病毒感染的治疗制造技术

本发明专利技术涉及来自apoE141-149的串联重复的多肽和它们作为药物的用途。所述肽包含串联重复和其平截，所述肽的至少一个亮氨酸(L)被具有包含至少4个碳原子和至少一个氮原子的侧链的氨基酸替代。此类肽可以用于预防或治疗病毒感染。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
病毒感染的治疗本申请是国际申请日2004年12月17日，国际申请号PCT/GB2004/005360，进入中国国家阶段日期2006年6月19日，中国国家申请号200480037908. 4，专利技术名称为“病毒感染的治疗”的分案申请。本专利技术涉及具有抗病毒活性的多肽、其衍生物或者类似物，还涉及编码所述多肽、 其衍生物或者类似物的核酸。本专利技术还提供了此类多肽、衍生物、类似物或者核酸作为药物的用途以及在治疗方法中的用途。抗病毒剂可以靶向病毒复制周期的6个阶段之一，这些阶段为0.病毒对细胞的附着；0.渗透(或者病毒膜与细胞膜的融合)；0.病毒的脱壳；0.病毒核酸的复制；0.子代病毒颗粒的成熟；和0.子代病毒向细胞外流体的释放。这6个阶段中，复制(上面的阶段4)是靶标，其通过常规抗病毒治疗可以最有效地影响。然而，可以论证病毒向细胞的附着是更吸引人的靶标，因为试剂不需要进入宿主细胞。然而，在该领域中还没有研发成功的疗法。因此本专利技术的一个目的是提供调节病毒向细胞的附着的治疗剂。脂蛋白(LP)是存在于血清和其他细胞外流体中的球形大分子复合体，由脂类和蛋白质组成，并且涉及脂类在身体周围的运输。已经将它们根据它们的密度分类，主要的类别是高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、和极低密度脂蛋白(VLDL)。它们的蛋白质称作载脂蛋白，并且已经描述了许多载脂蛋白，包括载脂蛋白A、B、C、D、E、F、G、H和J。此外，已经记载了载脂蛋白A、B和C的一些亚型。已经描述了将LP与病毒结合的多种相互作用。这些相互作用多数涉及病毒对脂蛋白的结合，这导致减小的病毒感染性，或者相反地，提供了病毒进入细胞的“搭车”方法。 此外，一些病毒利用LP的细胞受体(例如，LDL受体)作为进入细胞的工具，尽管这些受体也可以被细胞作为内源抗病毒剂释放(例如，VLDL受体的可溶性形式被HeLa细胞释放到培养基中并且抑制人鼻病毒感染)。此外，也已经报导了某些载脂蛋白和病毒蛋白质之间的直接结合。例如a.丙型肝炎病毒核心蛋白质结合载脂蛋白AII ；b.乙型肝炎病毒表面抗原结合载脂蛋白H;和c.猿猴免疫缺陷病毒(SIV) gp32蛋白质和人免疫缺陷病毒(HIV)gp41蛋白结合载脂蛋白Al。在专利技术人的实验室中进行的工作表明脑中存在潜伏的1型单纯疱疹病毒(HSVl) 和具有特定基因的特定等位基因-APOE基因的AP0E-e4等位基因增加了患阿尔茨海默氏病 (AD)的危险。考虑到还发现AP0E-e4携带者更可能患感冒疮(其是外周神经系统中HSVl 的再活化后发现的病变)，这些结果提示AP0E-e4携带者更可能遭受HSVl感染造成的伤害，并且提示在载脂蛋白E和某些病毒之间可能存在相互作用(尽管此类相互作用不必一定涉及抗病毒效应)。HSVl和apoE之间的一种可能的作用方式涉及如下的独立发现它们都使用细胞硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG)分子作为它们对细胞的最初结合位点，随后附着到二级受体，其引起在含有LP的HSVl和apoE之间这些HSPG位点发生竞争的可能性，这将影响病毒进入。已经表明载脂蛋白E影响免疫系统(似乎与它在脂类代谢中的角色无关)，包括抑制T淋巴细胞增殖。已经检查了来自apoE的残基130-169的许多肽与淋巴细胞之间的相互作用。(Clay et al.，Biochemistry，34 11142-11151 (1995))。预测由 apoE 残基 141-149 组成的区域尤其重要。已经描述了神经元细胞系中此类肽的相似的相互作用。WO 94/04177公开使用含有脂类和两亲性螺旋肽的颗粒允许清除微生物产生的毒素，并且可以通过对细菌细胞膜的影响增加抗细菌药物的有效性。