一种保护细胞连接的深低温保存方法技术

本发明专利技术公开了一种保护细胞连接的深低温保存方法，其中，包括如下步骤：a、MDCK细胞培养的步骤：b、将步骤a所得MDCK细胞分配为正常对照组、深低温保存组、海藻糖组、Hsp70高表达组和Hsp70+海藻糖组；c、将步骤b中的正常对照组、深低温保存组、海藻糖组、分别做滤器培养；Hsp70高表达组做滤器培养和基因转染，Hsp70+海藻糖组做滤器培养和基因转染；d、将正常对照组、深低温保存组、海藻糖组、Hsp70高表达组和Hsp70+海藻糖组进行深低温保存；e、细胞生长及形态学观察(培养细胞显微镜观察、HE染色)；f、细胞活率测定；g、细胞连接形态与结构观察与分析；h、荧光黄实验。本发明专利技术工艺简单，使用方便，组织和器官在深低温保存后细胞连接的结构和功能能够保持其完整性，能够有效避免细胞连接受损。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及深低温生物保存
，特别涉及有利于保存组织和器的，。
技术介绍
组织和器官的深低温保存是困扰低温生物学研究领域的复杂难题。细胞连接在组织中的部位、结构和功能特殊，其对冷冻损伤的反应及冷冻损伤的保护机制也应具有其特殊性。因此，有必要对深低温保存中的细胞连接损伤特点和规律进行系统观察和研究，建立针对性的、有效的深低温保存技术方案，提高和保证组织和器官的深低温保存效果。研究表明，细胞连接可能是深低温保存过程中各种损伤因子作用靶点之一，并导致组织结构的损伤与破坏。为什么细胞连接易受损伤？首先，细胞连接通过跨细胞膜蛋白，外联相邻细胞或基质，内联细胞骨架蛋白，整个细胞连接处于细胞内、外的不同部位，在深低温保存过程中这些部位所受到的损伤压力是不同的，如水与离子运动导致的渗透压变化、降温和复温过程中细胞体积变化造成的机械张力等，增加了细胞连接组成蛋白结构的变化、破坏和变性等。另外，根据已有研究，细胞连接的胞内主要成分肌动蛋白对于冷冻损伤的敏感性极高， 较多的研究发现来源于对哺乳动物卵母细胞的深低温保存研究。然而，目前对于深低温保存后细胞连接的结构和功能完整性、损伤特点及其结果缺乏本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王沛涛，
申请(专利权)人：青岛大学医学院附属医院，
类型：发明
国别省市：