预防大棚黄瓜重茬病益生菌菌剂的制备方法技术

本发明专利技术属于微生物发酵，特别是指一种预防大棚黄瓜重茬病益生菌菌剂的制备方法。包括发酵步骤，是将益生菌剂的生产菌种接种于含有碳源、氮源、无机盐和水的无菌培养基中进行发酵，发酵过程是在温度为30-37℃、pH值7.2-7.6的条件下进行的好氧发酵，生产菌种选用枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、贝雷丝孢酵母、淡紫拟青霉、细黄链霉菌、多粘芽孢杆菌和金龟子绿僵菌的等质量混合物，对发酵终产物吸附、固定化于草炭上制成益生菌菌剂。本发明专利技术解决了现有大棚蔬菜-黄瓜种植技术存在的重茬病、根腐病、枯萎病以及线虫病害等不足，具有生产成本低、发酵周期短、菌群密度高，可有效防止在大棚蔬菜种植过程中的死苗、黄苗、枯萎、花叶、根腐等土壤生态病状。同时，还能促进根生长、松土壮苗，降解农药、化肥残留，具有显著土壤生态修复作用。大棚黄瓜一季内可增产15-20％。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物发酵，特别是指一种能够。
技术介绍
在大棚蔬菜大量种植的今天，由于大量使用化肥、农药，使得土壤生态系统受到严重破坏，再加上经济利益的驱使重茬种植普遍盛行，更使得土壤生态系统难以修复。近些年在大棚蔬菜的种植中各种病害、虫害增加，如根腐病、黄苗、花叶、枯萎病以及线虫虫害等， 都是土壤生态系统遭受破坏的明证。为了改变这种现状，就必须从修复土壤生态系统入手， 增加土壤中的有益菌，从而抑制那些容易感染植株病害的细菌和真菌。采用细菌-真菌联合、多菌种联合的技术方法，达到修复土壤生态系统，防止根腐病、枯萎病等重茬病，同时促进根生长，松土壮苗。益根生菌剂还具有降解农药、化肥残留污染的作用。菌剂经发酵工程完成后有效活菌数(cfu)在20亿以上即2-3X108cfu/g。采用细菌-真菌联合预防大棚黄瓜重茬病益根生菌菌剂及其高密度、高活性的生产工艺还未见报道。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种高密度、高活性的预防大棚黄瓜重茬病益生菌菌剂制备方法。本专利技术的技术设计构思是抗重茬益生菌菌剂的制备方法，包括发酵步骤，是将菌剂生产的菌种接种于含有碳源、氮源、无机盐和水的灭菌培养基中进行发酵，所述的发酵过程是在温度为30-37 °C、pH值为7. 2-7. 6的条件下进行的好氧发酵，生产菌种选用枯草芽孢杆菌 CGMCC1. 1700(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌CGMCC1. 91 (Bacillus licheniformis)、贝雷丝孢酵母 CGMCC2. 1193( — ACCC20055) (Trichosporon behrendii)、淡紫拟青霉 CGMCC3. 4034(Paecilomyces lilacinus)、细黄链霉菌 CGMCC4. 891(Sti^ptomyces microflavus)、多粘芽孢杆菌 CGMCC1. 516 (Paenibacillus polymyxa)和金龟子绿僵菌 CGMCC3. 5672 (Metarhizium anisopliae)的等质量混合物，对发酵终产物吸附、固定化于载体上制成的菌剂。本专利技术中所用菌种均购于中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)中国科学院微生物研究所。培养基以可溶性淀粉培养基(可溶性淀粉20. Og，硝酸钾1. Og，磷酸氢二钾0. 5g， 硫酸镁0. 5g，氯化钠0. 5g，硫酸亚铁0. Olg,蒸馏水IOOOmL, pH值7. 2-7. 4)为基本培养基， 其中碳源选用玉米粉或可溶性淀粉中的一种，氮源选用可溶性淀粉与硝酸盐的混合或玉米粉与硝酸盐的混合中的一种。灭菌培养基中还添加占培养基总质量0. 5%的腐植酸。所述的发酵过程包括下列工艺步骤A、将保存的各斜面菌种先用平板划线法活化后，挑取单菌落，分别经试管、三角瓶扩大培养制成一级种子(每株菌各300mL)；B、将A步骤中制备的一级种子进行等质量混配，对混配后的种子液进行二级扩大培养制成二级种子；C、将B步骤中制备的二级种子转接于三级扩大培养液以5%-10%的接种量接入发酵培养基进行好氧发酵制成发酵终产物；其中步骤B的发酵培养基采用可溶性淀粉培养基，发酵培养基中的可溶性淀粉采用等质量的玉米粉替代，发酵培养基中加入占培养基总质量0.5%的腐植酸；发酵过程中培养温度为30-37°C、pH值为7. 