN-y等致炎因子。AG490，为人工合成的苯亚甲基丙ニ腈的脂类衍生物，可以和受体酪氨酸激酶竞争结合位置。雷帕霉素，为大环内酯类抗生素，1989年经证实有強大的免疫抑制作用，主要是通过阻止IL-2、IL-4对T细胞活化的信号传导从而抑制了 T细胞増殖周期的Gl期向S期分化，并对体液免疫也有抑制作用，而对非特异性免疫无明显影响。但是，由于非特异性抗免疫排斥的局限，在长期服用传统免疫抑制剂的情况下会出现诸多致命的并发症，如肿瘤、全身免疫力低下、中枢及肝肾功能损害等等。因此，研究高效、低毒、特异性免疫抑制剂成为当今移植领域的研究热点。一氧化碳(CO)常温常压下是ー种双原子、小分子的气态物质，由于ー氧化碳可与机体内血红蛋白结合生成碳氧血红蛋白(HbCO)，使得血液运输氧的能力发生障碍，高浓度时还可与还原性细胞色素氧化酶的两价铁结合，抑制组织呼吸，故CO在以往被认为是有毒气体，对CO的研究仅局限于它的生物学毒性。近年来，大量的研究证实ー氧化碳(CO)与一氧化氮(NO)相类似，也是ー种重要的气体细胞信使分子，在细胞功能和通讯的调节カー面发挥信号转导的重要作用。到1990年代初，Snyder等提出至少在ー种类型的神经细胞内，CO将不仅仅是副产物且作为cGMP的调节分子，它将和NO —样激活生物信号。Snyder等研究证明，cGMP在中枢神经系统的嗅觉信号传导中起了重要的作用，而这种作用可被HO的抑制剂阻断，从而提出了 CO的分子信号作用。 外源性一氧化碳释放分子(Carbonmonoxide-releasing molecules, CORMs)是近年来新合成的一种ー氧化碳复合物，该ー氧化碳复合物的制备方法和理化性能參数，在Motterlini R等所著文献(Curr. Pharm. 2003 ；9 :2525-39)中有详细的报道,该一氧化碳复合物通常可用于制备缓释的一氧化碳。上世纪九十年代初,Mahin Maines等提出Heme在大脑内由H0-1降解产生的CO激活了 3’，5’-cGMP。CO将不仅仅是副产物，而且是作为cGMP的调节分子。H0-1作为体内唯一一种催化血红素(heme)分解代谢的限速酶，对细胞的保护作用最早在急性肺损伤和内毒素休克动物模型上被证实当H0-1被抑制剂锌原卟啉所抑制或不被诱导，移植的心脏很快被排斥；而利用一定浓度的外源性CO处理移植的心脏后，即使H0-1的活性被抑制的情况下，也可防止急性排斥的发生，并达到与H0-1表达ー样的效果。H0-1或外源性CO可抑制心血管系统白细胞浸润及平滑肌细胞的増殖，从而抑制了移植物微血管新生内膜的形成。此作用是通过顺序激活cGMP、p38MARK途径，从而表达细胞周期抑制因子p21，使平滑肌细胞周期停留在G1/S阶段。根据我们的前期研究已经证实，外源性CO对脓毒症早期的炎症反应有抑制作用。如能够将所述的ー氧化碳释放分子用于抑制同种异体移植排斥反应中，将为研究开发新型低毒、高效的免疫抑制剂开辟新的途径。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供ー氧化碳释放分子在皮肤移植后抑制急性排斥反应中的应用，以满足临床应用的需要。将所述ー氧化碳释放分子溶解在溶剂中，然后将其置于细胞培养液或生物体内，中可以持续性释放CO，作为ー种外源性CO供体，动物试验发现，可用于抑制皮肤移植后急性排斥反应，可作为ー种抑制皮肤移植后急性排斥反应的药物，所述的急性排斥反应，包括同种异基因小鼠皮肤移植后，脾脏淋巴细胞分泌功能的增强，或者是同种异基因小鼠皮肤移植后脾脏淋巴细胞体外增值能力的增强。因此，所述的ー氧化碳释放分子C0RM-2，可以用于制备抑制皮肤移植后急性排斥反应的药物；本专利技术以ICR小鼠和BALB/C小鼠皮肤作为供体和受体建立同种异基因急性排斥反应模型，小鼠尾静脉注射外源性CO，将所述的ー氧化碳释放分子作为ー种抑制皮肤移植后急性排斥反应的药物，施加于皮肤移植后的动物，剂量一般7 8mg/kg体重/天，具体可根据患者的具体情况，由医师决定，进行早期干预，进行试验，发现ー氧化碳释放分子对皮肤移植后急性排斥反应有抑制作用。采用所述的ー氧化碳释放分子抑制皮肤移植后急性排斥反应，其浓度控制相对容易且正确，长期使用时追加方便，可以作为ー种特异性强、低毒、高效的免疫抑制剂，能够满足临床应用的需要。附图说明图I为移植皮片HE染色光镜下视野(400倍)。图2为移植皮片真皮层IL-2免疫组织化学切片光镜观察(400倍)。图3为移植皮片真皮层IL-4免疫组织化学切片光镜观察(400倍)。图4为移植皮片真皮层IL-10免疫组织化学切片光镜观察(400倍)。图5为移植皮片真皮层IFN- Y免疫组织化学切片光镜观察(400倍)。图6为移植皮片真皮层FAS免疫组织化学切片光镜观察(400倍)。图7为移植皮片真皮层FasL免疫组织化学切片光镜观察(400倍)。图8为各组小鼠外周血淋巴细胞增值指数。具体实施例方式实施例I外源性ー氧化碳释放分子C0RM-2对同种异基因小鼠皮肤移植后移植物的实验观察试验方法(I)动物及本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孙炳伟，孙志伟，孙艳，
申请(专利权)人：江苏大学附属医院，
类型：发明
国别省市：
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