布氏白僵菌杀虫剂的生产方法及其用途技术

本发明专利技术涉及了一种蛴螬专用白僵菌杀虫剂的生产方法及其用途。该方法是利用本发明专利技术人从蛴螬危害严重地区采集罹病虫尸，分离纯化并进行筛选，得到布氏白僵菌Ｄ５菌株采用液体培养法进行白僵菌杀虫剂的生产，其特点是本法适应工业化大生产的目的，生产周期短，产品质量稳定，该产品对蛴螬杀虫效果显著。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

Production method and use of Beauveria bassiana insecticide

The invention relates to a production method and application of special insecticide Beauveria bassiana grub. This method is the use of the collected from pest serious inventor from the corpse grubs, purified and screened by Beauveria brongniartii strain D5 by liquid culture method of Beauveria bassiana insecticide production, which is characterized by the law to adapt to the industrialized production, short production cycle, stable product quality, the product of significant insecticidal effect of grub.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及制品的贮存、运输及注意事项贮存应选择干燥、通风、避光场所。常温贮存不超过半年，超过半年使用的必须要放于4℃处冷藏。运输中应防潮、防晒、防高温(低于35℃)。禁止与杀菌剂混用。本专利技术从蛴螬危害严重地区采集罹病虫尸，分离纯化并进行筛选，得到布氏白僵菌D5(CGMCC NO.0737)菌株，对大黑鳃金龟幼虫毒力最高，达93.1％，产孢量比出发菌株提高了2.8倍。发酵周期只有48～72h，克服了现已用于生产白僵菌杀虫剂生产周期长的缺点，而且本专利技术所述的生产方法具有工业化规模生产的特点。再有就是本专利技术所涉及的杀虫剂产品具有对蛴螬杀灭的专用性。附图说明图1 布氏白僵菌D5(CGMCC NO.0737)菌株生产工艺流程②用凹凸棒营养土(25％黄豆粉，25％玉米粉；50％凹凸棒土作为载体，与菌液混匀后造微粒。包衣粉剂30％面粉，20％玉米粉，50％凹凸棒土，与菌液混匀后干燥，查看包衣效果，恢复产孢效果和孢子分散效果。7产品贮存产品干燥至含水量4％～6％。隔氧膜包装封口后常温贮存。实验1对花生蛴螬的防治效果施菌方法分为播种期施菌将布氏白僵菌D5(CGMCC NO.0737)菌株用本专利技术制成的菌粉和定量的土混匀，花生播种时同种子一起施入土穴中。中耕期施菌在中耕期将布氏白僵菌D5(CGMCC NO.0737)菌株用本专利技术制成的菌粉和定量的土混匀(菌土法)，均匀撒到花生根际附近，再将菌粉搂入土中或将菌粉混于水中，泼到花生根部(水泼法)。池栽试验 在1的无底水泥池中播种花生，出苗后将多余的苗拔掉，使每池中苗数相等。按规定剂量和时期施菌。待蛴螬至2龄初，按5头/m2的虫量接入池内，秋后调查活虫数和花生被害果数。不同施菌期结果表明，中耕期防治效果优于播种期，当施菌计量为每公顷75万亿孢子时，在中耕期施菌大黑金龟子(蛴螬成虫)幼虫死亡率为93.3％，而播种期施菌大黑金龟子幼虫死亡率为66.6％，差异显著。不同施菌剂量结果表明，在播种期施菌，施菌剂量需150万亿孢子/hm2以上时才有理想的防治效果，而在中耕期施菌75万亿孢子/hm2菌药(+1.2kg甲基异柳磷)混用或单用菌均可达到理想的防治效果(虫果减退率可达90％)。田间试验 选择蛴螬虫口基数较一致，危害中等的地块，采用不同施菌时期、剂量、施菌方式进行防治试验。结果表明中耕期防治效果优于播种期，与池栽试验结果一致。在中耕期施菌剂量为150万亿孢子/hm2或75万亿孢子+1.2kg甲基异柳磷/hm2时可获得80％的防治效果。菌药混用可降低菌的用量，提高防治效果。在中耕期，使用菌土法和水泼法两种施菌方式防治效果均较理想，无明显差异。权利要求1.一种蛴螬专用白僵菌杀虫剂的生产方法，其特征主要包括以下几个步骤(1)将D5原始生产菌株，一种布氏白僵菌-Beauveria bringniartii，已于2002年4月17日保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其简称为CGMCC，保藏编号为CGMCCNO.0737，均匀接入斜面培养基上，置在26℃±1℃的培养箱中培养培养7～10d，分生孢子产生良好时取出，可作生产用斜面菌种。(2)将斜面菌种中加入液体培养基或灭菌水洗下培养物成菌悬液。(3)在摇瓶及种子罐中用液体培养法将种子放大培养至发酵罐培养所需种子液的量，罐装系数70％。发酵控制条件罐压0.2kg/cm2，通气量按v/v/min计为1∶1，罐温27℃±1℃，培养时间为36h，菌丝量大，菌液变稠，有少量芽生孢子形成，无污染，可作为种子液。