本发明专利技术公开了青藤碱在制备抑制肿瘤侵袭转移的药物中的应用。本发明专利技术的有益效果为：青藤碱在体外可剂量依赖性的抑制人消化系肿瘤细胞株的粘附、迁移、侵袭和增殖。这些结果也部分提示青藤碱直接抑制人消化系肿瘤细胞株增殖和侵袭转移的机制可能与其对上皮细胞的作用一样。青藤碱为天然药物青风藤中的活性成分之一，来源丰富，药用价值十分广泛，其副作用小、毒性低、致畸性低等均已经过研究确认。现阶段，国内外均缺少有效地抗肿瘤侵袭转移的药物，临床上，一旦有患者被诊断为肿瘤，多已并发转移，而此时多数患者无疑“被判处死刑”。因此，本申请提供的应用将会填补此领域的一大空白，能造福于更多的肿瘤患者。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及中药活性成分的应用，具体涉及青藤碱在制备抑制肿瘤侵袭转移的药物中的应用。
技术介绍
青藤碱是中药青风藤中主要的活性生物碱，青风藤的化学成分研究主要集中在青藤碱。青藤碱的药理作用及临床应用的研究多年来有了长足的进步，先后发现青藤碱具有显著的镇痛、镇静、抗炎、免疫抑制、镇咳、促组胺释放、降血压及抗心律失常等作用，已应用于治疗风湿病、抗心律失常。近年来，青藤碱的抗肿瘤作用亦逐渐受到关注，越来越多的研究显示青藤碱有抑制宫颈癌Hela细胞、肺癌NCI-H460细胞、白血病HL-60细胞的增殖、诱导凋亡以及化疗增敏的作用。之前已有实验证实青藤碱具有抑制人肝癌细胞H印G2增殖、 诱导凋亡的作用，而青藤碱抑制肿瘤细胞侵袭及转移的研究国内外尚无报道。因此，本专利旨在青藤碱对于肿瘤侵袭及转移的治疗作用做一申请。药材青风藤(《本草纲目》)为防己科植物青藤，华防己或清风藤科植物清风藤等的藤莖。目前为止，对青风藤(Sinomenium acutum Rehder & E. H. Wilson)的化学成分研究主要集中在青藤上，主要含有生物碱类成分以及脂类、留醇类等。最早是由Ishiwari等从日本青风藤中分离得到的一种生物碱单体。20世纪60年代我国学者朱任宏从国产青风藤中也发现其成分。早在《本草汇言》中就有“青风藤，散风寒湿痹之药也，能舒筋活血，正骨利髓。”《本草便读》亦有“凡藤蔓之属，皆可通经入络，此物善治风疾，故一切历节麻痹皆治之，浸酒尤妙；以风气通于肝，故入肝，风胜湿，湿气又通于脾也。”因此青风藤主治风湿及类风湿性关节炎，关节肿大，肢体疼痛、麻木等症，后经历代学者研究发现青风藤中主要的生物活性碱青藤碱(青藤碱)还具有镇痛、抗炎、镇静、消肿、利尿、降压、抗心律失常、抗组胺释放以及免疫调节等多方面的药理作用。国内已有正清风痛宁片、盐酸青藤碱片、盐酸青藤碱注射液、毛青藤总碱片、青藤碱缓释剂等用于临床，凝胶剂、喷雾剂也已投入临床使用，这些制剂在治疗类风湿性关节炎等各种风湿病及心律失常取得明显疗效。近年来，亦有文献报道青藤碱对其他自身免疫性疾病、抗移植排斥反应以及抗肿瘤等多方面的作用，但更多的研究报道集中于青藤碱的抗肿瘤作用是通过抑制肿瘤的凋亡而发挥作用，而对于青藤碱抑制肿瘤的侵袭转移方面并无相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了青藤碱在制备抑制肿瘤侵袭转移的药物中的应用。为了实现上述目的，本专利技术提供的技术方案为青藤碱在制备抑制肿瘤侵袭转移的药物中的应用。上述应用中，所述肿瘤为肝癌、胰腺癌、结肠癌或胃癌。上述应用中，所述肿瘤具体为人肝癌细胞株MHCC97H、人胰腺癌细胞株PANC-UA结肠癌细胞株HT-29或人胃腺癌细胞株HGC-27。上述应用中，所述青藤碱的浓度为O. 125-2. 5mmol/L，处理时间为24_72小时。上述应用中，优选的青藤碱的浓度为I. 25-2. 5mmol/L，处理时间为48_72小时。本专利技术的有益效果为青藤碱在体外可剂量依赖性的抑制人消化系肿瘤细胞株的粘附、迁移、侵袭和增殖。这些结果也部分提示青藤碱直接抑制人消化系肿瘤细胞株增殖和侵袭转移的机制可能与其对上皮细胞的作用一样。青藤碱为天然药物青风藤中的活性成分之一，来源丰富，药用价值十分广泛，目前已经在临床上用于类风湿性关节炎等其他疾病的治疗，其副作用小、毒性低、致畸性低等均已经过研究确认。