然而，没有提出含有此类 apoA衍生的肽的颗粒可以用作抗病毒药物。也不清楚颗粒中肽的施用是否将导致有效利用该颗粒的任一组分的抗病毒作用，所述颗粒中的肽是所公开的研发中的关键成分(所述颗粒可以在使用前形成或是内源地形成)。已经表明来自apoA的两亲性螺旋肽(Ananatharamiah在Meth. Enz.，128 627-647(1986)中描述)防止病毒膜与细胞膜的融合，并且还防止受感染的细胞膜的融合 (Srinivas et al. J. Cellular Biochem.，45 :224-237 (1991))。该肽在防止 HSVl 和 HIV 的融合方面也是有效的(Owens et al.，J Clin. Invest. ,86 :1142-1150 (1990))。然而，所述肽至少对于HSVl对细胞的附着是无效的(Srinivas et al.上文)。Azuma等人已经报导与庆大霉素相比，apoE的肽衍生物具有强烈的抗细菌作用 (Peptides, 21 :327-330 (2000)) ApoE 133-162 最有效，apoE134_155 几乎无效。按照上述研究，专利技术人进行实验来评估来自ApoE的肽(其能够形成螺旋)是否具有抗病毒活性。他发现ApoE的肽片段apoE141_149的串联重复(即，2 X LRKLRKRLL-SEQ ID No. 1)实际上具有抗病毒作用。而本专利技术人不希望被任何假说束缚，他认为该片段防止病毒颗粒对细胞的附着，导致如通过噬菌斑减小测定技术测量的病毒的感染性减小。实施例1 阐明了所述肽对诸如HSV1、HSV2和HIV的病毒是多么有效。因此，该肽当直接应用于病毒， 或者当在细胞存在下应用于病毒时是有效的，并且因此该肽可以用于在病毒到达它们的靶细胞很久前灭活游离的病毒颗粒。按照对apoE141_149的串联重复(即2 X LRKLRKRLL-SEQ ID No. 1)产生的数据，专利技术人决定研究载脂蛋白的其他片段的抗病毒活性。根据本专利技术的第一方面，提供了包含SEQ ID No. 2的apoE141_149的串联重复或者其平截的多肽、其衍生物或者类似物，其特征是将SEQ ID No. 2的至少一个亮氨酸(L)残基用具有包含至少4个碳原子和至少一个氮原子的侧链的氨基酸替代。"SEQ ID No. 2 的 apoE141_149 的串联重复”指具有氨基酸序列LRKLRKRLLLRKLRKRLL 的肽。串联重复在这里指apoE141_149dp或者apoEm舰。将该肽也分配代码Gim或者 Gmip (其中ρ表示N末端保护(例如，通过乙酰基)，和C末端保护(例如，通过酰胺基))。“其平截”指通过除去氨基酸减小SEQ ID No. 2的18聚体的大小。氨基酸的减少可以通过从肽的C或者N末端除去残基或者可以通过从肽的核心(即，SEQ ID No. 2的氨基酸2-17)缺失一个或多个氨基酸来完成。“其衍生物或类似物”指将氨基酸残基用具有相似侧链或者肽主链性质的残基(天然氨基酸、非天然氨基酸或者氨基酸模拟物)替代。此外，此类肽的末端可以通过用与乙酰基或者酰胺基有相似性质的N和C-末端保护基保护。本专利技术人进行了详尽的实验来评估来自载脂蛋白的肽和其衍生物的抗病毒活性。 来自ApoE的肽和衍生物尤其是焦点。令专利技术人惊奇的是，他们发现所测试的多数肽几乎没有或者没有抗病毒作用。令人惊奇的例外是根据本专利技术的第一方面的肽。实施例2-7阐明了与apoE141_149的串本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．包含ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．２的ａｐｏＥ１４１－１４９的串联重复或者其平截的多肽、其衍生物或者类似物，其特征是将ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ．２的至少一个亮氨酸（Ｌ）残基用具有包含至少４个碳原子和至少一个氮原子的侧链的氨基酸替代。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：C·多布森，
申请(专利权)人：AI二有限公司，
类型：发明
国别省市：GB