筛查方法技术

本发明专利技术涉及对活体患者进行阿尔茨海默症(Alzheimer′s?disease，AD)或早期阿尔茨海默症的临床诊断。特别地，本发明专利技术提供了一种筛查方法，其可用于对活体人对象进行阿尔茨海默症的辅助诊断或者用于鉴定人对象针对阿尔茨海默症的易患性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及对活体患者进行阿尔茨海默症(Alzheimer' s disease, AD)或早期阿尔茨海默症的临床诊断。特别地，本专利技术提供了一种，其可用于对活体人对象进行阿尔茨海默症的辅助诊断或者用于鉴定人对象针对阿尔茨海默症的易患性。
技术介绍
随着预期寿命的增长，阿尔茨海默症(AD)正在成为西方国家的主要健康问题。虽然已针对这种疾病进行了旨在发现可靠的治愈方法或预防措施的深入研究，但是至今尚未取得成功。在设计和测试任何治疗药剂中一个最大的问题是缺乏临床诊断标准，所述临床诊断标准能够尽早地鉴别出AD患者以便进行任何有意义的干预。除了严重痴呆患者以外，目前可用的临床诊断工具还不能对阿尔茨海默症进行可靠地临床诊断。目前，还没有公认的用于阿尔茨海默症活体患者临床诊断的“金标准”诊断测试。 最常利用的临床诊断标准是NINCDS/ADRDA标准(McKhann，G.等人(1984) Neurology 34: 939-944)，其最初设计用于研究目的。尽管这些标准具有高的灵敏度，但是特异性低。在这种情况下，“灵敏度”定义为在患有阿尔茨海默症的患者中满足标准的几率，而“特异性” 定义为在未患阿尔茨海默症的患者中不满足标准的几率。由于其特异性低，因此NINCDS/ ADRDA标准对于临床诊断目的来说并不理想。此外，由于NINCDS/ADRDA需要将患者的痴呆作为AD诊断的标准之一，因此它们不适于作为用于旨在寻找预防性或治疗性疗法的临床试验的诊断标准，所述疗法如果在发生显著痴呆之前使用的话可以在最佳时机见效。阿尔茨海默症的“确切”诊断仅可通过针对阿尔茨海默症特征性病理的组织学检查(淀粉样蛋白斑块和缠结的积聚)在对象死后获得，但这种方法显然不适用于对活体对象进行AD临床诊断。近年来愈加广泛接受的是，阿尔茨海默症的病理基础是不同的神经元类群异常地再进入(re-entry)细胞分裂周期(Nagy Z, Esiri MM和 Smith AD (1998) Neuroscience 84 731 739)。在健康的老年个体中，在这种细胞周期再进入之后可发生迅速的细胞周期阻滞和再分化。相反，在患有阿尔茨海默症的个体中，调控机制似乎失效，并且神经元进入细胞周期的后期从而导致AD相关病理的积聚和/或神经元死亡(Nagy Z，Esiri匪和Smith AD(1998)Neuroscience 84:731739)。一些研究表明，阿尔茨海默症中细胞周期调节失控发生在 G1/S 转换检验点(具体参见 Arendt T，Rodel L, Gartner U 和 Holzer M(1996) Neuroreport 7 3047 9)。认为阿尔茨海默症可起因于G1/S转换的细胞周期调控缺陷已导致开发出针对 AD诊断的替代方法，其基于对相关细胞周期调控缺陷的检测，而非对疾病外在症状(例如认知功能障碍(痴呆))的评估。在这方面，国际专利公开WO 02/073212描述了一种可用于诊断早期AD的诊断测试，其基于对测试对象中的非神经元细胞筛查G1/S转换细胞周期调控缺陷的存在。WO 02/073212的作者发现，先前在阿尔茨海默症患者的神经元中观察到的G1/S转换的细胞周期调控缺陷也发生在AD患者的非神经元细胞(如淋巴细胞或成纤维细胞)中。这继而导致开发出针对细胞周期调控缺陷(其预示了经典阿尔茨海默症症状(如痴呆)的发生(即在症状发生之前出现))的方便的血液测试方法(Zs Nagy, M Combrinck,M Budge,R McShane. Cell cycle kinesis in lymphocytes in the diagnosis of Alzheimer' s disease. Neurosci Letters. 2002,317,2,81-84)。载脂蛋白Efepolipoprotein Ε, apoE)是一种对于富含甘油三酯之脂蛋白成分的分解代谢必需的载脂蛋白。编码apoE的基因具有多态性，其具有三个主要的等位基因—— ApoE2、ApoE3和ApoE4，它们分别翻译成三个主要的蛋白质同工型(apoE2、apoE3和apoE4)。 ApoE4等位基因是多个种族群体中已知的AD遗传风险因素，并且在许多种群中可占病例数的约50% (Waring SC禾口Rosenberg RN. Genome-Wide Association Studies in Alzheimer Disease. Arch Neurol 2008 ；65 (3) =329-334) 与具有其它同工型的携带者相比，携带一个或两个拷贝之ApoE4的个体具有更高的AD发病风险。