(4)实罐消毒和管道消毒在发酵罐进行实罐消毒的同时，进行种子罐与发酵罐接种管道的消毒，消毒时微开管道上各有关排气阀门，务必使整条管道畅通，不成死角，调节进气阀至管内压力1.2kg/cm2，保压30min，然后自前至后依次关闭各进气阀，冷却待用。通过两罐压差，将合格的二级液种按1∶10的比例压到发酵罐，压种毕迅速关闭两罐出料阀，然后调节好罐压力和进、排气阀，开动搅拌、进行培养。培养搅拌速度200r/min，罐温27℃±1℃，罐内压力0.5kg/cm2，通气量按v/v/min计为1∶0.7。培养48～72h。发酵到24～36h大量形成芽生孢子时，补充葡萄糖1％、乳糖0.3％、硼酸0.02％、磷酸二氢钾0.3％、甘油4％，在培养中每隔4h抽样检查一次。(5)发酵液大量产孢时即菌丝80％以上均转化为芽生孢子时放罐。发酵结束时添加经灭菌处理的固体填料硫酸铜及助剂麦麸。添加助剂及填料后含水量20％～30％。(6)生产菌种斜面培养基配方蔗糖2％，酵母粉0.5％，鱼蛋白胨0.5％，硫酸铜0.005％，硫酸锌0.005％，硫酸亚铁0.005％，棉仁粉0.5％，米粉0.5％，硼酸0.01％，硫酸锰0.002％，乳糖0.3％，琼脂2％。(7)液体培养基配方蔗糖2％，酵母粉0.5％，鱼蛋白胨0.5％，硫酸铜0.005％，棉仁粉0.5％，米粉1％，硫酸镁0.1％，硫酸亚铁0.005％，磷酸二氢钾0.2％。2.权利要求1所述蛴螬专用白僵菌杀虫剂的生产方法，其特征为其生产菌株是一种布氏白僵菌-Beauveria bringniartii D5菌株已于2002年4月17日保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其简称为CGMCC，保藏编号为CGMCC NO.0737。3.权利要求1所述蛴螬专用白僵菌杀虫剂的生产方法，其特征为所述的生产方法还包括将发酵后发酵液加工成颗粒剂、粉粒剂、微粒剂和包衣粉剂。全文摘要本专利技术涉及了一种蛴螬专用白僵菌杀虫剂的生产方法及其用途。该方法是利用本专利技术人从蛴螬危害严重地区采集罹病虫尸，分离纯化并进行筛选，得到布氏白僵菌D5菌株采用液体培养法进行白僵菌杀虫剂的生产，其特点是本法适应工业化大生产的目的，生产周期短，产品质量稳定，该产品对蛴螬杀虫效果显著。文档编号A01N63/04GK1395839SQ0211678公开日2003年2月12日 申请日期2002年5月13日 优先权日2002年5月13日专利技术者邓春生, 张燕荣, 蒋海霖 申请人:中国农业科学院生物防治研究所本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛴螬专用白僵菌杀虫剂的生产方法，其特征主要包括以下几个步骤：（１）将Ｄ５原始生产菌株，一种布氏白僵菌－Ｂｅａｕｖｅｒｉａ ｂｒｉｎｇｎｉａｒｔｉｉ，已于２００２年４月１７日保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其简称为ＣＧＭＣＣ，保藏编号为ＣＧＭＣＣ ＮＯ．０７３７，均匀接入斜面培养基上，置在２６℃±１℃的培养箱中培养培养７～１０ｄ，分生孢子产生良好时取出，可作生产用斜面菌种。（２）将斜面菌种中加入液体培养基或灭菌水洗下培养物成菌悬液。（３）在摇瓶及种子罐中用液体培养法将种子放大培养至发酵罐培养所需种子液的量，罐装系数：７０％。发酵控制条件：罐压０．２ｋｇ／ｃｍ↑［２］，通气量按ｖ／ｖ／ｍｉｎ计为１∶１，罐温２７℃±１℃，培养时间为３６ｈ，菌丝量大，菌液变稠，有少量芽生孢子形成，无污染，可作为种子液。（４）实罐消毒和管道消毒；在发酵罐进行实罐消毒的同时，进行种子罐与发酵罐接种管道的消毒，消毒时微开管道上各有关排气阀门，务必使整条管道畅通，不成死角，调节进气阀至管内压力１．２ｋｇ／ｃｍ↑［２］，保压３０ｍｉｎ，然后自前至后依次关闭各进气阀，冷却待用。通过两罐压差，将合格的二级液种按１∶１０的比例压到发酵罐，压种毕迅速关闭两罐出料阀，然后调节好罐压力和进、排气阀，开动搅拌、进行培养。培养：搅拌速度２００ｒ／ｍｉｎ，罐温２７℃±１℃，罐内压力０．５ｋｇ／ｃｍ↑［２］，通气量按ｖ／ｖ／ｍｉｎ计为１：０．７。培养４８～７２ｈ。发酵到２４～３６ｈ大量形成芽生孢子时，补充葡萄糖１％、乳糖０．３％、硼酸０．０２％、磷酸二氢钾０．３％、甘油４％，在培养中每隔４ｈ抽样检查一次。（５）发酵液大量产孢时即菌丝８０％以上均转化为芽生孢子时放罐。发酵结束时添加经灭菌处理的固体填料硫酸铜及助剂麦麸。添加助剂及填料后含水量２０％～３０％。（６）生产菌种斜面培养基配方：蔗糖２％，酵母粉０．５％，鱼蛋白胨０．５％，硫酸铜０．００５％，硫酸锌０．００５％，硫酸亚铁０．００５％，棉仁粉０．５％，米粉０．５％，硼酸０．０１％，硫酸锰０．００２％，乳糖０．３％，琼脂２％。（７）液体培养基配方：蔗糖２％，酵母粉０．５％，鱼蛋白胨０．５％，硫酸铜０．００５％，棉仁粉０．５％，米粉１％，硫酸镁０．１％，硫酸亚铁０．００５％，磷酸二氢钾０．２％。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：邓春生，张燕荣，蒋海霖，
申请(专利权)人：中国农业科学院生物防治研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]