现阶段，国内外均缺少有效地抗肿瘤侵袭转移的药物，临床上，一旦有患者被诊断为肿瘤，多已并发转移，而此时多数患者无疑“被判处死刑”。因此，本申请提供的应用将会填补此领域的一大空白，能造福于更多的肿瘤患者。附图说明图I为青藤碱抗肿瘤侵袭转移的分子机制示意图。图2为青藤碱对细胞增殖能力的影响。图3为青藤碱对细胞粘附的影响。图4为穿过聚碳酸酯膜和Matrigel胶后人结肠癌细胞株HT-29细胞的Giemsa 染色(X400倍)。其中，A0. Smmol /T, ；B :1. 25mmol/L ；C I. Ommol/L ；D :0. 625mmol/L ；E :0. 5mmol/ L ；F 0. 25mmol/L ；G :0. 125mmol/L ；H :空白组。图5为青藤碱对细胞侵袭力的影响。图6为青藤碱对细胞迁移能力的影响。具体实施例方式设计原理第一阶段青藤碱抗肿瘤侵袭转移的实验研究。以中国药品鉴定所生产的青藤碱标准品(购于中国药品鉴定所，批号 110774-200206)为实验药物，利用transwell小室(购于Corning Costar公司，货号3422) 及基质胶(Matrigel)(购于美国BD公司，货号356234)模拟基膜及细胞外基质，观察青藤碱对高侵袭转移能力的人消化系肿瘤细胞株(人肝癌细胞株MHCC97H、人胰腺癌细胞株 PANC-I、人结肠癌细胞株HT-29以及人胃腺癌细胞株HGC-27，以上细胞株均来自于北京大学医学部肝病研究所)粘附、侵袭和迁移的影响，为其机制的进一步研究做准备。通过第一阶段实验，发现青藤碱具有下列作用I、青藤碱能明显抑制人肝癌细胞株MHCC97H、人胰腺癌细胞株PANC-1、人结肠癌细胞株HT-29以及人胃腺癌细胞株HGC-27对Matrigel胶的粘附，并随药物剂量的增加，粘附抑制率逐渐提高。运用transwell小室的方法发现青藤碱使这四种细胞侵袭基底膜的能力显著下降，并且侵袭抑制率与药物剂量成正相关。在不涂Matrigel胶的transwell小室下室加入15%FBS (胎牛血清)的趋化下，细胞株经青藤碱处理12h后，穿过聚碳酸酯膜的细胞数明显减少，证明青藤碱对人消化系肿瘤细胞株侵袭转移有着直接作用；2、通过MTT法检测青藤碱对上述四种细胞增殖的影响情况，发现细胞株分别经O.125-2. 5mmol/L青藤碱处理24h后，细胞增殖抑制不明显，处理48h、72h后，I. 25、2.5mmol/L青藤碱增殖抑制率才达30%以上。说明青藤碱对细胞的增殖存在时间和剂量依赖关系，同时也说明青藤碱对人消化系肿瘤细胞与Matrigel胶的粘附力、体外侵袭力及迁移力的抑制作用并非通过其细胞毒性作用所致；3、青藤碱在体外可剂量依赖性的抑制人消化系肿瘤细胞株的粘附、迁移、侵袭和增殖。 这些结果也部分提示青藤碱直接抑制人消化系肿瘤细胞株增殖和侵袭转移的机制可能与其对上皮细胞的作用一样。第二阶段青藤碱抗肿瘤侵袭转移的分子机制。如图I所示，肿瘤转移是指恶性肿瘤脱离原发肿瘤通过各种转移方式，到达继发组织或器官得以继续增殖生长，形成与原发肿瘤相同性质的继发肿瘤的全过程。它包括多个过程，其中肿瘤细胞侵袭是肿瘤转移的前提，而EMT (上皮细胞-间充质转化)在肿瘤细胞侵袭过程中起着重要作用。因此，EMT的过程是肿瘤侵袭转移中最重要的生物学作用。EMT 过程中肿瘤细胞可以自分泌许多转录因子，已发现青藤碱ail，Slug, Sipl, AP21(与MMPs 关系密切)，NF-kB，Twist等多种转录因子可以诱导EMT。转录因子中的锌指家族如青藤碱ail、Slug、Twist以及MMPs是上调的,而E_cadherin下调时，可使非侵袭性肿瘤转变为高侵袭性肿瘤。MMP表达上调与EMT关系密切。T本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：张有成，何晶晶，
申请(专利权)人：张有成，何晶晶，
类型：发明
国别省市：
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