此外，ApoE4还使AD发病的平均年龄从非携带者的84岁降低至纯合体的68岁(Cedazo-Minguez A. Apolipoprotein E and Alzheimer' s disease :molecular mechanisms and therapeutic opportunities. J. Cell. Mol. Med. 2007 ；11 (6) :1227-1238)。虽然ApoE4等位基因是已确立的AD遗传风险因素，但该标志物本身不适用于在临床上对AD进行诊断。此外，在对表现出痴呆的对象进行AD临床诊断中，尚未证明其可与认知障碍的神经病理学评估联合使用。(McConnell LM, Sanders GD，Owens DK. Evaluation of genetic tests :AP0E genotyping for the diagnosis of Alzheimer disease. Genet Test 1999 ；3(1) :47-53)。专利技术概述本专利技术人已发现，通过将测定结果与来自同一测试对象的apoE4基因分型数据相结合，可以改善针对非神经元细胞G1/S之细胞周期调控缺陷的测定在诊断活体对象中的阿尔茨海默症的应用(最初描述于WO 02/073212中)，从而基于该结合结果获得新的诊断标准。因此，根据本专利技术的第一方面，提供了获得人对象阿尔茨海默症相关诊断标准的方法，该方法包括i)筛查人对象中至少一个非神经元细胞中是否存在G1/S期转换的细胞周期调控缺陷，ii)确定同一对象的apoE4基因型，以及iii)将步骤ii)获得的结果与步骤i)获得的结果相结合，从而获得与阿尔茨海默症相关的诊断标准。在一个实施方案中，步骤i)和步骤ii)的结果通过将所述结果作为变量输入统计学算法(或诊断预测工具)中来“结合”，从而获得概率值，该概率值即为与阿尔茨海默症相关的诊断标准。根据本专利技术的第二方面，提供了提高筛查阿尔茨海默症相关细胞周期调控缺陷之存在情况的准确性的方法，该方法包括i)筛查对象中至少一个非神经元细胞中是否存在G1/S期转换的细胞周期调控缺陷，ii)确定同一对象的apoE4基因型，以及iii)将步骤ii)获得的结果与步骤i)获得的结果相结合，从而与步骤i)获得的结果相比，通过结合获得的结果的准确性提高。在一个相关的方面，本专利技术提供了提高基于筛查阿尔茨海默症相关细胞周期调控缺陷之存在的诊断预测的准确性的方法，该方法包括i)筛查对象中至少一个非神经元细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.07.16 GB 0912394.41.获得人对象中阿尔茨海默症相关诊断标准的方法，该方法包括i)筛查人对象中至少一个非神经元细胞中是否存在G1/S期转换的细胞周期调控缺陷， )确定同一对象的apoE4基因型，以及iii)将步骤ii)获得的结果与步骤i)获得的结果相结合，从而获得与阿尔茨海默症相关的诊断标准。2.提高筛查阿尔茨海默症相关细胞周期调控缺陷之存在情况的准确性的方法，该方法包括i)筛查对象中所述对象之至少一个非神经元细胞中是否存在G1/S期转换的细胞周期调控缺陷， )确定同一对象的apoE4基因型，以及iii)将步骤ii)获得的结果与步骤i)获得的结果相结合，从而与所述步骤i)获得的结果相比，结合所得结果的准确性提高。3.评估人对象中发生阿尔茨海默症之风险的方法，该方法包括i)筛查对象中所述对象之至少一个非神经元细胞中是否存在G1/S期转换的细胞周期调控缺陷， )确定同一对象的apoE4基因型，以及iii)将步骤ii)获得的结果与步骤i)获得的结果相结合，从而评估发生阿尔茨海默症的风险。4.根据权利要求3的方法，其中步骤iii)包括将所述步骤i)的结果和步骤ii)的结果作为变量输入统计学算法中，以计算出所述对象发生阿尔茨海默症之风险的概率值。5.根据权利要求3或权利要求4的方法，其中所述人对象不具有阿尔茨海默症的症状或者表现出轻度认知功能障碍。6.辅助临床诊断活体人对象中的阿尔茨海默症的方法，该方法包括i)筛查对象中所述对象之至少一个非神经元细胞中是否存在G1/S期转换的细胞周期调控缺陷， )确定同一对象的apoE4基因型，以及iii)将步骤ii)获得的结果与步骤i)获得的结果相结合。7.根据权利要求6的方法，其中步骤iii)包括将所述步骤i)的结果和步骤ii)的结果作为变量输入统计学算法中，以计算出所测试对象患有阿尔茨海默症的概率值。8.根据权利要求6或权利要求7的方法，其中待测试的所述人对象表现出一种或更多种符合阿尔茨海默症的症状。9.根据权利要求8的方法，其中所述符合阿尔茨海默症的症状包括认知能力下降或痴呆。10.评估候选疗法在接受该疗法的人对象中治疗阿尔茨海默症之效力的方法，该方法包括i)测定所述对象之至少一个非神经元细胞中G1/S期转换细胞周期调控缺陷的程度， )确定同一对象的apoE4基因型，以及iii)将步骤ii)获得的结果与步骤i)获得的结果相结合，从而获得所述候选疗法用于治疗阿尔茨海默症之效力相关的诊断标准。11.获得指示人对象由阿尔茨海默症引起之认知能力下降的可能速度的预后标准的方法，该方法包括i)测定所述对象之至少一个非神经元细胞中是否存在G1/S期转换的细胞周期调控缺陷，或者测定其程度...

【专利技术属性】
技术研发人员：兹苏桑纳·纳吉，
申请(专利权)人：伯明翰大学，
类型：发明
国别省市：