本发明专利技术公开了一种冻干b型流感嗜血杆菌结合疫苗的制备方法，它包括以下步骤：结合疫苗半成品溶液的配制及分装；将疫苗半成品溶液置入冻干机中进行冻干：先预冻2～4小时，预冻完成后开始抽真空处理，抽真空处理完成后，将真空状态的冻干机温度调至-30～-35℃，并保持10小时，搁板以5℃/小时的速度升温至30℃，并维持在30℃的温度3.8～4.2小时；取出完成冻干的结合疫苗，获得成品。本发明专利技术疫苗性能符合规定，用冻干Hib结合疫苗代替传统的液体剂型，具有保存、运输及使用方便，疫苗稳定性好、有效期长等特点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种。
技术介绍
b型流感嗜血杆菌结合疫苗，由纯化的b型流感嗜血杆菌荚膜多糖与破伤风类毒素共价结合而成。b型流感嗜血杆菌是儿童鼻咽部常见的共生细菌，在应用疫苗前，大多数儿童都会在某段时期携带Hib，有时携带数月，但细菌定植率依年龄与社会经济状况不同相差很大。在Hib疫苗接种率高的地区，由于Hib结合疫苗的群体免疫作用，细菌在鼻咽部的定植率非常低。尽管只有小部分携带者会发展为临床病例，但由于Hib是通过呼吸道分泌物的飞沫传播的，携带者在传播疾病方面有重要意义。Hib疾病主要表现为儿童肺炎和脑膜炎，在尚未开展大规模Hib疫苗接种的地区， Hib疾病是一个主要的公共卫生问题。据2006年WHO公告，全球每年至少有300万严重病例发生，约38. 6万死亡。Hib发病与死亡多见于发展中国家，疾病负担在4 18月龄儿童最为严重，但小于3月龄和大于5岁儿童也偶尔发病。在未免疫人群，Hib是I岁以内儿童非流行性细菌性脑膜炎的主要病因。即便及时给予足量的抗生素治疗，3 20%的Hib脑膜炎患者仍会死亡。在医药卫生资源不足的地区，Hib脑膜炎病死率会更高，幸存者中神经系统后遗症也很常见，约占比例30 40%。Hib感染的其他重要但不常见的临床表现有败血症、化脓性关节炎、骨髓炎、心包炎、蜂窝组织炎和会厌炎(特别是工业化国家)。如果在正常情况下无菌的体液或组织如血液、脑脊液、腹腔液、胸腔液或肺吸出物中检测到Hib细菌， 则成为侵袭性Hib疾病。在工业化国家和发展中国家，疫苗接种都是唯一能迅速降低Hib疾病发病的公共卫生措施，将Hib疫苗纳入儿童常规疫苗规划的国家多数在数年内就可以实际消除Hib严重病例。由于细菌对一些最有效的抗生素耐药性正在不断增加，通过疫苗预防Hib疾病就变得越来越重要了。国外于20世纪80年代后期研制成功了安全有效的预防用Hib结合疫苗，中国也相继成功研制出Hib结合疫苗，并于2003年经国家食品药品监督管理局SFDA批准上市销售。然而，目前国内的Hib结合疫苗均为液体剂型，存在着保存、运输及使用不方便，稳定性较差，疫苗有效期较短等缺点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有b型流感嗜血杆菌结合疫苗的不足，提供一种冻干b 型流感嗜血杆菌结合疫苗的制备方法，克服传统液态b型流感嗜血杆菌结合疫苗保存、运输及使用不方便，稳定性差，有效期有限等缺点。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的，它包括以下步骤(I)制备b型流感嗜血杆菌结合疫苗半成品溶液，它包括以下不同溶液组分进行混合的步骤(I )将蔗糖溶液与多糖结合物均匀混合即得，其中，蔗糖与多糖结合物的重量比为 720 900 :0. 12 O. 29 ;(II)将乳糖溶液与多糖结合物均匀混合即得，其中，乳糖与多糖结合物的重量比为 40 730 :0. 12 O. 29 ;(III)将甘氨酸溶液与多糖结合物均匀混合即得，其中，甘氨酸与多糖结合物的重量比为 40 730 0. 12 O. 29 ;(2)将疫苗半成品溶液置入冻干机中进行冻干，先将冻干机板层温度降至-30 -40°C 进行预冻，预冻时间2 4小时；(3)预冻完成后，将搁板温度降至-30 _45°C后开始抽真空处理；(4)抽真空处理完成后，将真空状态的冻干机温度调至-30 -35°C，并保持10小时；(5)搁板以5°C/小时的速度升温至30°C，并维持在30°C的温度3. 