获得单拷贝目的基因表达框整合之安全转基因植物的方法技术

本发明专利技术公开了一种获得单拷贝目的基因表达框整合之安全转基因植物的方法，包括以下步骤：1)、植物抗性标记基因诱导剪切表达载体的构建；2)、外源基因序列DNA片段的制备；3)、DNA微弹载体悬液制备；4)、植物愈伤组织基因枪轰击转化；5)、抗性愈伤组织的筛选；6)、直接在抗性愈伤组织预分化或分化阶段进行重组酶诱导表达对标记基因相关序列进行剪切处理；7)、转基因植株的分子检测；8)、单拷贝目的基因表达框整合的转基因植株的获得和分子鉴定：对上述步骤挑选出的转基因植株，采用Southern杂交技术鉴定目的基因表达框整合的拷贝数，确定单拷贝整合的转基因植株。

【技术实现步骤摘要】

专利技术涉及一种利用基因枪介导外源基因表达载体片段转化植物的方法，此方法获得的转基因植株除目的基因外不含多余垃圾DNA，而且外源目的基因为单拷贝整合，是一种植物转化技术。属于生物学领域，特别涉及到基因工程技术。
技术介绍
自1983年第一例转基因植物诞生以来，植物基因导入技术日臻完善，形成了以基因枪和农杆菌两大转化技术为主体的植物基因转化系统。随着转基因农作物的商品化种植，转基因植物潜在的生态环境危害以及由之而来的遗传修饰食品对人类的食用安全性， 已成为转基因农作物推广应用的重要障碍。转基因植物中存在的抗性选择标记基因是导致转基因植物安全性问题的根源之一。转基因植物中的抗性选择标记基因在植物转化过程中用来区分转化和非转化细胞，赋予转化细胞对除草剂或抗生素抗性的抗性标记基因是植物转化中普遍使用也是最有效的筛选标记基因，对植物细胞转化处理后，通过在培养基中加入相应的除草剂或抗生素对细胞进行筛选来获得转化细胞。由于目前的基因导入技术只能将外源基因导入少数细胞中， 所以在导入目的基因的同时必须引入抗性选择标记基因才能实现对植物细胞的有效转化。 转基因植株再生后，这些抗性选择标记基因通常不再本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：赵艳，钱前，郭龙彪，黄大年，
申请(专利权)人：浙江工商大学，中国水稻研究所，
类型：发明
国别省市：