2-7. 6、发酵时间为12_24h、通风量为8-10m3/h、搅拌转速为 200-300r/mino所述的A步骤一级种子的制备过程中的培养基采用可溶性淀粉培养基，培养基的 pH值为7. 2-7. 6 ；培养条件为温度为30-37°C、发酵时间为12_Mh，转速为300r/min。所述的A步骤中的培养基的灭菌条件是压力为0. IMpa,温度为121°C、时间 30mino所述的B步骤中的二级扩大培养培养基采用可溶性淀粉培养基，发酵培养基中的可溶性淀粉采用等质量的玉米粉替代，发酵培养基中加入占培养基总质量0. 5 %的腐植酸；发酵过程中培养温度为30_37°C、pH值为7. 2-7. 6、发酵时间为12_Mh、通风量为 8-10m3/h、搅拌转速为 200-300r/min。所述的C步骤中的三级扩大培养培养基采用可溶性淀粉培养基，发酵培养基中的可溶性淀粉采用等质量的玉米粉替代，发酵培养基中加入占培养基总质量0. 5 %的腐植酸；发酵过程中培养温度为30_37°C、pH值为7. 2-7. 6、发酵时间12_Mh，通风量为 8-10m3/h、搅拌转速为 200-300r/min。为能给所培养的菌群提供一定的营养成分，还由于其网状结构，具有较大的比表面积，所以能在单位体积内附着、吸附固定化较多的菌体。优选的实施方案是，所述的载体选用占发酵终产物总质量4-5倍的草炭。为减少菌群的耗氧，延长保质期，防止污染。优选的实施方案是将吸附、固定化于草炭上制成的益生菌菌剂密封包装。其中更为优选的技术方案是密封包装是将益生菌菌剂密封于内衬聚乙烯的包装袋内。本专利技术中各个反应步骤中培养基的灭菌采用常规灭菌方法，即压力为0. IMpa，温度为121°C，灭菌时间为30min。本专利技术所取得的实质性特点和显著的技术进步在于1、在二、三级扩大培养时采用以可溶性淀粉培养基为主的培养基对混合后的菌种实现培养，大大降低了成本，缩短了发酵周期，提高了设备利用效率。2、经检测，将发酵终产物(复合菌)固定化于草炭上，每克菌制剂的有效菌菌落数 (cfu)可高达20亿以上(即2-3X109cfu/g)，至今还未见如此高含菌量菌制剂的报道。草炭不仅能为所培养菌提供一些营养成分，还由于其网状结构，具有较大的比表面积，所以能在单位体积内附着、吸附固定较多的菌体。因此，一定量的有效菌菌剂一旦均勻加入黄瓜根围土壤中就可以很快形成优势菌群，发挥抗重茬、益根生的作用。3、因土壤生态系统复杂，单一的菌或少量的菌是难以完成生态修复的。必须由细菌-真菌联合、多种菌联合，产生多种酶才能最终降解农药、化肥残留，达到松土状苗、促根生长、抗重茬病的目的。具体实施方式 以下结合实施例对本专利技术作进一步描述，但不作为对本专利技术的限定，本专利技术的保护范围以权利要求记载的内容为准。实施例1益根生菌剂的制备方法，包括发酵步骤，是将菌剂的生产菌种接种于含有碳源、氮源、无机盐和水的灭菌培养基中进行发酵，所述的发酵过程是在温度为30-37°C、 PH值为7. 2-7. 6的条件下进行的好氧发酵，生产菌种选用枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌 CGMCC1. 1700 (Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌 CGMCC1. 91 (Bacillus licheniformis)、 贝雷丝孢酵母 CGMCC2. 1193( — ACCC20055) (Trichosporon behrendii)、淡紫拟青霉 CGMCC3. 4034(Paecilomyces liliacinus)、细黄链霉菌 CGMCC4. 891 (Streptomyces microflavus)、多粘芽孢杆菌 CGMCC1. 516 (Paenibacillus polymyxa)和金龟子绿僵菌 CGMCC3. 5672 (Metarhizium anisopliae)的等质量本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张清敏，刘志军，李明，李萍，陈亚肖，魏惠，
申请(专利权)人：石家庄金太阳生物有机肥有限公司，
类型：发明
国别省市：