8 4. 2小时；(6 )取出完成冻干的结合疫苗，获得成品。本专利技术的有益效果是通过本方法制成的冻干Hib结合疫苗呈均匀白色粉末状， 无异物，可在2 8°C的温度下保存36个月；免疫双扩散法检测Hib结合疫苗与Hib免疫血清及破伤风类毒素免疫血清形成明显沉淀线；多糖含量不低于IOug ;高分子结合物为80 100% ;多糖分子大小用CL-4B凝胶柱检测Kd值小于O. 2 ;疫苗两针免疫后80%以上的小鼠血清抗Hib CPS IgG的抗体水平高于Cutoff值，符合药典要求；动物安全性试验包括热原质试验、异常毒性试验和过敏原性试验均符合Hib结合疫苗性能规定；用冻干Hib结合疫苗代替传统的液体剂型，具有保存、运输及使用方便，疫苗稳定性好、有效期长等特点。具体实施例方式下面结合实施例进一步描述本专利技术的技术方案实施例I，它包括以下步骤(1)制备b型流感嗜血杆菌结合疫苗半成品溶液，将蔗糖溶液与多糖结合物均匀混合即得，其中，蔗糖的含量为72mg/ml，多糖结合物的含量为12ug/ml ；(2)将疫苗半成品溶液置入冻干机中进行冻干，先将冻干机板层温度降至-40°C进行预冻，预冻时间2小时；(3)预冻完成后，将搁板温度降至_45°C后开始抽真空处理；(4)抽真空处理完成后，将真空状态的冻干机温度调至_35°C，并保持10小时；(5)搁板以5°C/小时的速度升温至30°C，并维持在30°C的温度3. 8小时；(6 )取出完成冻干的结合疫苗，获得成品。实施例2，它包括以下步骤(1)制备b型流感嗜血杆菌结合疫苗半成品溶液，将蔗糖溶液与多糖结合物均匀混合即得，其中，蔗糖的含量为90mg/ml，多糖结合物的含量为29ug/ml ；(2)将疫苗半成品溶液置入冻干机中进行冻干，先将冻干机板层温度降至-30°C进行预冻，预冻时间4小时；(3)预冻完成后，将搁板温度降至-30°C后开始抽真空处理；(4)抽真空处理完成后，将真空状态的冻干机温度调至-30°C，并保持10小时；(5)搁板以5°C /小时的速度升温至30°C，并维持在30°C的温度4. 2小时；(6 )取出完成冻干的结合疫苗，获得成品。实施例3，它包括以下步骤(1)制备b型流感嗜血杆菌结合疫苗半成品溶液，将蔗糖溶液与多糖结合物均匀混合即得，其中，蔗糖的含量为80mg/ml，多糖结合物的含量为20ug/ml ；(2)将疫苗半成品溶液置入冻干机中进行冻干，先将冻干机板层温度降至-35°C进行预冻，预冻时间3小时；(3)预冻完成后，将搁板温度降至_38°C后开始抽真空处理；(4)抽真空处理完成后，将真空状态的冻干机温度调至_32°C，并保持10小时；(5)搁板以5°C/小时的速度升温至30°C，并维持在30°C的温度4小时；(6 )取出完成冻干的结合疫苗，获得成品。实施例4，它包括以下步骤(1)制备b型流感嗜血杆菌结合疫苗半成品溶液，将乳糖溶液与多糖结合物均匀混合即得，其中，乳糖的含量为4mg/ml，多糖结合物的含量为12ug/ml ；(2)将疫苗半成品溶液置入冻干机中进行冻干，先将冻干机板层温度降至-40°C进行预冻，预冻时间2小时；(3)预冻完成后，将搁板温度降至_45°C后开始抽真空处理；(4)抽真空处理完成后，将真空状态的冻干机温度调至_35°C，并保持10小时；(5)搁板以5°C/小时的速度升温至30°C，并维持在30°C的温度3. 8小时；(6 )取出完成冻干的结合疫苗，获得成品。实施例5，它包括以下步骤(1)制备b型流感嗜血杆菌结合疫苗半成品溶液，将乳糖溶液与多糖结合物均匀混合即得，其中，乳糖的含量为73mg/ml，多糖结合物的含量为29ug/ml ；(2)将疫苗半成品溶液置入冻干机中进行冻干，先将冻干机板层温度降至-30°C进行预冻，预冻时间4小时；(3)预冻完成本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张丽莺，李靖，陈克平，朱冲，李洪光，关晓峰，王子龙，
申请(专利权)人：成都欧林生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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